簡介：鷺南大學(xué)周面匕學(xué)位論文題名中英對照白馬骨的化學(xué)成分及生物活性研究‘女‘作者姓名馮順卿指導(dǎo)教師姓名岑穎洲及學(xué)位、職稱李藥蘭博士教授在讀博士副教授學(xué)科、專業(yè)名稱分析化學(xué)論文提交日期年月論文答辯日期年月答辯委員會主席沐多寸殲論文評閱人樹振奔、九咆學(xué)位授予單位和日期暨南大學(xué)，年月暨南大學(xué)碩士畢業(yè)論文摘要本課題對瑤族藥白馬骨的化學(xué)成分，以及抑菌和小鼠體內(nèi)護(hù)肝等部分生物活性進(jìn)行了研究。采用真空柱層析、加壓柱層析、薄層層析、重結(jié)晶等分離純化手段，從白馬骨的乙醇提取物中分離得到五個化合物。其中三個化合物經(jīng)紅外、核磁共振、質(zhì)譜等波譜手段分別鑒定為烏索酸、，一二輕基一一甲基蔥醒以及，，，一四甲氧基蕙醒。其余兩個化合物正在結(jié)構(gòu)推導(dǎo)中。備醇混合物通過氣一質(zhì)聯(lián)用一技術(shù)分離鑒定為膽街醇、麥角韶一，一二烯一一醇、一甲基膽多醇、豆帶醇、谷幽醇。其中豆街醇、一谷譽醇為主要成分，分別占、。采用水蒸氣蒸餾法從白馬骨中提取其揮發(fā)性成分，通過氣一質(zhì)聯(lián)用一技術(shù)對所提取的揮發(fā)性化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定，共測定了其中的種成分，已成功鑒定的成分占樣品總量的。采用肉湯稀釋法測定白馬骨部分樣品對大腸埃希氏菌等種細(xì)菌的最低抑菌濃度。結(jié)果表明，白馬骨大部分供試樣在實驗濃度范圍內(nèi)對所有供試菌種沒有明顯的抑菌活性。采用四氯化碳致小鼠急性肝損傷模型，以小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)移酶、谷草轉(zhuǎn)移酶、肝組織脂過氧化物丙二醛為指標(biāo)，研究白馬骨水提液對小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。實驗結(jié)果表明，白馬骨水提液具有良好的護(hù)肝作用，能明顯降低小鼠血清中和的活性，但沒有降低的水平。結(jié)果初步分析其護(hù)肝機理可能不是由于抗自由基的作用。關(guān)鍵詞白馬骨，化學(xué)成分，揮發(fā)性，抑菌，四氯化碳，急性肝損傷

簡介：目的1通過觀察體外培養(yǎng)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞UMBILICALCDBLOODMESENCHYMALSTEMCELLS，UCBMSCS并作誘導(dǎo)成骨分化，探討其作為組織工程的骨種子細(xì)胞的可行性。2通過建立混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系模擬成骨分化的UCBMSCS移植入體內(nèi)的免疫微環(huán)境條件，并觀察在不同免疫微環(huán)境條件下成骨分化的UCBMSCS免疫相關(guān)膜蛋白的表達(dá)與可溶性細(xì)胞因子的分泌水平，研究成骨分化UCBMSCS產(chǎn)生免疫原性的相關(guān)機制。方法體外分離培養(yǎng)UCBMSCS，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)及其變化規(guī)律體外成骨誘導(dǎo)人UCBMSCS2周，采用ALIZARINRED染色和鈣離子半定量測定的方法評價細(xì)胞成骨活性。取P2代UCBMSCS細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測加入IFNΓ前后的HLAⅠ、HLAⅡ、CD40、CD80等分子的表達(dá)情況流式細(xì)胞儀檢測UCBMSCS在成骨誘導(dǎo)分化前后HLAⅠ類分子、HLAⅡ類分子的表達(dá)情況以觀察成骨誘導(dǎo)分化的MSCS免疫抗原性的變化。體外分離外周血T淋巴細(xì)胞，成骨分化與未分化的UCBMSCS分別與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，模擬移植入宿主體內(nèi)的未激活狀態(tài)的免疫微環(huán)境，3HTDR摻入法檢測IFNΓ刺激前后的異體淋巴細(xì)胞增殖情況，以評測成骨分化前后的UCBMSCS對異體淋巴細(xì)胞增殖的影響。建立隔離腔TRANSWELL非接觸共培養(yǎng)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)體系，評價成骨誘導(dǎo)分化前后的UCBMSCS對淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。ELISA定量檢測培養(yǎng)上清中IFNΓ和IL4的含量，觀察成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS對IFNΓ、IL4分泌水平的影響。結(jié)果第1、3、5代細(xì)胞的CD29、CD105和CD166均呈陽性表達(dá)，而造血細(xì)胞系的表面標(biāo)記CD31、CD34和CD45則呈低表達(dá)，且隨傳代次數(shù)增加含量逐漸下降。UCBMSCS成骨誘導(dǎo)2周后，ALIZARINRED染色為陽性。對照組則無明顯鈣鹽沉積。鈣離子半定量的檢測結(jié)果則表明，UCBMSCS成骨誘導(dǎo)2周后的鈣離子含量遠(yuǎn)高于未誘導(dǎo)組。流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示，人UCBMSCS高表達(dá)HLAⅠ類分子，不表達(dá)HLAⅡ類分子和CD40，CD80等共刺激分子經(jīng)IFNΓ刺激誘導(dǎo)后，HLAⅠ類分子的表達(dá)未發(fā)生改變，HLAⅡ類分子呈陽性表達(dá)，而CD40和CD80的表達(dá)仍為陰性。人UCBMSCS在成骨誘導(dǎo)分化前后HLAⅠ類分子均為陽性表達(dá)而HLAⅡ類分子在成骨分化前為陰性，誘導(dǎo)后陽性表達(dá)率增高。UCBMSCS單向刺激淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的結(jié)果顯示，無論是否有HLAⅡ類分子的表達(dá)（IFNΓ的刺激），UCBMSCS對異體淋巴細(xì)胞增殖均有明顯的抑制效果，并且淋巴細(xì)胞的增殖在不同比例的共培養(yǎng)組之間也有顯著性差異。而成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS對淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱（不隨細(xì)胞數(shù)量的改變而改變），并且在IFNΓ作用后，反而有刺激淋巴細(xì)胞增殖的效果。1104及以上數(shù)量級的未誘導(dǎo)UCBMSCS可以抑制PHA刺激的淋巴細(xì)胞增殖，但加入IL2后，這種抑制作用被逆轉(zhuǎn)。而成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS則不具有抑制淋巴細(xì)胞增殖的作用。TRANSWELL共培養(yǎng)實驗結(jié)果表明，與直接接觸培養(yǎng)相似，UCBMSCS能夠顯著抑制淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，而成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS的免疫抑制能力明顯減弱。未誘導(dǎo)UCBMSCS與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)7天，培養(yǎng)液上清中IFNΓ分泌水平下降，IL4含量則顯著上調(diào)。而成骨分化的UCBMSCS與淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)7天后，IFNΓ分泌水平較對照組明顯上調(diào)，IL4含量則沒有未誘導(dǎo)組的高。結(jié)論1UCBMSCS能誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞，有望成為較理想的組織工程骨種子細(xì)胞。2成骨分化UCBMSCS的免疫原性會發(fā)生相應(yīng)變化。3成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS對淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用明顯減弱，在IFNΓ作用后，反而有刺激淋巴細(xì)胞增殖的效果。其機制可能與成骨誘導(dǎo)分化的UCBMSCS促進(jìn)IFNΓ分泌，增強免疫細(xì)胞功能有關(guān)。

簡介：河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師或指導(dǎo)小組的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學(xué)，試驗材料、原始數(shù)據(jù)、河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注等內(nèi)容外，文中不包含其他人已發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨立撰寫，文責(zé)自負(fù)。研究生簽名易坦新粹貉J。汩呻年≥旯B日中文摘要VEGF緩釋微球聯(lián)合顳肌貼敷術(shù)對慢性腦缺血大鼠血管生成的影響摘要目的研究使用聚乳酸羥基乙酸共聚物POLY1ACTIDECOGLYCOLIDE，PLGA制成VEGF緩釋微球，探索其聯(lián)合顥肌貼敷術(shù)對慢性腦缺血大鼠血管生成的影響，為臨床治療煙霧病等慢性腦缺血疾病提供新的思路。方法1緩釋微球的制備及性質(zhì)鑒定采用WI／O／W2復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制作微球；使用掃描電鏡觀察微球的表面形態(tài)結(jié)構(gòu)；采用MICROBCA法測定微球中藥物的載藥量和包封率，并對微球的體外釋藥性能進(jìn)行研究；將用羅丹明標(biāo)記的微球注入大鼠顳肌組織，分別于第10天和第30天取顳肌組織行冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察。2VEGF緩釋微球聯(lián)合顳肌貼敷術(shù)對血管生成的影響采用結(jié)扎雙側(cè)頸內(nèi)動脈及一側(cè)椎動脈的方法制造大鼠慢性腦缺血模型；在造模后第14天，根據(jù)大鼠分組分別行顳肌貼敷術(shù)及緩釋微球注射。各組于顳肌貼敷術(shù)后30天行MORRIS水迷宮實驗，以評價各組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力；水迷宮實驗結(jié)束后，采用激光多普勒血流儀測定顳肌貼敷區(qū)域腦血流量，行大鼠腦血管造影術(shù)，觀察顱內(nèi)外血管情況。造影結(jié)束后處死大鼠，采用免疫組化方法測定大鼠顳肌組織及腦組織的微血管密度，采用蛋白印跡法WESTERNBLOT法測定大鼠顳肌組織及腦組織的0【SMA的表達(dá)情況。結(jié)果1VEFGPLGA緩釋微球的性質(zhì)在掃描電鏡下可觀察到，VEGFPLGA為圓形球體，形態(tài)較一致，表面光滑無孔隙，其粒徑約為410HM；VEGFPLGA微球的平均載藥量和包封率分別為O0255％和8507％。VEGFPLGA微球第一天突釋率平均值為20％，微球在30天內(nèi)能持續(xù)釋放VEGF，20天累積釋藥率可達(dá)80％，整個釋藥過程較為平穩(wěn)；其在組織中可存在較長時間，表現(xiàn)有共聚物的自然降解。2行為學(xué)觀察結(jié)果及腦血流量檢測結(jié)果與3VO組相比，其余各組大鼠的學(xué)習(xí)和記憶潛伏期均明顯縮短，且第35天差異有統(tǒng)計學(xué)意義

簡介：目的應(yīng)用膝關(guān)節(jié)制動的動物模型探討中藥川芎嗪對膝關(guān)節(jié)OA軟骨退變的保護(hù)作用方法24只健康成年家兔隨機分為兩組每組12只動物的右后肢采用膝關(guān)節(jié)伸直位管形石膏制動的方法建立骨性關(guān)節(jié)炎模型實驗組膝關(guān)節(jié)注射川芎嗪03ML每周一次對照組注射03MLNS每周一次在模型建立6W、9W時每組分別取6只動物進(jìn)行SOD、MDA、GAG含量測定并觀察滑膜、軟骨的病理改變結(jié)果實驗組MDA的濃度低于對照組的濃度兩者有顯著性差異（P0059W時對照組GAG的含量明顯上升和正常組及實驗組相比均有顯著性差異（P001實驗組SOD濃度在不同時期均高于對照組（P0056WP0019W）光鏡下觀察實驗組與對照組相比滑膜、軟骨病理改變輕

簡介：目的創(chuàng)傷、骨腫瘤等導(dǎo)致的骨缺損病人不斷增多，骨替代材料需求量大。傳統(tǒng)的骨替代材料例如自體骨、異體骨、人工骨應(yīng)用時有很多不足之處，目前亟需一種擁有高效成骨活性的人工骨替代材料。硫酸鈣具有極好的生物相容性，應(yīng)用于骨缺損的治療已有百年歷史，其不足之處在于生物活性不足。而硅酸鈣及微量元素鍶具有良好的骨誘導(dǎo)效應(yīng)，本研究將這幾種種降解性能不同的生物活性材料復(fù)合，以提高復(fù)合材料的理化性能和骨修復(fù)效應(yīng)，并探討了該復(fù)合材料的制備和理化性能及生物活性。方法本研究復(fù)合了摻鍶硅酸鈣微粒與Α半水硫酸鈣兩種骨替代材料，構(gòu)建出了一種全新的高效的骨重建材料，并研究了復(fù)合材料的表面結(jié)構(gòu)、理化性能和生物相關(guān)性能。采用分析純二水硫酸鈣在95℃以01％的檸檬酸作為轉(zhuǎn)晶劑的15％氯化鈉溶液中加熱攪拌，制得Α半水硫酸鈣。采用濕化學(xué)合成方法，使分析純四水硝酸鈣及8％摩爾比的硝酸鍶和分析純硅酸鈉溶液反應(yīng)，所得沉淀物經(jīng)陳化、洗滌、干燥等工藝后，將粉末置于800℃程控箱式電爐煅燒3小時，球磨4小時，制得硅酸鈣CALCIUMSILICATECSI粉體。二者粉體按照一定比例（硅酸鈣所占質(zhì)量百分?jǐn)?shù)）混合，分成半水硫酸鈣混合0％、5％、10％、20％、35％的硅酸鈣五組，通過加入一定量的無水酒精使之混合均勻，干燥，待用。按液固比05MLG，加入去離子水調(diào)成糊狀后注入磨具中。固化后，置于37℃、100％濕度恒溫水浴搖床內(nèi)養(yǎng)護(hù)24小時，室溫干燥。1半水硫酸鈣粉體、摻鍶硅酸鈣粉體及復(fù)合材料通過XRD對樣品進(jìn)行物相鑒定利用掃描電鏡觀察樣品微觀形貌及微結(jié)構(gòu)。2將復(fù)合材料制成直徑5MM，高10MM的柱狀樣品，并對其進(jìn)行抗壓強度檢測。3通過SEM對樣品表面在模擬體液浸泡前后磷灰石的檢測，來對比研究材料的生物活性。4將樣品浸泡于TRISHCL緩沖液進(jìn)行復(fù)合材料體外降解性能研究。5利用各組材料浸提液培養(yǎng)細(xì)胞，測試材料的細(xì)胞毒性。結(jié)果摻鍶硅酸鈣摻入了可提高生物活性和擁有抗骨質(zhì)疏松效應(yīng)的微量元素，而Α半水硫酸鈣在復(fù)合了一定量的摻鍶硅酸鈣后仍有良好的自我固化效應(yīng)。硅酸鈣復(fù)合入Α半水硫酸鈣阻斷水化后形成的二水硫酸鈣相互之間的連接，從而降低了復(fù)合材料的力學(xué)強度。復(fù)合材料強度最低為1186到1411MPA，接近于人體松質(zhì)骨的強度20100MPA，適宜的力學(xué)強度使摻鍶硅酸鈣及Α半水硫酸鈣復(fù)合材料有望成為前景光明的骨替代材料。由此獲得的復(fù)合材料表現(xiàn)出了優(yōu)良的生物降解性和可觀的抗壓強度。而且，純Α半水硫酸鈣因為缺乏生物活性，在模擬體液中并不能形成類骨羥基磷灰石，而硅酸鈣使得復(fù)合材料可以在一周形成類骨羥基磷灰石，表現(xiàn)出良好的成骨活性。復(fù)合材料摻鍶組的樣品較非摻鍶組，其表面形成的羥基磷灰石結(jié)構(gòu)更加完整，球體形狀更加圓滑。硅酸鈣和鍶的摻入在模擬體液浸泡過程中為類骨羥基磷灰石的形成提供鈣離子結(jié)合位點起到十分重要的作用。在摻入少量的摻鍶硅酸鈣后，新的復(fù)合材料在模擬體液浸泡中類骨羥基磷灰石的沉著比純Α半水硫酸鈣明顯加快，說明復(fù)合材料的生物活性得到顯著地提高。復(fù)合材料的降解較純Α半水硫酸鈣明顯要慢，這歸因于硅酸鈣的降解速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)慢于二水硫酸鈣以及降解過程中硅酸鈣微粒貼附于二水硫酸鈣的表面，減少二水硫酸鈣與浸泡溶液的直接接觸并最終降低降解率。鍶的摻入額外地減弱了材料的降解性能，同時降低了周圍環(huán)境的PH值。鍶是骨組織中含有的微量元素，在促進(jìn)細(xì)胞增殖、骨礦化和提高骨強度方面發(fā)揮著重要的作用。復(fù)合材料的浸提液并未對細(xì)胞產(chǎn)生明顯的毒性作用。細(xì)胞的增殖和形態(tài)均未受到浸提液的負(fù)面影響。復(fù)合材料的離子釋放為細(xì)胞的增殖提高充分的有利刺激，相比純Α半水硫酸鈣，溶液中釋放更多的硅離子以及鍶離子。結(jié)論通過復(fù)合摻鍶硅酸鈣不會改變原材料晶體形態(tài)及材料性質(zhì)。鍶與硅酸鈣的引入使硫酸鈣復(fù)合材料具有良好的生物活性。隨摻鍶硅酸鈣比例的增加，硫酸鈣復(fù)合材料的降解率明顯降低。理論上，降解率可通過改變硅酸鈣比例可控。復(fù)合材料能逐漸釋放CA、SI、SR等成骨活性離子。細(xì)胞實驗表明復(fù)合材料具有良好的生物相容性。我們的實驗結(jié)果證明了摻鍶硅酸鈣與Α半水硫酸鈣雙相復(fù)合材料生物降解以及生物活性離子釋放的可控性為骨缺損的修復(fù)和抗骨質(zhì)疏松提供了合理的方案。

簡介：目的探討ILIZAROV牽張技術(shù)治療雙側(cè)小腿短縮畸形和四肢長骨骨缺損的臨床療效。方法研究第一部分對1995年6月至2011年6月間采用ILIZAROV肢體延長技術(shù)治療的520例雙側(cè)小腿短縮畸形進(jìn)行回顧性分析以探討小腿同步動態(tài)彈性延長器、內(nèi)外結(jié)合技術(shù)和縱S形截骨的臨床療效。第二部分對2004年6月至2012年3月期間采用ILIZAROV骨延長技術(shù)治療的115例骨缺損進(jìn)行回顧性研究以探討短縮加壓結(jié)合牽張和骨節(jié)段延長兩種骨延長方式的臨床療效。計算所有患者的礦化指數(shù)按照PALEY的分類標(biāo)準(zhǔn)記錄所有的并發(fā)癥并建立肢體延長和骨缺損兩個數(shù)據(jù)庫。通過SPSS160統(tǒng)計軟件對兩個數(shù)據(jù)庫的所有變量進(jìn)行描述性分析對年齡和延長幅度、骨缺損幅度進(jìn)行等級描述分析對可能影響新骨礦化的因素進(jìn)行多元線性回歸分析。在肢體延長數(shù)據(jù)庫對橫形、S形和雙段橫形截骨方式之間的平均礦化指數(shù)、對單用外支架、截骨同時置入髓內(nèi)釘和延長結(jié)束后置入髓內(nèi)釘三種不同固定方式之間的平均礦化和外架指數(shù)進(jìn)行單因素方差分析比較對不同延長幅度的踝關(guān)節(jié)屈曲攣縮的發(fā)生率進(jìn)行有序列聯(lián)表分析并通過卡方檢驗比較組間的差別。在骨缺損數(shù)據(jù)庫對股骨、脛骨、橈骨和尺骨四個不同部位的骨缺損長度和合并的肢體短縮長度不同骨缺損部位的CATAGNI分型以及針道感染發(fā)生率進(jìn)行列聯(lián)分析并通過卡方檢驗比較組間的差別。結(jié)果術(shù)后平均隨訪25年14。小腿延長的平均長度為815±205CM25211。平均礦化指數(shù)7389±1206DCM35956。S形截骨的礦化指數(shù)顯著低于橫形和雙段橫形截骨內(nèi)外結(jié)合組的外架指數(shù)顯著低于單用外架組拆除外架后置入髓內(nèi)釘?shù)牡V化指數(shù)顯著低于截骨同時置入髓內(nèi)釘組和單用外架組。2例踝關(guān)節(jié)屈曲攣縮OBSTACLES2520038％。術(shù)后平均隨訪2年13。平均骨缺損長度702±222CM318平均肢體短縮242±150CM15。所有患者都獲得愈合平均愈合時間為153±252月723。69例感染性骨不連徹底清創(chuàng)后感染控制良好術(shù)后隨訪均無復(fù)發(fā)。CATAGNIB3型合并肢體短縮的18例患者15例獲得糾正3例分別殘留肢體短縮1CM05CM15CM。結(jié)論1小腿同步動態(tài)彈性延長器能夠有效預(yù)防小腿延長過程中踝關(guān)節(jié)屈曲攣縮的發(fā)生。2髓內(nèi)釘可為新骨提供力學(xué)支撐同時能顯著減少外架佩戴的時間。髓內(nèi)釘后置能顯著縮短礦化時間。3S形截骨有利于新骨的再生和礦化。4骨段延長和短縮加壓結(jié)合牽張是治療各種長骨大段骨缺損的有效方法并可同期矯正肢體短縮和各種復(fù)雜畸形。5骨節(jié)段延長結(jié)合感染性骨缺損病灶清除可有效控制的感染術(shù)后不易復(fù)發(fā)。

簡介：南方醫(yī)科大學(xué)2007級博士學(xué)位論文下頜骨三維重建、有限元學(xué)分析及在下頜角截骨整形術(shù)中的臨床應(yīng)用研究MANDIBLEWITH3DCTRECONSTRUCTION，THREE．DIMENSIONALFINITEELEMENTVITODYNAMICSANALYSISANDCLINICALAPPLICATIONOFMANDIBULARANGLEOSTEOTOMY課題來源專業(yè)名稱學(xué)位申請人指導(dǎo)教師答辯委員會主席答辯委員會成員外科學(xué)整形外科羅奇柳大烈教授李世榮教授李青峰教授張金明教授楊志強教授李勤教授論文評閱人李勤教授楊志強教授張金明教授2010年3月31日廣州博士學(xué)位論文LILLIIIIIRI11IIL＼1770546下頜骨三維重建、有限元學(xué)分析及在下頜角截骨整形術(shù)中的臨床應(yīng)用研究博士研究生羅奇指導(dǎo)教師柳大烈教授摘要第一部分正常成年女性下頜角多層螺旋CT解剖學(xué)研究目的通過對60例成年女性正常下頜角16排螺旋CT容積掃描及后續(xù)的三維重建，分析下頜角大體形態(tài)學(xué)特點、不同部位的骨皮質(zhì)厚度及下頜神經(jīng)管解剖學(xué)特點，為下頜角截骨整形術(shù)提供解剖學(xué)基礎(chǔ)。材料與方法對60例120側(cè)健康成年女性行多層螺旋CT檢查，年齡20,43歲，平均27．1歲；身高152,183CM，平均166．5CM；體重4095KG，平均57．3KG。所有受檢查者均無下頜骨相關(guān)外傷手術(shù)史。CT掃描方法采用GE公司LIGHTSPEED16多層螺旋CT機，常規(guī)橫斷面掃描，掃描基線相當(dāng)于聽眥線，掃描范圍包括完整下頜骨，層厚0．625MM，無間隔容積掃描，管電壓120KV，管電流260MAS，骨算法重建；原始數(shù)據(jù)導(dǎo)入ADW4．2512作站進(jìn)行容積重建VOLUMERECONSTRUCTION，VR、多平面重建MULTIPLANARRECONSTRUCTION，MPR，窗寬2000HU，窗位500HU。三維重建包括VR和MPR，MPR可得到標(biāo)準(zhǔn)冠狀面、矢狀面和任意角度斜矢狀面、冠狀面圖像，通過調(diào)整不同的軸線即可獲得各種切面的重組圖像。VR可以整體觀察下頜角大體解剖學(xué)特點。在VR圖像上通過咬合平面畫一直線，與下頜骨后緣相交處為點A通過

簡介：背景及目的骨缺損的修復(fù)和再生一直是骨科學(xué)研究領(lǐng)域中的重要課題，目前研究熱點是利用生長因子來促進(jìn)、增強骨的爬行替代和新骨形成的能力，對骨缺損的修復(fù)及愈合起重要作用。富血小板血漿PLATELETRICHPLASMA，PRP是自體全血經(jīng)過離心得到的血小板濃縮物，其血小板濃度至少為全血中血小板濃度的4倍以上。血小板釋放的生物活性物質(zhì)包括ADP、ATP、血管生成素2ANGIOPOIETIN2，ANG2、結(jié)締組織激活肽3CONNECTIVETISSUEACTIVATINGPEPTIDEⅢ，CATPⅢ、表皮生長因子EPIDERMALGROWTHFACTEGF、堿性成纖維細(xì)胞生長因子BASICFIBROBLASTGROWTHFACTBFGF、胰島素樣生長因子INSULINLIKEGROWTHFACTI，IGFI、骨鈣素OSTEOCALCINPIN，GMP140、血小板源性內(nèi)皮細(xì)胞生長因子PLATELETDERIVEDENDOTHELIALCELLGROWTHFACTPDECGF、血小板衍生生長因子PLATELETDERIVEDGROWTHFACTPDGF、轉(zhuǎn)化生長因子TRANSFMINGGROWTHFACTB1，TGFB1、血管內(nèi)皮生長因子VULARENDOTHELIALGROWTHFACTVEGF，以上成分均具有促進(jìn)組織愈合和組織再生的功能。富血小板血漿因其制備簡單，價格低廉，自體取血既無毒性又無免疫原性，其釋放的多種生長因子非常的符合人體生長因子的配比，因此被視為較為理想的符合臨床治療骨缺損需要的生長因子來源。骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BONEMPHOGEICPROTEIN，BMP）能誘導(dǎo)未分化的間充質(zhì)細(xì)胞向骨系細(xì)胞轉(zhuǎn)化，促進(jìn)骨細(xì)胞的生長增殖。并進(jìn)而合成膠原，形成鈣化的骨組織能力，它可以促進(jìn)原位或異位骨的形成。骨形態(tài)發(fā)生蛋白和PRP激活后所釋放的多種生長因子聯(lián)合作用具有明顯的促進(jìn)骨組織缺損的愈合和重塑。本實驗通過組織學(xué)觀察及計算機圖像分析等方法，觀察自體富含血小板血漿及牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白對兔橈骨缺損區(qū)骨組織再生與修復(fù)能力的影響，為臨床骨缺損修復(fù)的應(yīng)用提供理論依據(jù)。材料及方法1動物分組及模型制備選擇健康新西蘭大白兔48只隨機分為A、B、C、D三組，每組12只。A組橈骨缺損處植入復(fù)合型組織工程骨PRPFGBBMPB、C兩組分別植入復(fù)合材料PRPFG和BBMPFGD組為空白組，只植入FG。根據(jù)骨缺損大小植入材料體積約20ML，上述材料均為膠狀。逐層縫合切口，術(shù)后3D肌注青霉素40萬UD。2PRP的制作整個制作過程嚴(yán)格無菌，003GL戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉，從兔耳中央動脈抽取5ML自體血，裝在預(yù)先放有05ML復(fù)方枸櫞酸鈉抗凝劑的10ML離心管中，參照LEASERG法進(jìn)行PRP提取。3組織工程骨的構(gòu)建取48MGBBMP放入蒸餾水中浸泡，4℃冰箱過夜。取出BBMP，研磨成碎末狀后與PRP和FG根據(jù)骨缺損創(chuàng)面大小注入容器中，然后取凝血劑（由1ML10％的氯化鈣與1000U凝血酶混合而成）按照1ML200MG將PRPBBMP混合物制成凝膠，然后將PRPBBMP混合物凝膠貼于橈骨骨缺損處。凝膠制作及應(yīng)用應(yīng)在40分鐘內(nèi)完成。4大體觀察動物飲食、精神狀態(tài)，切口愈合情況，觀察植入物的體積變化，與周圍組織結(jié)合的緊密程度，植入物表面的變化，有無炎癥反應(yīng)。5組織學(xué)觀察6X線片檢查術(shù)后4、8和12周拍攝雙前肢正側(cè)位X線片，觀察骨缺損修復(fù)情況。每個標(biāo)本選取2張HE切片，每個切片取4個視野，應(yīng)用QWIN圖像分析系統(tǒng)采集圖像并分析，統(tǒng)計四組新生骨在骨缺損區(qū)所占的面積百分比，并進(jìn)行比較。8統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±S表示，采用SPSS160統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，同一時間點各組間的差異LSD法比較。檢驗水準(zhǔn)取Α005。結(jié)果1一般情況術(shù)后所有動物飲食、行動、精神、毛發(fā)色澤、大小便正常。手術(shù)切口無紅腫、滲血及膿性分泌物，切口均一期愈合。2組織學(xué)觀察術(shù)后4周，A組骨缺損處見新生血管豐富，可見較多的纖維性骨痂形成。局部見較多成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞增生活躍，可見與骨干平行的骨樣組織。B、C組可見纖維組織結(jié)構(gòu)，其間散在數(shù)量不等的成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞，成骨作用較A組差。D組見纖維組織生長，材料降解為網(wǎng)狀，周圍有炎性細(xì)胞和少量骨母細(xì)胞。術(shù)后8周，A組骨缺損區(qū)可見大量的新生骨樣組織，骨基質(zhì)豐富，可見鈣鹽沉積，軟骨組織數(shù)量減少。B、C組新生骨組織呈交織狀，可見骨基質(zhì)和少量鈣鹽沉積，數(shù)量小于A組。D組可見未被完全機化的纖維組織和少量炎性細(xì)胞。12周，A組為成熟骨組織結(jié)構(gòu)，主要為板層骨，散在少量的編織骨，可見少量破骨細(xì)胞，骨髓腔完全再通。B組編織骨較多，可見成骨細(xì)胞，破骨細(xì)胞及少量骨髓組織。C組骨組織成熟度稍差，亦可見髓腔內(nèi)有血細(xì)胞。D組仍為纖維組織填充，較少的骨基質(zhì)和新生骨組織。3X線片觀察A組術(shù)后4周骨缺損處呈斑片狀模糊陰影，斷端較清晰，兩斷端部密度稍高。術(shù)后8周時兩斷端模糊，骨缺損處為連續(xù)性高密度陰影，橈骨缺損處可見連續(xù)性骨痂形成，兩斷端間形成橋接。12周時骨缺損處呈均勻一致高密度影，骨皮質(zhì)連續(xù)，髓腔貫通。B組術(shù)后4周，骨缺損處為連續(xù)性絮狀模糊陰影，斷端清晰。術(shù)后8周骨缺損區(qū)模糊，為連續(xù)性高密度陰影，骨痂量較A組為少。12周時骨缺損基本修復(fù)，髓腔大部分再通。C組術(shù)后4周時，截骨端及缺損區(qū)有密度較低的骨痂形成，缺損區(qū)部分為骨痂填充。術(shù)后8和12周時，骨缺損處部分由新生骨所填充，可見髓腔部分再通。D組術(shù)后4周時，骨缺損區(qū)未見明顯成骨，斷端清晰，缺損區(qū)域未見修復(fù)。術(shù)后8和12周時，髓腔部分閉合，骨缺損區(qū)未見明顯修復(fù)，斷端髓腔閉合。4計算機圖像分析隨著時間的推移，新骨形成逐漸增多，材料逐漸被降解。術(shù)后4、8、12周，A組橈骨缺損處修復(fù)性新骨形成均多于B、C和D組P＜001；術(shù)后4周，B組新骨形成略多于C組，但兩組間無明顯差異（P＞005）術(shù)后8周、12周，B組新骨形成多于C組P＜005。結(jié)論1在兔橈骨缺損的修復(fù)和愈合方面單獨應(yīng)用PRP和單獨應(yīng)用BMP均可促進(jìn)骨缺損的修復(fù)，但前者較后者更有利于促進(jìn)骨愈合；2PRP聯(lián)合BMP組織工程骨在促進(jìn)兔橈骨缺損的修復(fù)和愈合等方面明顯優(yōu)于單獨應(yīng)用PRP和BMP3以PRPFGBMP構(gòu)建的組織工程骨材料因其操作，制備較為簡單，無免疫原性，成骨效果明確，有較高的臨床應(yīng)用價值。

簡介：背景與目的醫(yī)源性膽管損傷的遠(yuǎn)期并發(fā)癥的常見原因是醫(yī)源性膽管狹窄，如果處理不當(dāng)，不及時，造成反復(fù)發(fā)作性膽管炎，最終形成膽汁性肝硬變，門靜脈高壓癥，有較高的死亡率和病死率，預(yù)后差。醫(yī)源性膽管狹窄的處理是目前膽道外科的一大難題，術(shù)后突出表現(xiàn)為膽道瘢痕性攣縮和管腔狹窄，尤以肝門部或肝門部以上膽管狹窄最為常見。因此，為了闡明醫(yī)源性膽管狹窄的形成機制，探討肌成纖維細(xì)胞MYOFIBROBLASTMFB在醫(yī)源性膽管狹窄形成過程中的作用，我們通過建立家兔肝外膽管損傷修復(fù)模型，術(shù)后動態(tài)觀察肌成纖維細(xì)胞在膽道愈合過程中的表達(dá)。材料與方法選取健康家兔24只，雌雄不限，平均體重20～25KG。通過建立家兔肝外膽管損傷修復(fù)模型，分別于術(shù)后1周、3周、3個月、6個月取材行顯微鏡觀察、電鏡觀察和A–平滑肌肌動蛋白A–SMA免疫組織化學(xué)染色觀察。結(jié)果1一期術(shù)后10天1只家兔死于膽瘺，2只家兔于術(shù)后1～2月死于梗阻性黃疸，共存活24只；術(shù)后早期食欲、活動、反應(yīng)尚正常，遠(yuǎn)期觀察6只家兔3月以上時出現(xiàn)食欲下降、體重減輕、小便色深及陶土便等梗阻性黃疸表現(xiàn)；術(shù)后腹腔引流管平均引流5～10ML淡血性液體，混有少量膽汁。2顯微鏡觀察術(shù)后1周時，MASSON染色及VERHOEFF染色見新生的膠原纖維排列紊亂；術(shù)后3周時，MASSON染色及VERHOEFF染色見粘膜下大量膠原纖維增生；3月及6月時，MASSON染色及VERHOEFF染色見膠原纖維排列較前整齊，但仍雜亂無序、致密。3透射電鏡觀察MFB功能活躍，持續(xù)存在于整個膽道愈合過程；其中3月時瘢痕組織細(xì)胞功能仍較活躍，MFB數(shù)量達(dá)到最多。4免疫組織化學(xué)染色觀察ASMA表達(dá)于肌成纖維細(xì)胞胞漿，術(shù)后1周至6個月表達(dá)均較強，與正常對照比較差異有顯著性P005。結(jié)論1免疫組織化學(xué)結(jié)果證實了ASMA是引起膽道瘢痕性攣縮，造成術(shù)后膽道狹窄的重要原因。2MFB功能活躍，持續(xù)存在，是導(dǎo)致膽道瘢痕性攣縮和管腔狹窄的主要原因。

簡介：根據(jù)查新現(xiàn)有的利用食品微生物富集金屬的研究創(chuàng)新采用乳酸菌來研究微生物富集鈣了解金屬元素與微生物相互作用中的因素影響機制掌握金屬元素是如何進(jìn)入微生物和富集量的大小及分布不僅為開發(fā)利用微生物富集人體所需金屬元素生產(chǎn)營養(yǎng)強化食品提供一定的理論參考也為開發(fā)利用過剩、低附加值的畜骨生產(chǎn)補鈣新型營養(yǎng)食品提供科學(xué)的基礎(chǔ)理論和數(shù)據(jù)根據(jù)目前市場上現(xiàn)有的產(chǎn)品特點、中國人飲食習(xí)慣中缺乏吸收性好的鈣源的現(xiàn)狀和鈣吸收利用的相關(guān)影響因素設(shè)計研究含活性乳酸菌的發(fā)酵超微粉碎骨粉咀嚼片作為保健食品提供高質(zhì)量的補鈣天然食品

簡介：骨性關(guān)節(jié)炎（OSTEOARTHRITISOA）是骨科比較常見的疾病，也是一種危害老年人健康的慢性進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)病。膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病理變化主要是軟骨合成與分解代謝平衡失調(diào)引起的關(guān)節(jié)軟骨的變性和破壞。目前對膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎還沒有很滿意的治療方法，早期采用非手術(shù)治療，晚期軟骨破壞嚴(yán)重，此時采用手術(shù)治療，而目前對骨與關(guān)節(jié)疾病的基因治療，正成為世界關(guān)注的熱點。在淋巴細(xì)胞增殖和淋巴細(xì)胞分化中白介素7受體起到了關(guān)鍵作用，B系淋巴細(xì)胞和T系淋巴細(xì)胞生成障礙主要是因為細(xì)胞的表面缺乏白介素7受體，而重癥聯(lián)合免疫缺陷病是因為缺乏T細(xì)胞，T細(xì)胞的缺乏主要是由于IL7RΑ或C存在缺陷。還有研究證實在區(qū)分是記憶性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞方面，白介素7受體也發(fā)揮著作用，廣大研究者們越來越關(guān)注白介素7受體主要是因為它具有分化淋巴細(xì)胞的作用而且還有機體免疫記憶的作用。目前國內(nèi)、外關(guān)于同類文獻(xiàn)尚少見，因此，我們運用基因芯片，組織蘇木素伊紅染色法，免疫組化，RTPCR實驗方法檢測IL7R基因在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達(dá)情況?！灸康摹刻接懴リP(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中ILR基因在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中發(fā)生與發(fā)展過程中的表達(dá)作用及表達(dá)異常?！痉椒ā?收集64例篩選來自延邊大學(xué)附屬醫(yī)院骨科患者新鮮滑膜組織，其中25例為半月板損傷及交叉韌帶損傷行關(guān)節(jié)鏡手術(shù)治療患者的正常新鮮滑膜組織，39例為符合OA診斷標(biāo)準(zhǔn)，行膝關(guān)節(jié)人工關(guān)節(jié)置換術(shù)患者的新鮮滑膜組織，組織離體后放入無菌管，直接置于液氮中，30分鐘后轉(zhuǎn)入80℃冰箱保存。2收集的滑膜組織中取3例正常新鮮滑膜組織與10例OA新鮮滑膜組織，保存到液氮中送到北京市博奧生物有限公司進(jìn)行基因芯片檢測。3為證實基因芯片結(jié)果進(jìn)一步行REALTIMERTPCR檢測。4膝關(guān)節(jié)滑膜組織必須放在百分之四的多聚甲醛溶液中并且要在四攝氏度的溫度下固定二十四個小時然后脫水和石蠟包埋。最后要把所有的標(biāo)本按照4UM的規(guī)格，使用切片機切片兩張，載玻片上固定。5固定在載玻片上，留在HE染色實驗和免疫組化實驗中使用。特別注意的事在進(jìn)行免疫組織化學(xué)實驗時，所使用的切片要過夜必須放在六十?dāng)z氏度的溫箱中。6采用TRIZOL法提取滑膜組織中的總RNA，采用APPLIEDBIOSYSTEMS逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈CDNA，經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增IL7R基因片段，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。檢測54例膝關(guān)節(jié)髕上囊滑膜組織中IL7R表達(dá)與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中IL7R基因的表達(dá)意義?！窘Y(jié)果】1MRNA基因芯片檢測結(jié)果示IL7R在正常膝關(guān)節(jié)滑膜組織與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中相比膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中表達(dá)明顯下降。2REALTIMERTPCR檢測結(jié)果示IL7R基因表達(dá)在膝關(guān)節(jié)OA滑膜組織中明顯降低。3HE染色結(jié)果示發(fā)生炎癥和退行病變的滑膜組織中，滑膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，并有炎癥細(xì)胞浸潤，并伴有結(jié)締組織增生，肥厚。4免疫組織化學(xué)法結(jié)果示IL7R在滑膜細(xì)胞胞漿中表達(dá)，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中發(fā)生炎癥后，IL7R的表達(dá)下降。5RTPCR實驗結(jié)果示膝關(guān)節(jié)OA滑膜中IL7R與正常膝關(guān)節(jié)滑膜組織中相比明顯降低?！窘Y(jié)論】（1）膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎疾病的整個過程中，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜組織均表現(xiàn)著明顯的炎癥反應(yīng)性增生。（2）本研究發(fā)現(xiàn)IL7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞中的表達(dá)下降。（3）IL7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中表達(dá)明顯降低，IL7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病理過程中發(fā)揮重要作用。（4）把IL7R作為早期診斷和治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎疾病的靶點之一，為在臨床治療膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎提供了一條新途徑。

簡介：分類號分類號R78205R78205密級密級公開公開單位代碼單位代碼1076010760學(xué)號學(xué)號107602104534107602104534新疆醫(yī)科大學(xué)XINJIANGMEDICALUNIVERSITY碩士學(xué)位論文碩士學(xué)位論文THESISOFMASTERDEGREE口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位（學(xué)歷教育）口腔醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)位（學(xué)歷教育）論文題目論文題目270270例下頜骨骨折回顧分析例下頜骨骨折回顧分析研究生研究生李凱李凱指導(dǎo)教師指導(dǎo)教師阿地力阿地力莫明莫明教授教授專業(yè)學(xué)位領(lǐng)域?qū)I(yè)學(xué)位領(lǐng)域口腔醫(yī)學(xué)口腔醫(yī)學(xué)研究方向研究方向口腔頜面創(chuàng)傷口腔頜面創(chuàng)傷研究起止時間研究起止時間20102010年9月20122012年1212月所在學(xué)院所在學(xué)院第一臨床醫(yī)學(xué)院第一臨床醫(yī)學(xué)院20132013年0303月RETROSPECTIVEANALYSIS270CASESOFMANDIBULARFRACTURESＡDISSERTATIONSUBMITTEDTOXINJIANGMEDICALUNIVERSITYINPARTIALFULLFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFSTOMATOLOGICALMEDICINEBYLIKAISTOMATOLOGICALMEDICINEDISSERTATIONSUPERVISORPROFESSORADILIMOMINGMARCH,2013

簡介：背景平滑肌細(xì)胞SMC的過度增生是血管病變發(fā)生發(fā)展中的重要環(huán)節(jié)。長久以來的觀點認(rèn)為動脈粥樣硬化AS斑塊中的SMC源于中膜SMC的遷移和增生。雖然對于中膜SMC的遷移和增殖的分子機制做了大量的研究工作，但是至今仍沒有建立有效的阻止閉塞性血管重建的治療方法。然而近年來有報道，骨髓細(xì)胞參與了血管疾病的發(fā)生，發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)骨髓細(xì)胞可能具有分化成血管祖細(xì)胞的潛能，這種祖細(xì)胞遷移至受損的血管，分化成平滑肌細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞，參與血管的修復(fù)，重塑和病變的形成。這些發(fā)現(xiàn)為探索血管疾病的新療法提供了基礎(chǔ)。但是骨髓細(xì)胞向平滑肌方向分化的分子機制仍不清楚。然而令人興奮的是近年來研究者發(fā)現(xiàn)了一個關(guān)鍵的促平滑肌分化因子MYOCARDIN。目前對于MYOCARDIN的研究仍處于初步階段。目地探討血小板源性生長因子BBPDGFBB及高濃度的胎牛血清20％FBS體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BONEMARROWMESENCHYMALSTEMCELL，BMSC定向分化為平滑肌細(xì)胞的可行性及MYOCARDIN在此過程中的表達(dá)變化。方法采用全骨髓貼壁分離和消化控制相結(jié)合分離小鼠BMSC，然后用PDGFBB50ΜGL聯(lián)合高濃度胎牛血清20％FBS誘導(dǎo)BMSC，分別于誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天后用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞ΑSMA，SMMHC，MYOCARDIN的表達(dá)，同時在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果從單個細(xì)胞的形態(tài)上看，誘導(dǎo)前BMSC呈梭形，分支狀或多邊形，誘導(dǎo)后的細(xì)胞體積略增加，仍以梭形細(xì)胞為主，但是誘導(dǎo)8天時細(xì)胞密集處出現(xiàn)束狀，漩渦狀排列，與SMC相似。細(xì)胞免疫組化顯示誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天時，ΑSMA，SMMHC，MYOCARDIN三種蛋白的表達(dá)逐漸增強，平均灰度值逐漸降低，不同時間點組組之間統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異P005。結(jié)論PDGFBB聯(lián)合高濃度的胎牛血清20％FBS可有效誘導(dǎo)BMSC向平滑肌樣細(xì)胞分化。MYOCARDIN在此分化過程中起重要作用。

簡介：目的在“少陽主骨”課題前期研究結(jié)果電針足少陽經(jīng)穴對骨重建有“和調(diào)”作用的基礎(chǔ)上，驗證“和解少陽”經(jīng)典方劑小柴胡湯對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度、骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)的影響，以對“和解少陽”的臨床用途產(chǎn)生新的認(rèn)識，進(jìn)一步完善中醫(yī)學(xué)理論。方法按完全隨機化方案將40只6月齡SD雌性大鼠分為假手術(shù)組10只，模型加電針膽經(jīng)穴組（電針膽經(jīng)組）10只，小柴胡湯組10只，去勢模型對照組（模型對照組）10只四個組。小柴胡湯組隨機又分為低劑量組3只、中劑量組4只和高劑量組3只三個組（此分層是課題另一部分，不納入本次討論）。假手術(shù)組大鼠找到雙側(cè)卵巢后，摘除雙側(cè)卵巢附近近似卵巢大小的脂肪，另外三組大鼠行去雙側(cè)卵巢造模手術(shù)。造模術(shù)后3個月，電針膽經(jīng)組大鼠給予電針干預(yù)小柴胡湯組大鼠分別給予低劑量、中劑量和高劑量小柴胡湯灌胃給藥干預(yù)假手術(shù)組和模型對照組大鼠不給予任何干預(yù)。干預(yù)3個月后實驗結(jié)束，分別檢測各組大鼠骨密度、骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)。結(jié)果1干預(yù)3個月后模型對照組OVXC大鼠的骨密度體重校正值較假手術(shù)組（SHAMGROUP）、電針膽經(jīng)組OVXA和小柴胡湯組XIAOCHAIHUTANGGROUP顯著下降，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P＜001小柴胡湯組XIAOCHAIHUTANGGROUP與假手術(shù)組SHAMGROUP相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005小柴胡湯組XIAOCHAIHUTANGGROUP與電針膽經(jīng)組OVXA相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005電針膽經(jīng)組OVXA與假手術(shù)組（SHAMGROUP）相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。2骨組織HE染色見電針膽經(jīng)組、小柴胡湯組骨微結(jié)構(gòu)較模型組明顯改善。3大鼠左側(cè)股骨遠(yuǎn)側(cè)干骺端成骨細(xì)胞計數(shù)模型對照組OVXC成骨細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)組（SHAMGROUP）、電針膽經(jīng)組OVXA和小柴胡湯組XIAOCHAIHUTANGGROUP顯著下降，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P＜001小柴胡湯組與假手術(shù)組SHAMGROUP相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005小柴胡湯組與電針膽經(jīng)組OVXA相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005電針膽經(jīng)組OVXA與假手術(shù)組（SHAMGROUP）相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。4大鼠左側(cè)股骨遠(yuǎn)側(cè)干骺端破骨細(xì)胞計數(shù)模型對照組破骨細(xì)胞數(shù)較假手術(shù)組（SHAMGROUP）、電針膽經(jīng)組OVXA和小柴胡湯組XIAOCHAIHUTANGGROUP顯著升高，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P＜001小柴胡湯組與假手術(shù)組（SHAMGROUP）相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005小柴胡湯組與電針膽經(jīng)組OVXA相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005電針膽經(jīng)組OVXA與假手術(shù)組（SHAMGROUP）相較差異無統(tǒng)計學(xué)意義P＞005。結(jié)論1“和解少陽”經(jīng)典方劑小柴胡湯提高去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度、改善骨組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)，提示小柴胡湯“和解少陽”對骨重建具有“和調(diào)”作用，即“和調(diào)陰陽”作用。擴(kuò)大了“和解少陽”的臨床用途。2“和解少陽”經(jīng)典方劑小柴胡湯和電針足少陽經(jīng)穴對骨重建皆有“和調(diào)陰陽”作用，小柴胡湯“和解少陽”對骨重建“和調(diào)”作用的機制可能與電針足少陽經(jīng)穴對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨重建“和調(diào)”作用的機制相同，這個機制有待于從分子生物學(xué)水平作進(jìn)一步的研究。

簡介：研究背景人工電子心臟起搏器CARDIACPACEMAKER作為治療某些心律失常（主要是緩慢性心律失常）時首選的治療儀器，是通過一種植入于人體內(nèi)的電子脈沖發(fā)生器發(fā)放電脈沖，進(jìn)而使與電極所接觸的心肌細(xì)胞產(chǎn)生有節(jié)律的沖動，使心臟在此節(jié)律下有規(guī)律的激動和收縮，從而達(dá)到治療的目的。自從1958年RUNEELMQVIST成功將制造出的第一臺人工心臟起搏器植入到患者體內(nèi)至今，在緩慢型心律失常（如病竇綜合征和重度房室傳導(dǎo)阻滯等）治療方面，人工起搏器已經(jīng)被公認(rèn)為首選的治療方法。不過在人們的應(yīng)用過程中，人工起搏器自身存在的一些缺陷及問題不斷暴露出來，其中比較嚴(yán)重的包括電極易于發(fā)生斷裂、外來植入物可能導(dǎo)致感染、靜脈內(nèi)血栓形成而導(dǎo)致的栓塞、電池維持時間有限需重新進(jìn)行手術(shù)更換等。除此之外，對于特殊患者特別是兒童而言，隨著患兒的不斷成長和發(fā)育，早先所安裝的起搏器會逐漸無法滿足機體的需要，因此大多需要進(jìn)行重新更換，這都限制了它在某些特定患者中的應(yīng)用。近些年隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，為了克服人工起搏器所存在的以上問題，有學(xué)者提出了生物起搏器的概念并被寄予厚望。目前，構(gòu)建生物起搏器的方法主要包括細(xì)胞治療和基因治療兩大方向，但是因為細(xì)胞治療存在的一些問題如倫理問題、成瘤問題、免疫排斥問題以及效果欠佳等，限制了其在這一領(lǐng)域的應(yīng)用。而通過基因治療構(gòu)建心臟生物起搏器卻越來越引起相關(guān)研究者的重視，現(xiàn)在基因治療主要包括以下三種方式1通過過度表達(dá)Β2腎上腺素受體基因來增加心房的電活動2過度表達(dá)或移植人工制造的工程化起搏電流HCN2基因來構(gòu)建起搏細(xì)胞3通過基因技術(shù)抑制內(nèi)向整流鉀電流IK1，引起心肌細(xì)胞鉀電流的平衡發(fā)生變化，進(jìn)而使無起搏活性的心肌細(xì)胞產(chǎn)生自律性。心肌是由心肌細(xì)胞構(gòu)成的一種肌肉組織，廣義上說，除了包括我們熟悉的具有收縮功能的工作細(xì)胞心房肌和心室肌以外，還包括無收縮功能的竇房結(jié)、結(jié)間束、房室交界部、房室束（即希斯束）和浦肯野纖維等5種特殊分化了的心肌細(xì)胞。后5種心肌細(xì)胞沒有收縮功能，但是具有自律性和傳導(dǎo)性，它們共同組成心臟的起搏和傳導(dǎo)系統(tǒng)，是心臟能夠進(jìn)行自律性活動的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)前兩種心肌細(xì)胞具有收縮性，是心臟舒縮活動的功能基礎(chǔ)。早期研究發(fā)現(xiàn)，成人心室肌細(xì)胞有潛在的起搏活性另外在心肌IK1中KCNJ2基因所編碼的通道蛋白KIR21占80％左右，它可以使成人心室肌細(xì)胞的靜息膜電位保持在負(fù)電位水平，而且它高度表達(dá)于沒有自律性的心房肌和心室肌中，而在竇房結(jié)等具備自律性的細(xì)胞中表達(dá)卻相對罕見或缺乏。因此有學(xué)者認(rèn)為，由于受到IK1的影響，心室肌的起搏活性才會被抑制。以上觀點在后期的實驗中得到了證實，其中在SILVAJ等的研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)對心室肌細(xì)胞的IK1電流的抑制率達(dá)到81％以后，其潛在的起搏活性就會顯現(xiàn)出來，出現(xiàn)自發(fā)的動作電位，而且其自發(fā)的搏動頻率會隨著IK1電流抑制率的增加而相應(yīng)的提高。而MIAKE等則應(yīng)用基因工程構(gòu)造出編碼沒有功能、非活性的IK1通道的KIR21AAA基因，通過負(fù)顯性法來抑制心室肌細(xì)胞的IK1電流。研究中他們發(fā)現(xiàn)在沒有對豚鼠心臟正常興奮性進(jìn)行負(fù)性干預(yù)的前提下，成功的誘導(dǎo)出了起源于豚鼠心室肌細(xì)胞的自發(fā)起搏活動，而且經(jīng)過檢測此起搏活動的頻率比竇房結(jié)的正常頻率還要快，被認(rèn)為是世界上首例成功構(gòu)建的生物心臟起搏器。另外，有研究者通過動物實驗還發(fā)現(xiàn)，如果將心肌細(xì)胞中KCNJ2基因的表達(dá)完全阻斷，會導(dǎo)致多種心律失常的出現(xiàn)。CHANYC等進(jìn)一步的研究則發(fā)現(xiàn)，在生物起搏器的基因治療中抑制KIR21蛋白表達(dá)與過表達(dá)HCN4基因有協(xié)同作用，可以共同提高心肌細(xì)胞的自律性。近期，位于美國的CEDARSSINAI心臟研究所的KAPON等通過向普通心肌細(xì)胞中注入單個TBX18基因?qū)ζ溥M(jìn)行重新編程，將心肌細(xì)胞改造成專業(yè)化很高的“生物起搏器”的實驗獲得了成功，另外他們還發(fā)現(xiàn)改造后的心肌細(xì)胞所產(chǎn)生的電活動，可以規(guī)律的傳導(dǎo)至全部心肌細(xì)胞，引起心臟出現(xiàn)有節(jié)奏的舒縮，證實了通過植入單個基因即可以將心肌細(xì)胞改造成專門的起搏細(xì)胞，并且通過心室的這個起搏點能夠引起心臟出現(xiàn)規(guī)律的肌肉活動。這一事實進(jìn)一步為通過提高局部心室肌細(xì)胞自律性來在體構(gòu)建生物起搏器提供了依據(jù)。RNA干擾RNAINTERFERENCE，RNAI技術(shù)是目前比較成熟的一種基因干預(yù)技術(shù)，是由雙鏈RNADSRNA誘導(dǎo)的同源MRNA降解的過程14，15。能夠達(dá)到在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平上特異性阻斷基因表達(dá)的效果。目前人們已經(jīng)掌握了根據(jù)RNA干擾的原理人工合成SIRNASSMALLINTERFERENCERNA的技術(shù)，為通過使用能表達(dá)SIRNAS的載體在體外或體內(nèi)誘導(dǎo)哺乳動物的細(xì)胞產(chǎn)生特異的基因沉默提供了技術(shù)支持。慢病毒載體LENTIVIRALVECTLVS是在人免疫缺陷病毒1型HIV1基礎(chǔ)上改造而成的，能利用逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶，將自身的RNA轉(zhuǎn)變?yōu)镈NA整合到宿主細(xì)胞的染色體中，從而使目的基因在宿主細(xì)胞中長期而穩(wěn)定的表達(dá)。因為其具有宿主范圍廣，所能容納的外源性基因片段大，安全性高等優(yōu)點，目前在基因治療中的應(yīng)用越來越廣泛。前期本課題組已經(jīng)獲得了干擾KCNJ2基因MRNA的特異位點361～379堿基，并且通過應(yīng)用設(shè)計出的特異干擾序列，在細(xì)胞水平證實了將RNA干擾基因?qū)胄氖壹〖?xì)胞，使其產(chǎn)生干擾效應(yīng)，特異性得使KCNJ2基因沉默，抑制內(nèi)向整流鉀電流IK1，進(jìn)而誘導(dǎo)處于靜息狀態(tài)的心室肌細(xì)胞產(chǎn)生生物起搏活性的可行性。在本課題中，我們將在動物體內(nèi)通過干擾KCNJ2基因來抑制模型大鼠心肌的內(nèi)向整流鉀電流IK1，探討是否可以提高模型大鼠的心室率。在實驗中我們通過建立大鼠Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯的模型，消除竇性起搏對心室肌細(xì)胞自律性的掩蓋進(jìn)而應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)的RNAI技術(shù)，通過干擾KCNJ2基因從而抑制KIR21蛋白，達(dá)到抑制內(nèi)向整流鉀電流IK1通道的目的，觀察模型大鼠心室率的變化情況來探討以上假設(shè)的可行性。希望可以為生物起搏器的體內(nèi)研究提供一些有價值的試驗依據(jù)。第一部分?jǐn)y帶有特異性干擾片段的慢病毒載體的構(gòu)建研究目的制備含有針對大鼠心肌細(xì)胞KCNJ2基因MRNA的特異性SHRNA的慢病毒表達(dá)載體。研究方法1、將前期驗證的對KCNJ2基因MRNA上沉默效果最明顯的干擾片斷以MLUI，CLAI為插入位點，插入到由H1啟動子調(diào)控以及有GFP表達(dá)的慢病毒載體中并通過MLUI，CLAI雙酶切技術(shù)進(jìn)行鑒定。2、在脂質(zhì)體的介導(dǎo)下將混合的慢病毒載體包裝質(zhì)粒和包含KCNJ2基因干擾片段的重組慢病毒載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝成病毒，72小時后收集上清，應(yīng)用逐孔稀釋滴度測定法測定病毒滴度。研究結(jié)果通過雙酶切電泳證實所設(shè)計的KCNJ2基因SHRNA正確插入到了慢病毒載體中，DNA測序證實插入的序列正確293T細(xì)胞成功包裝重組慢病毒載體收集的細(xì)胞培養(yǎng)上清液中，病毒的滴度為107109TUML。結(jié)論制備的慢病毒載體構(gòu)建成功，同時獲得的病毒滴度較高，完全滿足后續(xù)在體實驗的要求。第二部分在大鼠Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯模型中抑制心室肌KCNJ2基因的表達(dá)對心室率的影響研究目的1、建立穩(wěn)定的大鼠Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯的模型。2、確定慢病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠的最佳滴度。3、明確慢病毒載體轉(zhuǎn)染大鼠Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯模型后心室率的變化情況。4、明確慢病毒載體轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞后KCNJ2基因MRNA和KIR21蛋白表達(dá)的變化及其于大鼠心室率的關(guān)系。研究方法1、采用定點注射70％乙醇的方法破壞大鼠的房室結(jié)，使大鼠發(fā)生Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯。注射乙醇約25UL，觀察心電圖變化，出現(xiàn)Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯的大鼠觀察30分鐘，待穩(wěn)定后關(guān)胸，72小時后檢測確定建模是否成功。2、取正常大鼠給予不同滴度的空白慢病毒載體30UL進(jìn)行心肌注射，分別取注射后第4天、7天、10天處死取材，迅速制作冰凍切片，在免疫熒光顯微鏡下進(jìn)行檢測，根據(jù)各不同時段切片中的綠色熒光蛋白的亮度，確定轉(zhuǎn)染效率與病毒滴度的關(guān)系，用轉(zhuǎn)染效率最高的滴度進(jìn)行模型大鼠的注射。3、將建立的模型大鼠分為對照組、空載體組、病毒干預(yù)組三組其中對照組只進(jìn)行轉(zhuǎn)染的手術(shù)操作但不進(jìn)行相應(yīng)的病毒轉(zhuǎn)染另兩組則分別轉(zhuǎn)染慢病毒空載體及攜帶有相應(yīng)SHRNA的慢病毒載體。轉(zhuǎn)染后分別于不同時間點通過心電圖檢測各組大鼠心室率的變化情況。4、分別對各組所取得的心肌組織進(jìn)行相應(yīng)處理，通過實時熒光定量RTPCR檢測KCNJ2基因的表達(dá)情況應(yīng)用WESTERNBLOT及免疫組化檢測心肌組織中KIR21蛋白的表達(dá)情況。研究結(jié)果1、建立了持久、穩(wěn)定的Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯大鼠模型，滿足本實驗的要求。2、慢病毒的最佳轉(zhuǎn)染滴度為109TUML，轉(zhuǎn)染7天后轉(zhuǎn)染效率變穩(wěn)定。3、本研究發(fā)現(xiàn)病毒干預(yù)組中有545％的大鼠心室率由156±6次分鐘提高到218±10次分鐘，差異性顯著P＜001進(jìn)一步實驗證實心室率的提高與KCNJ2基因、KIR21蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)是由慢病毒轉(zhuǎn)染的基因沉默引起的，且在轉(zhuǎn)染后14天，當(dāng)KCNJ2基因與KIR21蛋白抑制率分別為77％、55％左右時，大鼠的心室率達(dá)最快。因此證實了通過抑制心肌的KCNJ2基因及KIR21蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制內(nèi)向整流鉀電流IK1，能夠引起Ⅲ度房室傳導(dǎo)阻滯模型大鼠心室肌細(xì)胞自律性的提高。結(jié)論在動物體內(nèi)通過抑制KCNJ2基因來抑制模型大鼠心肌細(xì)胞的內(nèi)向整流鉀電流IK1來提高大鼠的心室率是可行的。