炎癥因子IL-7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達(dá)及意義.pdf

1、骨性關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis OA）是骨科比較常見的疾病，也是一種危害老年人健康的慢性進(jìn)行性骨關(guān)節(jié)病。膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病理變化主要是軟骨合成與分解代謝平衡失調(diào)引起的關(guān)節(jié)軟骨的變性和破壞。目前對(duì)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎還沒有很滿意的治療方法，早期采用非手術(shù)治療，晚期軟骨破壞嚴(yán)重，此時(shí)采用手術(shù)治療，而目前對(duì)骨與關(guān)節(jié)疾病的基因治療，正成為世界關(guān)注的熱點(diǎn)。在淋巴細(xì)胞增殖和淋巴細(xì)胞分化中白介素-7受體起到了關(guān)鍵作用，B系淋巴細(xì)胞和T系淋巴細(xì)

2、胞生成障礙主要是因?yàn)榧?xì)胞的表面缺乏白介素-7受體，而重癥聯(lián)合免疫缺陷病是因?yàn)槿狈細(xì)胞，T細(xì)胞的缺乏主要是由于IL-7Rα或c存在缺陷。還有研究證實(shí)在區(qū)分是記憶性T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞方面，白介素-7受體也發(fā)揮著作用，廣大研究者們?cè)絹碓疥P(guān)注白介素-7受體主要是因?yàn)樗哂蟹只馨图?xì)胞的作用而且還有機(jī)體免疫記憶的作用。目前國(guó)內(nèi)、外關(guān)于同類文獻(xiàn)尚少見，因此，我們運(yùn)用基因芯片，組織蘇木素-伊紅染色法，免疫組化，RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)IL-7R基

3、因在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中的表達(dá)情況。
　　【目的】:
　　探討膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中IL-R基因在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中發(fā)生與發(fā)展過程中的表達(dá)作用及表達(dá)異常。
　　【方法】:
　　1.收集64例篩選來自延邊大學(xué)附屬醫(yī)院骨科患者新鮮滑膜組織，其中25例為半月板損傷及交叉韌帶損傷行關(guān)節(jié)鏡手術(shù)治療患者的正常新鮮滑膜組織，39例為符合OA診斷標(biāo)準(zhǔn)，行膝關(guān)節(jié)人工關(guān)節(jié)置換術(shù)患者的新鮮滑膜組織，組織離體后放入無菌管，直接置于液氮

4、中，30分鐘后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存。2.收集的滑膜組織中取3例正常新鮮滑膜組織與10例OA新鮮滑膜組織，保存到液氮中送到北京市博奧生物有限公司進(jìn)行基因芯片檢測(cè)。3.為證實(shí)基因芯片結(jié)果進(jìn)一步行Real time RT-PCR檢測(cè)。4.膝關(guān)節(jié)滑膜組織必須放在百分之四的多聚甲醛溶液中,并且要在四攝氏度的溫度下固定二十四個(gè)小時(shí),然后脫水和石蠟包埋。最后要把所有的標(biāo)本按照4um的規(guī)格，使用切片機(jī)切片兩張，載玻片上固定。5.固定在載玻片上，留在HE

5、染色實(shí)驗(yàn)和免疫組化實(shí)驗(yàn)中使用。特別注意的事在進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)，所使用的切片要過夜必須放在六十?dāng)z氏度的溫箱中。6.采用Trizol法提取滑膜組織中的總RNA，采用Applied Biosystems逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA，經(jīng)PCR反應(yīng)擴(kuò)增IL-7R基因片段，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)。檢測(cè)54例膝關(guān)節(jié)髕上囊滑膜組織中IL-7R表達(dá)與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎中IL-7R基因的表達(dá)意義。
　　【結(jié)果】:
　　1.mRNA基

6、因芯片檢測(cè)結(jié)果示：IL-7R在正常膝關(guān)節(jié)滑膜組織與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中相比膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中表達(dá)明顯下降。2.real time RT-PCR檢測(cè)結(jié)果示：IL-7R基因表達(dá)在膝關(guān)節(jié)OA滑膜組織中明顯降低。3.HE染色結(jié)果示：發(fā)生炎癥和退行病變的滑膜組織中，滑膜細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生改變，并有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并伴有結(jié)締組織增生，肥厚。4.免疫組織化學(xué)法結(jié)果示：IL-7R在滑膜細(xì)胞胞漿中表達(dá)，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜中發(fā)生炎癥后，IL-7R

7、的表達(dá)下降。5.RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：膝關(guān)節(jié)OA滑膜中IL-7R與正常膝關(guān)節(jié)滑膜組織中相比明顯降低。
　　【結(jié)論】:
　?。?）膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎疾病的整個(gè)過程中，膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者的滑膜組織均表現(xiàn)著明顯的炎癥反應(yīng)性增生。
　　（2）本研究發(fā)現(xiàn)IL-7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞中的表達(dá)下降。
　?。?） IL-7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎滑膜組織中表達(dá)明顯降低，IL-7R在膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的病理過程中發(fā)揮重要作用。