簡介：點(diǎn)擊查看更多糖基化對漢灘病毒包膜糖蛋白重組假病毒糖鏈結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性影響的初步研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：該論文主要研究了漢坦病毒疫苗株Z10和Z37核蛋白體內(nèi)、體外表達(dá)核蛋白與基因組末端反向重復(fù)序列相互作用以及核蛋白對鼠源性巨噬細(xì)胞生長的影響核蛋白相對保守常作為漢坦病毒分子進(jìn)化親緣性分析的依據(jù)為了解漢坦病毒疫苗株Z10與Z37基因分型及與其他毒株在進(jìn)化上的親緣性克隆并序列測定了Z10和Z37核蛋白全基因?yàn)榱双@得純化的可溶性重組核蛋白構(gòu)建了Z10和Z37株核蛋白原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)在較低的溫度18℃和較低濃度IPTG100MM條件下誘導(dǎo)表達(dá)過夜可提高可溶性核蛋白的產(chǎn)量為了解內(nèi)源性核蛋白的表達(dá)及細(xì)胞內(nèi)的分布情況構(gòu)建了漢坦病毒Z10株核蛋白基因與鼠干細(xì)胞反轉(zhuǎn)錄病毒MSCV重組載體通過磷酸鈣轉(zhuǎn)染法導(dǎo)入產(chǎn)病毒的包裝細(xì)胞系BOSC23中產(chǎn)生完整的重組MSCVFLAGNP病毒然后以重組病毒直接感染NIH3T3細(xì)胞利用PUROMYCIN對感染細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)壓力篩選獲得了轉(zhuǎn)核蛋白抗性細(xì)胞互補(bǔ)可形成雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了研究該雙鏈結(jié)構(gòu)在核蛋白包裝病毒基因組RNA中的作用與功能以T4DNA激酶同位素標(biāo)記一對人工合成互補(bǔ)的18個(gè)核苷酸反向重復(fù)序列制備雙鏈探針以模擬基因片段末端反向重復(fù)序列形成的雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)為了解核蛋白在漢坦病毒感染巨噬細(xì)胞時(shí)的作用分析了Z10和Z37核蛋白細(xì)胞外刺激或細(xì)胞內(nèi)大量表達(dá)對鼠源性巨噬細(xì)胞系J774的影響

簡介：第一部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒流行病學(xué)調(diào)查目的連續(xù)4年監(jiān)測湖南地區(qū)兒童急性下呼吸道感染ACUTELOWRESPIRATYTRACTINFECTION，ALRTI中腺病毒HUMANADENOVIRUSADV的感染情況，揭示不同年份ADV在湖南地區(qū)所致兒童ALRTI的臨床流行病學(xué)特征。對象及方法12007年9月～2011年8月收集湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心診斷為ALRTI的住院患兒鼻咽抽吸物NASOPHARYNGEAASPIRATESSAMPLES，NPAS標(biāo)本。2采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR，對NPAS標(biāo)本進(jìn)行ADV病毒檢測。將陽性PCR產(chǎn)物直接測序，弱陽性標(biāo)本進(jìn)行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測序。所得測序結(jié)果與美國國立生物技術(shù)中心NCBIGENEBANK中的序列進(jìn)行BLAST比對證實(shí)。3對ADV在兒童ALRTI中的流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果12007年9月～2011年8月共收集3140例患兒的NPAS標(biāo)本，242份ADV檢出陽性，總檢出率為771％。2242例ADV檢測陽性患兒①平均年齡為25月，3～4歲患兒檢出率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P＜001②男性檢出144例719％，女性檢出98例901％，男女性別之比為147∶1，性別之間ADV陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005③研究期間ADV全年均有檢出，發(fā)病高峰期在每年的4～8月，11月份。四季檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001，以夏季為高。研究期間檢出率逐年增加。結(jié)論1ADV是2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)兒童ALRTI的重要病毒病原之一，檢出率逐年上升。2本資料中3～4歲患兒檢出率高，在各年齡段之間檢出率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異檢出率在性別之間比較無差異以夏季檢出率高。3ADV陽性的重癥肺炎以3歲以下嬰幼兒多見。第二部分、2007年9月～2011年8月湖南地區(qū)急性下呼吸道感染住院患兒腺病毒分子流行病學(xué)調(diào)查目的了解2007年9月～2011年8月ADV在湖南地區(qū)ALRTI住院兒童中的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。對象及方法1242例ADV檢出陽性的ALRTI住院兒童NPAS標(biāo)本。2使用2對可擴(kuò)增所有ADV血清型的通用引物，對ADV陽性的NPAS標(biāo)本再次進(jìn)行巢氏擴(kuò)增ADVHEXONLOOP1基因片段。將巢式PCR陽性擴(kuò)增產(chǎn)物直接測序，弱陽性標(biāo)本進(jìn)行膠回收，連接，轉(zhuǎn)化，挑克隆，然后將菌液送測序，結(jié)果與GENBANK上的序列比對，確定其血清型。3對ADV在兒童ALRTI中的分子流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行分析。結(jié)果1242份ADV陽性標(biāo)本中，共檢出血清型11個(gè)，其中半數(shù)以上為3型132242，5454％，其次依次為7型65份，占2686％，1型22份，占909％，2型10份，占413％，6型5份，占207％，11型3份，占124％，5型，21型，37型，40型，41型各1份，占041％。3型是一直是研究期間主要優(yōu)勢血清型而2010年9月～2011年8月7型檢出增多，與3型一起成為該年度優(yōu)勢血清型。22010年9月～2011年8月7型檢出增多，該年度7型檢出陽性的ALRTI其熱程，住院時(shí)間，需要機(jī)械通氣比例，需要住ICU的比例等均高于其他型別。3型以及7型在重癥肺炎患兒中所占比例重，以7型更為常見。3所檢出血清型中①性別檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義②1～3型ADV，年齡檢出差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜001③3型秋季多見，7型夏季多見（P均＜001），其余血清型無季節(jié)流行特點(diǎn)。4結(jié)論1研究期間，共檢出ADV血清型11個(gè)，2007年9月～2010年8月3型是主要優(yōu)勢血清型。2010年9月2011年8月以3、7型為主要優(yōu)勢血清型。2不同血清型具有各自分子流行病學(xué)特點(diǎn)。3ADV陽性重癥肺炎患兒中以3型、7型常見，7型檢出陽性的ALRTI病情重于其他型別。第三部分、重癥腺病毒肺炎的臨床特點(diǎn)及診治體會目的提高對腺病毒肺炎的認(rèn)識，對重癥腺病毒肺炎的臨床特點(diǎn)以及診治情況進(jìn)行分析總結(jié)。對象及方法1研究對象2007年9月～2011年8月在湖南省人民醫(yī)院兒科醫(yī)學(xué)中心住院的65例確診為重癥腺病毒肺炎患兒。同期確診的28例難治性支原體肺炎以及13例典型川崎病患兒。2方法收集以上65例患兒臨床資料包括包括一般情況，臨床表現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)室檢查，影像學(xué)檢查，治療，預(yù)后等），對其臨床特點(diǎn)及診治情況進(jìn)行分析。并與28例難治性支原體肺炎患兒，13例典型川崎病患兒的臨床表現(xiàn)進(jìn)行比較。結(jié)果165例重癥腺病毒肺炎患兒平均年齡1717月，最小1月，最大120月。5歲以下63例，占9692％，其中6月～2歲38例。65例患兒中男性41例，女性24例，男女性別之比為171∶1。2臨床表現(xiàn)所有患兒均有咳嗽、肺部羅音，其次為持續(xù)高熱9692％，6365、熱程長（28例熱程＞7天，20例熱程＞14天）、喘息5165，7846％、肝腫大5231％，3465、脾腫大2769％，1865、川崎病樣改變（口腔黏膜充血、淺表淋巴結(jié)腫大、楊梅舌、手足硬腫、蛻皮）19例2923％，1965等。并出現(xiàn)合并癥，其中合并呼吸衰竭12例1846％，中毒性肝炎10例1538％，中毒性腦病12例1846％，中毒性心肌炎16例2462％，中度貧血17例2615％，心力衰竭6例923％，死亡4例。3影像學(xué)特點(diǎn)為由早期肺部斑片狀影迅速融合成大片影，雙肺多灶多葉侵潤22例，左肺實(shí)變19例，右肺實(shí)變8例，其中雙肺多灶多葉侵潤22例中以左肺實(shí)變明顯，實(shí)變以外的肺組織可有明顯氣腫節(jié)段性肺不張8例胸腔積液氣胸12例，皮下氣腫1例，肺門或縱隔淋巴結(jié)腫1例。4同難治性支原體肺炎相比，重癥腺病毒肺炎發(fā)病年齡以嬰幼兒多見，熱程＞14天發(fā)生率多，肝功能受損、意識改變、貧血以及肝脾增大表現(xiàn)較難治性支原體更常見，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。并可出現(xiàn)川崎病樣改變，合并癥發(fā)生率高。纖維支氣管鏡鏡下粘膜糜爛剝脫發(fā)生率較對照組高。兩組患兒均有肺部實(shí)變，但是重癥腺病毒肺炎肺部實(shí)變以左下肺多見，而難治性支原體肺炎患兒以右下肺以及左舌葉多見，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。519例不同程度川崎病樣改變的重癥腺病毒肺炎患兒同13例典型川崎病患兒臨床對比研究發(fā)現(xiàn)，兩組患兒均有高熱，嬰幼兒多見，可見楊梅舌，口腔黏膜充血，肝功能受損。但是重癥腺病毒肺炎患兒較對照組相比更易出現(xiàn)貧血，肺部大片實(shí)變表現(xiàn)。而淺表淋巴結(jié)腫大、手足硬腫、皮疹、肛周脫皮、冠脈擴(kuò)張、白細(xì)胞、CRP以及ESR升高在對照組更常見，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。典型川崎病患兒對丙種球蛋白沖擊治療效果好。6纖維支氣管鏡下檢查發(fā)現(xiàn)粘膜糜爛剝脫的患兒容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外心、腦、肝并發(fā)癥。765例患兒經(jīng)綜合治療后，大部分好轉(zhuǎn)出院，4例死亡。32例患兒1年的隨訪中發(fā)現(xiàn)患兒可遺留不同程度后遺癥表現(xiàn)為肺不張2例，閉塞性細(xì)支氣管炎8例，肺氣腫2例。結(jié)論重癥腺病毒肺炎具有以下特征年齡多見于6月到24月之間患兒持續(xù)高熱，咳喘較劇烈，感染中毒癥狀重，肝腫大，肺部由早期斑片狀影迅速融合成大片影，并容易出現(xiàn)呼吸功能不全及肺外并發(fā)癥。有著與與細(xì)菌性肺炎、難治性支原體肺炎不同的臨床特點(diǎn)。

簡介：分類號R725密級公開單位代碼10422學(xué)號2010230209⑧∥菇辦孑碩士學(xué)位論文專業(yè)學(xué)位論文題目260例毛細(xì)支氣管炎病毒病原學(xué)探討■R’R．STUDYONVIRALPATHOGENOFBRONCHIOLITISIUTWOHUNDREDANDSIXINFANTS合作導(dǎo)師2012年5月22日目錄中文摘要????????????????????．1英文摘要????????????????????．．3符號說明????????????????????．．4、￡J一刖吾??????????????????????．．5研究對象和方法?????????????????．6結(jié)果??????????????????????．8討論??????????????????????．12小結(jié)??????????????????????．16參考文獻(xiàn)????????????????????．17綜述??????????????????????．19致謝??????????????????????．．26

簡介：中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文SARS冠狀病毒基因組及其編碼結(jié)構(gòu)蛋白的生物信息學(xué)研究姓名劉樹春申請學(xué)位級別博士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師張學(xué)20040401測這些結(jié)構(gòu)蛋白的跨膜區(qū)、卷曲螺旋、信號肽等功能區(qū)特征。利用THEPREDICTPROTEINSERVER、PREDICTINGANTIGENICPEPTIDES、SMART34等軟件系統(tǒng)分析預(yù)測各個(gè)不同地區(qū)來源的SARSCOV結(jié)構(gòu)蛋白序列上的MOTIFS、DOMAINS及抗原決定簇等結(jié)構(gòu)功能域，分析比較基因突變對不同地區(qū)來源的結(jié)構(gòu)蛋白的功能結(jié)構(gòu)域及抗原決定簇的影響。結(jié)果59個(gè)SARSCOV全基因組序列中，共發(fā)現(xiàn)477個(gè)變異位點(diǎn)，其中包括28個(gè)位點(diǎn)的缺失、71個(gè)位點(diǎn)的插入和378個(gè)位點(diǎn)的堿基替代，變異率為0474％O。在378個(gè)位點(diǎn)上發(fā)生380種堿基替代，A、T、C、G的變異次數(shù)依次為115、113、87和65次。59個(gè)序列在進(jìn)化樹分析上可劃分成三個(gè)群。在四個(gè)主要結(jié)構(gòu)蛋白中，S蛋白的分子重量為1391091D；等電點(diǎn)為565；疏水性418％，親水性40O％；在41個(gè)不同地區(qū)來源的病毒株推測S蛋白的氨基酸序列中，有LO個(gè)病毒株在20個(gè)位點(diǎn)發(fā)生30次突變，突變率為0583％E。有31個(gè)毒株的S蛋白未發(fā)生突變。在蛋白質(zhì)的氨基酸成分構(gòu)成中，亮氨酸和蘇氨酸占的比例最高，色氨酸占的比例最低。在該蛋白序列靠近C端存在一個(gè)長度為20個(gè)氨基酸的半胱氨酸富集區(qū)；所有毒株推測S蛋白預(yù)測均發(fā)現(xiàn)三個(gè)低復(fù)雜度區(qū)域，一個(gè)卷曲螺旋和一個(gè)跨膜螺旋。在蛋白序列的N端的第114位殘基區(qū)間存在一個(gè)可能的信號肽。并且S蛋白存在一個(gè)球狀DOMAIN和一個(gè)蛋白質(zhì)家族DOMAIN，并發(fā)現(xiàn)三個(gè)HELIX結(jié)構(gòu)。在S蛋白氨基酸序列上預(yù)測獲得73個(gè)MOTIFS。絕大多數(shù)病毒株預(yù)測獲得61個(gè)抗原決定簇。只有SINOLL1、GD01和SHANHGAILY三個(gè)病毒株預(yù)測獲得的抗原決定簇?cái)?shù)量有所變化。N蛋白的分子重量為460250D，等電點(diǎn)為LO93。該蛋白的疏水性為327％，親水性為434％。在N蛋白的氨基酸構(gòu)成中，甘氨酸占的比例最高，達(dá)到107％；而半胱氨酸含量為零。在44個(gè)病毒株BL蛋白的422個(gè)氨基酸序列中，有7個(gè)病毒株在7個(gè)位點(diǎn)上發(fā)生9個(gè)突變J突變率為0485％0。預(yù)測44個(gè)病毒分離株N蛋白序列均不含有跨膜螺旋序列，全部序列均位于細(xì)胞膜外。也沒有卷曲螺旋與信號肽，但預(yù)測獲得4個(gè)低復(fù)雜度區(qū)域和一個(gè)蛋白質(zhì)家族DOMAIN。44個(gè)毒株的N蛋白氨基酸序列中，有40條序列預(yù)測有29個(gè)MOTIF，有四個(gè)毒株預(yù)測獲得28個(gè)MOTIF；所有病毒分離株的N2

簡介：點(diǎn)擊查看更多人類腸道病毒B組山東地方株的基因型分布及其所致疾病分子流行病學(xué)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：NK4慢病毒載體的構(gòu)建及對人肝癌細(xì)胞的生物學(xué)特性的影響THECONSTRUCTIONOFNK4RECOMBINANTLENTIVIRALVECTORANDTHEEFFECTONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANHEDATOCARCMOMACELL●●1導(dǎo)師亓5，一級學(xué)科論文課題起止時(shí)間2QQ生三月二2Q12生圣旦中國醫(yī)科大學(xué)遼寧2012年5月目錄一、摘要中文論著摘要”1英文論著摘要”4二、英文縮略語。7三、論文畝FR言8刖舌‘實(shí)驗(yàn)材料與方法9實(shí)驗(yàn)結(jié)果20討念29結(jié)論3L四、本研究創(chuàng)新性的自我評價(jià)32五、參考文獻(xiàn)‘33六、附錄綜述“35在學(xué)期間科研成績43致謝44個(gè)人簡介45

簡介：南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒潛伏膜蛋白1胞外區(qū)融合蛋白的表達(dá)及其在血清學(xué)檢測中的應(yīng)用姓名張大為申請學(xué)位級別碩士專業(yè)耳鼻咽喉頭頸外科指導(dǎo)教師陳仁杰朱進(jìn)20080601南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文EB病毒潛伏膜蛋白L胞外區(qū)融合蛋白的表達(dá)及其在血清學(xué)檢測中的應(yīng)用中文摘要鼻P因癌NASOPHARYNGEALCARCINOMA，NPC是鼻咽上皮來源的惡性腫瘤，在我國南方具有很高的發(fā)病率，對NPC的血清學(xué)和組織活檢及EB病毒EPSTEINBARRVIRUS，EBV的基因表達(dá)檢測都表明EB病毒不僅與鼻咽癌的發(fā)病密切相關(guān)，而且對其發(fā)生發(fā)展起重要作用。EB病毒潛伏膜蛋白1LATENTMEMBRANEPROTEIN1LMP1能夠在鼻咽癌患者的鼻咽拭子分泌物檢測到。臨床研究中，應(yīng)用PCR技術(shù)檢測鼻咽拭子分泌物診斷鼻咽癌，其靈敏度和特異度分別為945％和100％。LMP1在EBV致瘤機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵性的作用它能使B淋巴細(xì)胞永生化和鼠纖維母細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)改變；在RAT1細(xì)胞上，LMP一1使其血清依賴性降低、接觸抑制和粘附作用喪失，接種裸鼠內(nèi)可形成腫瘤。LMP1在鼻咽癌細(xì)胞普遍表達(dá)，并與鼻咽癌的進(jìn)展呈正相關(guān)，因此，LMP1在鼻咽癌的形成中具有重要的生物學(xué)意義?；谝呙缂夹g(shù)的發(fā)展，EBV特異性的CD8細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞CYTOTOXICTLYMPHOCYTES，CTL被認(rèn)為是治療EBV相關(guān)的鼻口因癌NPC和復(fù)發(fā)性霍杰金病HD首選方案。EBV表達(dá)的LMP1與LMP一2是僅有的兩種適合于治療性強(qiáng)化NPC和HD患者CTL反應(yīng)的目標(biāo)抗原。因此，為了增強(qiáng)其抗原性，本研究選用了LMP1胞外區(qū)作為目的蛋白進(jìn)行原核表達(dá)，為進(jìn)一步制備LMP一1抗體制備及研究3

簡介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文單純皰疹病毒2型GG2“獨(dú)特區(qū)”基因的克隆表達(dá)及其血清學(xué)診斷的價(jià)值初探姓名王茜申請學(xué)位級別碩士專業(yè)皮膚性病學(xué)指導(dǎo)教師曾抗周再高20060515摘要GB、GC、GD、倒百、GG、GWGL、GL、GM／GN、GI。其中GG攜帶有HSV型特異抗原決定簇，GG一2在單純皰疹2型病毒診斷、分型、疫苗研究中有舉足輕重的地位。GG一2由US4編碼，基因片段長度為2100BP，可以編碼699個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。本研究分析了單純皰疹病毒I型糖蛋白G一1和單純皰疹病毒II型糖蛋白G2的B細(xì)胞抗原表位，并用信息學(xué)軟件比較了兩者之間的基因差異。研究發(fā)現(xiàn)HSV2的GG一2基因全長中包括一個(gè)與HSV1的GG1基因高度同源的區(qū)域和一個(gè)“獨(dú)特區(qū)”。GG1基因和GG一2基因在“獨(dú)特區(qū)”中的同源性非常低。對GO2蛋白的B細(xì)胞抗原表位預(yù)測發(fā)現(xiàn)，在GG一2蛋白中存在7段抗原指數(shù)以及表面可能性強(qiáng)的肽段相對集中區(qū)域。另有研究者發(fā)現(xiàn)，HSV2的GG2基因序列抗原區(qū)域極少突變，即使出現(xiàn)了點(diǎn)突變也不會削弱GG一2的血清學(xué)活性。該報(bào)告進(jìn)一步證實(shí)GG一2基因可以作為型特異性抗原，同時(shí)指出GG一2基因的保守性是作為HSV2特異疫苗成分的先決條件。因此，本研究將靶蛋白抗原鎖定為GG2的“獨(dú)特區(qū)”GG一2T。對單純皰疹病毒GG一2T進(jìn)行擴(kuò)增、克隆。在原核系統(tǒng)中表達(dá)，并對表達(dá)蛋白的蛋白進(jìn)行純化，對其抗原活性進(jìn)行初步研究。二、研究方法和內(nèi)容1、從臨床確診病人水皰部位取材、分離病毒并在VERO細(xì)胞中培養(yǎng)。2、根據(jù)GENBANK提供的單純皰疹病毒II型糖蛋白G2的基因組序列，設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，上游的引物序列是“5’一魚型旦￡ATGGCACGACCCACGGAAGACG一3”’；下游的引物序列是5CTCGAGCGGGGTTGCGGGTCCGG一3’。以VERO細(xì)胞病毒培養(yǎng)液上清提取的DNA為模板，擴(kuò)增GG一2基因，構(gòu)建克隆載體PGEMTG2，通過PCR鑒定。3、從GCNBANK中下載單純皰疹病毒1型糖蛋白G1序列，輸入LASERGENE軟件包中的EDITSEQ軟件中，截取GG一1基因片段，翻譯成氨基酸序列。利用CLUSTALX軟件將擴(kuò)增的GG一2基因與下載的GG一1基因片段核昔酸和氨基酸序列進(jìn)行比較。利用PROETEAN和DNAMAN軟件對單純皰疹病毒1型和2型的糖蛋白G進(jìn)I】

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簡介：手足口病是由腸道病毒引起的急性傳染病，以腸道病毒71型EV71和柯薩奇病毒A組16型CA16感染為主。EV71病毒和CA16病毒它們的共同特點(diǎn)為病毒顆粒大小為2430NM，無外膜、單股正鏈RNA、四種顆粒蛋白VP1VP4形成的五聚體、六聚體構(gòu)成病毒顆粒衣殼。而EV71病毒感染更加倍受關(guān)注，因?yàn)樗鶗?dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，甚至死亡，其致死原因主要為嚴(yán)重的神經(jīng)病變，如腦干腦炎及無菌性腦膜炎。CA16病毒感染較EV71感染癥狀輕，但能與EV71病毒合并感染并且交替流行，近年來也頗受觀注。這些年來，手足口病在亞太地區(qū)頻繁暴發(fā)，已逐漸成為一種潛在的危害全球公共健康的疾病。快速有效的診斷能夠預(yù)防疾病傳播，減少病人死亡。診斷腸道病毒感染的方法有病毒分離，核酸檢測，血清學(xué)檢測。本研究主要內(nèi)容是通過實(shí)時(shí)熒光PCR、病毒分離及中和實(shí)驗(yàn)診斷方法，對2009年～2011年珠江醫(yī)院手足口病人進(jìn)行病原學(xué)檢測，從而分析CA16病毒三年來流行特點(diǎn)同時(shí)通過對CA16病毒VP1基因測序后構(gòu)建基因進(jìn)化樹，分析2010年CA16病毒基因型，為CA16病原的流行趨勢，及進(jìn)化規(guī)律提供參考根據(jù)2009～2011年手足口病人的臨床資料，分析不同腸道病毒導(dǎo)致心肌酶譜變化關(guān)系此外，對收集的手足口病人血清進(jìn)行CA16IGM及EV71IGM抗體檢測，分析CA16IGM抗體變化動態(tài)規(guī)律及其與不同腸道病毒感染血清IGM抗體的交叉反應(yīng)。通過對這些病原學(xué)資料及血清學(xué)的研究，了解手足口病CA16病毒流行趨勢及基因進(jìn)化規(guī)律，對疾病的流行及暴發(fā)起到預(yù)防監(jiān)控作用。因此，本研究分為以下兩大章節(jié)第一章2009～2011年廣州地區(qū)兒童手足口病柯薩奇病毒A16型CA16流行病學(xué)調(diào)查2009～2011三年間南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院住院及門診臨床診斷為手足口病患者共1239例，其中男813例，女426例，門診病人525例，住院病人714例，平均年齡35個(gè)月。收集這些病人的臨床資料、肛拭子及血清標(biāo)本。病人的臨床資料包括年齡、性別、發(fā)病時(shí)間，發(fā)病癥狀，心肌損傷指標(biāo)，標(biāo)本采集時(shí)間。肛拭子標(biāo)本共采集1239份，另從住院患者中隨機(jī)獲取血清標(biāo)本497份。所有肛拭子標(biāo)本進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，部分標(biāo)本進(jìn)行病毒分離后實(shí)時(shí)熒光PCR驗(yàn)證。2010年13株CA16病毒液及CA16臨床肛拭子標(biāo)本進(jìn)行VP1基因擴(kuò)增測序，隨后進(jìn)化樹分析。收集的497份急性期及恢復(fù)期血清，全部進(jìn)行心肌酶譜檢測。心肌酶譜檢測指標(biāo)包括谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、肌酸肌酶CK、肌酸激酶同工酶CKMB、乳酸脫氫酶LDH、羥丁酸脫氫酶HBDH。2009～2011年所有臨床診斷手足口病病人中年齡最大35歲，最小1個(gè)月。說明成人兒童均可能感染手足口病。從三年的結(jié)果來看這些患兒年齡集中在5歲以內(nèi)，發(fā)病高峰在1～3歲，0～1歲兒童感染例數(shù)較少。這可能是因?yàn)?～1歲兒童母體抗體的存在，導(dǎo)致其不易感染，發(fā)病率較低，而5歲以內(nèi)兒童免疫系統(tǒng)還不完善，免疫力較低下，又無母體抗體的保護(hù)，成為手足口病的高發(fā)人群。從性別來看2009～2011年所有臨床診斷手足口病患兒男女比例分別為2341、1871及1881。其中CA16病毒感染患者男女比例分別為2751、1491及2571。這些結(jié)果均顯示男性感染的機(jī)率高于女性，這可能是因?yàn)槟泻⒈扰⒑脛?，增加密切接觸腸道病毒感染物品及相互接觸傳染的機(jī)會。本院所采集的肛拭子標(biāo)本實(shí)時(shí)熒光PCR結(jié)果顯示2009年所有臨床診斷手足口107例，檢出94例為腸道病毒感染，13例為陰性，檢出率8785％2010年所有臨床診斷手足口553例，檢出505例為腸道病毒感染，48例為陰性，檢出率9132％2011年所有臨床診斷手足口579例，檢出515例為腸道病毒感染，檢出率8895％。三年中CA16病毒感染引起的手足口病分別占所有腸道病毒感染手足口病的4369％4594、1980％122505及2000％107515。這些數(shù)據(jù)表明CA16病毒是手足口病感染的主要病原之一，尤其2009年廣州地區(qū)流行的手足口病原以CA16為優(yōu)勢血清型，近兩年有所下降。從時(shí)間分布來看廣州地區(qū)2009年手足口病發(fā)病高峰在4～6月2010年手足口病發(fā)病始于3月份，發(fā)病高峰在4～7月，峰值在5月份2011年手足口病發(fā)病高峰在5～8月份，峰值在6月份，11月份也有一個(gè)發(fā)病小高峰，所以其曲線圖呈現(xiàn)“雙峰”形狀。2009、2010年CA16病毒的流行情況與當(dāng)年總的臨床診斷手足口病流行情況相似2011年CA16病毒發(fā)病始于5月份，高峰在7～12月，峰值在11月。從臨床癥狀來看，根據(jù)2010年版的衛(wèi)生部手足口病診療指南，2010年手足口病重癥49例，CA16病毒引起的重癥手足口病2例，占408％，2011年手足口病重癥48例，只有1例是由CA16病毒引起，占208％?？梢奀A16病毒感染引起手足口病一般癥狀較輕，極少導(dǎo)致重癥。將部分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測為CA16病毒標(biāo)本進(jìn)行病毒分離培養(yǎng)后再用實(shí)時(shí)熒光PCR重新分型驗(yàn)證。2009年、2010年CA16病毒共分離58例，陽性數(shù)為26，總的分離陽性率為4483％2658。經(jīng)3代盲傳，病毒分離培養(yǎng)出現(xiàn)病變效應(yīng)的細(xì)胞上清實(shí)時(shí)熒光PCR初步鑒定，檢測結(jié)果與原始標(biāo)本實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測結(jié)果一致。進(jìn)一步確認(rèn)原始標(biāo)本為CA16病毒。我們可以發(fā)現(xiàn)病毒分離方法，檢測敏感性較低。對所收集的497份臨床診斷手足口病人血清進(jìn)行心肌酶譜檢測。發(fā)病0～7天內(nèi)血清為急性期血清，大于7天收集的血清為恢復(fù)期血清，其中7～14天內(nèi)為恢復(fù)期（早期）血清。再將這些血清按照患者感染的不同病毒種類分為三種EV71病毒感染組、CA16病毒感染組以及其它腸道病毒感染組。EV71病毒、CA16病毒以及其它腸道病毒感染者急性期心肌標(biāo)志物異常率分別為2660％、4419％及4554％。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，三種病毒心肌標(biāo)志物異常率有差別X214136，P0001，且CA16病毒感染組急性期血清心肌標(biāo)志物異常率高于EV71病毒感染組。這一結(jié)果表明，CA16病毒感染可能更易侵犯心肌細(xì)胞，引起心肌損傷。結(jié)合上面的臨床癥狀分析結(jié)果，相比之下，EV71病毒感染更易導(dǎo)致重癥，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷。CA16病毒感染組急性期與恢復(fù)期（早期）比較，心肌指標(biāo)CK、CKMB差異有顯著意義（CKT3621，P0000CKMBT3390，P0001）相比這下，EV71病毒感染組兩個(gè)指標(biāo)均無差異CKT1715，P0088CKMBT1221，P0223。從這一結(jié)果我們可以發(fā)現(xiàn)CA16病毒感染一周后，心肌損傷有所恢復(fù)。盡管EV71病毒感染患者心肌標(biāo)志物異常率低于CA16病毒感染患者，但一旦發(fā)生心肌損傷，其恢復(fù)較慢。此外，我們還對2010年的CA16病毒株進(jìn)行基因進(jìn)化樹分析。19株CA16病毒成功擴(kuò)增并對13株病毒VP1基因進(jìn)行測序，發(fā)現(xiàn)這13株均屬于B1型，其中4株為B1B，另9株為B1A，表明病毒存在一定變異和重組或具有不同祖先來源。這13株病毒株的VP1區(qū)段與已登錄GENBANK的廣東CA16序列比較與2005年以前廣東深圳CA16序列比較，親緣關(guān)系稍遠(yuǎn)，與2009年深圳毒株比較，親緣關(guān)系較近，原因可能是廣東深圳兩地地理位置較近，但早期毒株可能由不同祖先進(jìn)化，而近期兩地毒株可能存在共同祖先與臺灣地區(qū)CA16毒株比較結(jié)果，親緣關(guān)系也稍遠(yuǎn)，表明毒株可能進(jìn)化來源不同。第二章CA16IGM抗體動態(tài)規(guī)律分析2009年3月至2010年11月南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室診斷為手足口病人中隨機(jī)抽取230人，其中男156人，女74人，年齡范圍為4～169個(gè)月，中位年齡26個(gè)月。收集這些病人從入院至出院的系列血清，共收集434份急性期和恢復(fù)期血清，血清采集時(shí)間從發(fā)病第一天至158天不等。另獲得75例呼吸道病毒感染病人系列血清105份。采用捕獲ELISA法檢測這些血清。實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測肛拭子標(biāo)本將病毒分類分為EV71病毒、CA16病毒及其它腸道病毒。其它腸道病毒以及呼吸道病毒感染患者血清再通過中和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其為非EV71、CA16病毒感染。我們對CA16病毒感染患者血清進(jìn)行捕獲酶聯(lián)法檢測進(jìn)而分析CA16IGM抗體的動態(tài)變化規(guī)律。結(jié)果為發(fā)病第一天檢出率25％，發(fā)病第二天37％，發(fā)病第三天67％，發(fā)病第五天達(dá)86％，直到發(fā)病第八天，血清CA16IGM抗體檢出率可達(dá)100％。CA16IGM抗體可以在發(fā)病第一天檢出，并且可以持續(xù)數(shù)周。發(fā)病20周后，IGM抗體檢出率迅速下降。發(fā)病90天后，4份血清中只有一份為弱陽性SCO109。另一方面，通過對EV71病毒、其它腸道病毒、以及呼吸道病毒感染患者血清進(jìn)行CA16IGM捕獲ELISA檢測，分析其交叉反應(yīng)。CA16IGM捕獲ELISA檢測結(jié)果211份EV71病毒感染患者血清中58份陽性，其它腸道病毒感染患者48份血清中16份陽性，呼吸道病毒感染患者血清105份中3份檢測陽性。我們將全部66例CA16病毒感染病人119份血清分別進(jìn)行EV71IGM捕獲ELISA和CA16IGM捕獲ELISA檢測。檢測結(jié)果表明303％36119的CA16病毒感染病人血清，EV71IGM抗體檢測陽性，存在交叉。然而這36份交叉血清中有33份917％CA16IGM抗體捕獲ELISA檢測OD450值高于EV71IGM抗體捕獲ELISA檢測。盡管存在交叉反應(yīng)，但聯(lián)合兩種方法檢測，比較其OD450的比值，可以成功區(qū)分是CA16病毒感染還是與EV71病毒的交叉反應(yīng)導(dǎo)致的假陽性。為了比較CA16IGM酶聯(lián)法與實(shí)時(shí)熒光PCR檢測法的一致性，我們將同一天收集的肛拭子標(biāo)本和血清標(biāo)本檢測結(jié)果進(jìn)行比較評價(jià)。結(jié)果兩種方法檢測CA16病毒感染無差異MCNEMAR檢驗(yàn)P0148，但是KAPPAVALUE0276P0000，相關(guān)系數(shù)偏低，表明兩種方法相關(guān)性不是很好?？偟膩碚fCA16IGM捕獲ELISA檢測CA16病毒感染是一種簡易、經(jīng)濟(jì)的診斷方法。根據(jù)以上兩章節(jié)的研究，小結(jié)如下1對2009～2011年手足口病流行病學(xué)調(diào)查，分析三年間CA16病毒的流行概況。2009、2010及2011年廣州地區(qū)手足口病以CA16病毒感染占所有腸道病毒感染手足口病患者的4787％4594、1980％122505及2000％107515。廣州地區(qū)由CA16病原導(dǎo)致的手足口病有所下降。22009、2010年CA16病毒的流行情況與當(dāng)年總手足口病流行情況相似，發(fā)病高峰在4～7月2011年CA16病毒感染導(dǎo)致手足口病始于5月，高峰在7～12月。三年間所有手足口患兒及CA16感染導(dǎo)致的手足口病均為男性患兒高于女性患兒?；純喊l(fā)病年齡集中在5歲以內(nèi)，5歲以內(nèi)所有手足口病患兒及CA16病毒感染患兒的比例分別為9211％、9635％。3CA16病毒感染患兒急性期心肌酶標(biāo)志物異常率高于EV71感染患兒。CA16病毒感染患兒急性期（0～7天）與恢復(fù)早期（8～14天）CK、CKMB均有差異。EV71病毒感染患兒急性期與恢復(fù)早期CK、CKMB統(tǒng)計(jì)無差異。這一結(jié)果表明CA16病毒比EV71病毒可能更易親嗜心肌細(xì)胞，但心肌酶標(biāo)志物恢復(fù)正常較EV71病毒感染快。4對13株2010年CA16病毒VP1基因擴(kuò)增后測序，進(jìn)化樹分析結(jié)果為B1型。說明2010年廣州地區(qū)流行的CA16病毒可能為B1型。5CA16IGM抗體動態(tài)規(guī)律研究表明CA16IGM抗體不僅可以在發(fā)病第一天產(chǎn)生，并且可以持續(xù)數(shù)周，直到發(fā)病第八天，血清CA16IGM抗體檢出率可達(dá)100％。發(fā)病20周后，IGM抗體檢出率迅速下降。發(fā)病90天后，4份血清中只有一份檢出很微弱的陽性SCO1096由于腸道病毒間存在一些同源性，有共同的氨基酸序列，故CA16IGM檢測存在一定交叉反應(yīng)。分別對EV71病毒、其它腸道病毒、以及呼吸道病毒感染患者血清進(jìn)行CA16IGM捕獲ELISA檢測，檢測結(jié)果陽性率分別為2748％58211、3333％1648及286％3105。盡管存在交叉反應(yīng)，但聯(lián)合EV71IGM及CA16IGM捕獲ELISA兩種方法檢測，比較其OD450的比值，可以成功區(qū)分是CA16病毒感染還是與EV71的交叉反應(yīng)導(dǎo)致的假陽性。7對來自同一天收集的肛拭子標(biāo)本及血清標(biāo)本進(jìn)行檢測，比較實(shí)時(shí)熒光PCR與CA16IGM捕獲ELISA方法一致性，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明兩種方法沒有差異，但相關(guān)系數(shù)不高?？傊?，CA16IGM酶聯(lián)檢測法可以在手足口病大規(guī)模流行時(shí)進(jìn)行早期診斷復(fù)查，適合在沒有開展分子生物學(xué)診斷方法的基層醫(yī)院使用。

簡介：目的了解艾滋病病毒感染者病人自殺未遂的發(fā)生情況，揭示自殺未遂的時(shí)間分布和行為特征，探討艾滋病病毒感染與自殺未遂的關(guān)系及自殺未遂相關(guān)的影響因素，為預(yù)防艾滋病病毒感染者病人自殺提供科學(xué)依據(jù)。方法采用現(xiàn)況調(diào)查方法，由經(jīng)統(tǒng)一培訓(xùn)的調(diào)查員在陽江市和中山市對195例艾滋病病毒感染者病人進(jìn)行面對面詢問式的問卷調(diào)查，獲取一般人口學(xué)資料、艾滋病病毒感染、吸毒、自殺意念和自殺未遂等信息。以得知艾滋病病毒感染時(shí)間、得知感染后6月和得知艾滋病診斷時(shí)間為界將自殺未遂劃分為四個(gè)階段，即得知艾滋病病毒感染以前、得知感染后6月內(nèi)、得知感染后6月到得知艾滋病診斷前、得知艾滋病診斷后，比較各個(gè)時(shí)間段的自殺未遂發(fā)生情況。采用壽命表方法分析艾滋病病毒感染后自殺未遂發(fā)生的時(shí)間分布，COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型探討自殺未遂與艾滋病病毒感染的關(guān)系及自殺未遂的影響因素。結(jié)果研究對象自殺未遂率和自殺意念率分別為1949％（38195）和4051％（79195），近一年自殺未遂率為667％（13195）。38例自殺未遂者中，6316％（2438）首次自殺未遂發(fā)生是在得知艾滋病病毒感染后，感染后自殺未遂率比感染前高（C2401，P005），感染后自殺未遂生存曲線下降的速度比得知感染前快（C24575，P0001），隨著疾病進(jìn)展，自殺未遂發(fā)生呈上升趨勢（Z2352，P00001）。得知艾滋病病毒感染后自殺的主要原因?yàn)榘滩?，?581％，自殺的主要目的以解脫痛苦主，占50％以上。得知艾滋病病毒感染后首次自殺未遂發(fā)生的時(shí)間風(fēng)險(xiǎn)曲線呈雙峰分布，自殺風(fēng)險(xiǎn)分別在感染后第2年和第6、7年最高。COX回歸分析顯示，艾滋病病毒感染與自殺未遂相關(guān)，感染后自殺未遂的風(fēng)險(xiǎn)是感染前的834倍（95％CI為4051709），調(diào)整吸毒因素后，艾滋病病毒感染與自殺未遂關(guān)聯(lián)仍然有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，調(diào)整后RR95％CI為7203521475；多因素分析顯示遭受歧視是自殺未遂的危險(xiǎn)因素。結(jié)論艾滋病病毒感染者病人具有較高的自殺危險(xiǎn)，是自殺的高危人群，應(yīng)關(guān)注艾滋病病毒感染者病人的自殺問題，在艾滋病自愿咨詢檢測門診中開展心理危機(jī)評估與干預(yù)。艾滋病病毒感染和遭受歧視作為的自殺未遂影響因素，提示我國艾滋病病毒感染者病人可能遭受較為嚴(yán)重的不良情感應(yīng)激。需進(jìn)一步探索艾滋病病毒感染者病人產(chǎn)生自殺行為的原因，采取有效措施預(yù)防自殺。

簡介：點(diǎn)擊查看更多鉀離子通道基因KCNJ15在重型病毒性肝炎中的作用及免疫學(xué)機(jī)制研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：研究目的腸道病毒感染是導(dǎo)致兒童麻痹的重要病因除脊灰病毒外非脊灰腸道病毒中的許多血清型可引起麻痹河北省已連續(xù)11年無脊灰野病毒循環(huán)但在對急性弛緩性麻痹AFP病例的監(jiān)測中檢出許多疫苗來源的脊灰病毒及非脊灰腸道病毒NPEV該研究主要研究AFP病例的病毒學(xué)和流行病學(xué)特征為消滅脊灰工作及預(yù)防和控制由NPEV所致麻痹提供技術(shù)參考研究方法研究對象為19972002年河北省15歲以下兒童AFP病例監(jiān)測系統(tǒng)中所有AFP病例對AFP病例進(jìn)行流行病學(xué)、病毒學(xué)及臨床特征的分析病例的臨床及流行病學(xué)資料來源于監(jiān)測系統(tǒng)中的個(gè)案表和隨訪表按世界衛(wèi)生組織WHO脊髓灰質(zhì)炎病毒檢驗(yàn)手冊規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)方法采用RD、L20B及HEP2三種細(xì)胞進(jìn)行病毒分離及型別鑒定脊灰病毒陽性分離物送國家脊灰實(shí)驗(yàn)室采用PCRRFLP方法進(jìn)行型內(nèi)鑒別

簡介：評閱人4評閱人5答辯委員會主席委員1委員2委員3委員4委員5陳志敏主任醫(yī)師浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院黃先玫主任醫(yī)師杭州市第一人民醫(yī)院陳潔主任醫(yī)師浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院答辯日期2011225，毛丑冒A矛，A％礦TTJJFIZ構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)浙江太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名岔糾簽字日期_IJ年弓月砂日簽字日期、‘‘年亨移日