簡(jiǎn)介：本研究針對(duì)近些年北京地區(qū)腎綜合征出血熱HFRS疫情發(fā)展形勢(shì)，在北京9個(gè)區(qū)縣選擇代表性生境，采用多點(diǎn)橫斷面與定點(diǎn)縱向相結(jié)合的現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查方法，在弄清漢坦病毒HV宿主群落生態(tài)學(xué)和種群動(dòng)態(tài)的基礎(chǔ)上，結(jié)合血清學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，對(duì)宿主動(dòng)物HV感染進(jìn)行了系統(tǒng)的流行病學(xué)研究。其主要結(jié)果如下1共采集到以鼠類為主的HV宿主動(dòng)物9種849只，總帶毒率69％。通過(guò)群落結(jié)構(gòu)、極點(diǎn)排序和種群季節(jié)消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)分析及其與HV感染狀況的關(guān)聯(lián)分析，從生態(tài)學(xué)角度闡明了北京不同生境鼠類群落特征及HV優(yōu)勢(shì)宿主褐家鼠和小家鼠對(duì)HFRS流行的作用；感染率較高的自然隔離褐家鼠種群密度變化、種群結(jié)構(gòu)變化與所攜帶HV之間具有相關(guān)性；城郊褐家鼠所偏嗜的一些棲息生境為北京HFRS發(fā)生高危地區(qū)，市區(qū)小家鼠在HV傳播中的優(yōu)勢(shì)地位增強(qiáng)。2多因素非條件LOGISTIC回歸分析結(jié)果顯示優(yōu)勢(shì)宿主褐家鼠一些特征，如體重＞60G、體長(zhǎng)＞15CM、體表有疤痕、雄性睪丸位于陰囊中、處于繁殖期的成年鼠是其自然感染HV的危險(xiǎn)因素，從而進(jìn)一步證實(shí)了HV在鼠間平行傳播的規(guī)律。3褐家鼠不同臟器中HV基因變異、定量分布相對(duì)差異的比較結(jié)果顯示肺臟中HV帶毒量高于其它臟器，且HV基因更易發(fā)生變異，提示肺臟易受HV侵犯與寄生，HV基因在該器官中受宿主免疫壓力更大，這對(duì)于進(jìn)一步了解HV的貯存和傳播機(jī)制具有重要意義。4通過(guò)比較鼠源HV代表株及其部分人源HV基因序列，確定了北京地區(qū)近年來(lái)主要流行株型別，發(fā)現(xiàn)了交通樞紐、人群和農(nóng)副產(chǎn)品集散地一些鼠源HV具有更大的變異。5通過(guò)比較優(yōu)勢(shì)動(dòng)物宿主遺傳多態(tài)性與對(duì)應(yīng)HV基因差異分布，發(fā)現(xiàn)農(nóng)副產(chǎn)品集散地褐家鼠某地理種群與其來(lái)源的HV基因差異存在對(duì)應(yīng)關(guān)聯(lián)。提示了兩者協(xié)同演化的歷史及北京HV隨外埠褐家鼠遷移而輸入的危險(xiǎn)性。總之，本研究通過(guò)對(duì)北京地區(qū)HV宿主生態(tài)學(xué)、HV感染分子流行病學(xué)及其優(yōu)勢(shì)宿主HV相互關(guān)系的研究，分析了北京近年來(lái)HFRS疫情攀升的主要原因，從而為北京市更加科學(xué)、有針對(duì)性地制定HFRS預(yù)防和控制措施提供了決策依據(jù)和新的思路。

簡(jiǎn)介：中圖分類號(hào)密級(jí)急性呼吸道病毒感染患兒病原學(xué)及血ILIO水平變化的研究STUDYOFTHEPATHOGENANDSERUMIL．10LEVELINCHILDRENWITHACUTERESPIRATORYVIRALINFECTIONS計(jì)學(xué)位論文36頁(yè)表格1O個(gè)插圖5幅指導(dǎo)教師崔振澤教授申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士學(xué)位培養(yǎng)單位大連醫(yī)科大學(xué)大連市兒童醫(yī)院張華娟學(xué)科專業(yè)兒科學(xué)完成時(shí)間二O一四年五月答辯委員會(huì)主席關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說(shuō)明本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)大連醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“√“1．保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書。2．不保密口。作者簽名導(dǎo)師簽名日期年月日日期年月日

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簡(jiǎn)介：背景對(duì)慢性乙型肝炎的自然史研究表明，慢性HBV感染者病情進(jìn)展和預(yù)后與HBV復(fù)制密切相關(guān)。高病毒血癥、HBEAG持續(xù)陽(yáng)性、ALT水平高或反復(fù)波動(dòng)是發(fā)生肝硬化的主要高危因素。自發(fā)性或經(jīng)抗病毒治療后HBEAG血清轉(zhuǎn)換，且HBVDNA持續(xù)轉(zhuǎn)陰和ALT持續(xù)正常者的生存率較高。在同樣的遺傳背景下，HBV病毒負(fù)荷是肝硬化患者發(fā)生HCC的最重要的高危因素。說(shuō)明HBV活動(dòng)復(fù)制是影響慢性HBV感染者轉(zhuǎn)歸的最重要因素，抗病毒治療是慢性乙型肝炎治療的關(guān)鍵所在。Α干擾素類和核苷類似物是目前被公認(rèn)為有效的抗乙肝病毒藥物。和Α干擾素相比，核苷類似物其毒副作用少，耐受性好，使用方便，能應(yīng)用于不能使用干擾素的慢性HBV感染患者，是目前慢性乙型肝炎抗病毒治療研究的熱點(diǎn)。其中，阿德福韋酯與其他幾種核苷類似物比較，一方面具有耐藥率低的特點(diǎn)，治療1年未檢出阿德福韋酯耐藥株；另一方面，與拉米夫定、恩替卡韋及特比夫定無(wú)交叉耐藥。因此，阿德福韋酯在核苷類似物中有著特殊的地位，已代替拉米夫定成為一線抗乙肝病毒藥物之一。阿德福韋酯可明顯抑制HBVDNA復(fù)制，但其抑制作用在不同個(gè)體中差異較大，僅部分病例獲得完全應(yīng)答。影響阿德福韋酯抗乙肝病毒療效的因素不十分清楚。血清HBVDNA、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、HBEAG血清轉(zhuǎn)換是常用于抗乙肝病毒藥物療效評(píng)價(jià)的主要指標(biāo)。從理論上講，抗病毒療效主要受到藥物、HBV和人體免疫狀態(tài)三方面的影響，如用藥療程、HBV基因型、治療前HBVDNA含量及病毒變異及ALT水平等。目的本研究的主要目的在于評(píng)價(jià)阿德福韋酯對(duì)中國(guó)慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA的抑制效果，同時(shí)，研究HBV基因型、治療前HBVDNA載量、ALT水平、HBEAG狀態(tài)等與阿德福韋酯病毒學(xué)應(yīng)答的關(guān)系，為制訂個(gè)體化抗病毒治療方案提供重要參考信息。方法符合慢性乙型肝炎診斷及方案入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)病例56例，血清HBVDNA定量≥10拷貝／ML、血清ALT水平15且拷貝／ML，0274±114LOG拷貝／MLP拷貝／ML，ALT復(fù)常率達(dá)714％40／56，HBEAG血清轉(zhuǎn)換率196％9／46。286％16／56獲得完全應(yīng)答，其中HBEAG陽(yáng)性／抗HBE陰性者7例，HBEAG陰性／抗HBE陽(yáng)性者9例。說(shuō)明阿德福韋酯能通過(guò)抑制HBV復(fù)制改善肝功能，促進(jìn)HBEAG血清轉(zhuǎn)換。HBV基因型分型結(jié)果發(fā)現(xiàn)，52例患者中B型和C型分別占538％和462％，未發(fā)現(xiàn)其他基因型，說(shuō)明B型和C型是本地區(qū)HBV感染的主要基因型。比較兩種基因型感染者的基線HBVDNA載量、ALT水平、HBEAG狀態(tài)等無(wú)明顯差異性分布，說(shuō)明慢性HBV感染者的HBVDNA載量、ALT水平及HBEAG狀態(tài)與感染HBV基因型B型或C型無(wú)顯著相關(guān)。HBV基因型與阿德福韋酯療效的關(guān)系目前并不十分清楚。比較B型和C型感染者治療40周的療效發(fā)現(xiàn)，兩組HBVDNA載量的變化、ALT復(fù)常率及HBEAG血清轉(zhuǎn)換率無(wú)明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明感染HBV基因型B型或C型對(duì)阿德福韋酯的療效相當(dāng)，療效不受基因型影響?；€HBVDNA拷貝／ML組及基線HBVDNA≥110拷貝／ML組的HBVDNA陰轉(zhuǎn)率分別為842％、405％P拷貝／ML和732±103LOG10拷貝／MLP拷貝／ML者，使用阿德福韋酯治療后的HBVDNA陰轉(zhuǎn)率、HBEAG血清轉(zhuǎn)換率及完全應(yīng)答率均較高?；€ALT水平≥5ULN者，使用阿德福韋酯治療后HBVDNA載量下降幅度、HBVDNA陰轉(zhuǎn)率明顯高于ALT水平較低者，說(shuō)明基線ALT水平也是影響阿德福韋酯療效的因素之一，基線ALT水平越高，療效越好。但本研究未顯示ALT水平對(duì)完全應(yīng)答有明顯影響?；€HBEAG陰性組和HBEAG陽(yáng)性組NHBVDNAN轉(zhuǎn)率分別為923％12／13和442％19／43P拷貝／ML和737±090LOG拷貝／ML，P拷貝／ML，ALT≥5倍正常值上限是取得療效的有利因素。感染HBV基因型B型或C型、HBEAG狀態(tài)、年齡、性別、HBV感染家族史等因素與阿德福韋酯的病毒學(xué)應(yīng)答無(wú)關(guān)。

簡(jiǎn)介：目的探索冬春季節(jié)蘭州地區(qū)成人急性呼吸道感染患者病毒病原學(xué)。包括流感病毒AFLUA、流感病毒BFLUB、呼吸道合胞病毒RSV、腺病毒ADV、副流感病毒PIV。方法研究對(duì)象患急性呼吸道感染者。收集患者痰標(biāo)本78例，采用單克隆抗體橋聯(lián)酶標(biāo)法MCABAPAAP檢測(cè)病毒抗原，同期健康成人15例做對(duì)照研究；收集患者血清標(biāo)本467例，通過(guò)間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA檢測(cè)血清中病毒特異性IGM抗體，同期健康成人79例做對(duì)照研究。結(jié)論①病毒是急性呼吸道感染的重要病原體。其中流感病毒FLUA、FLUB是蘭州地區(qū)成人冬春季節(jié)急性呼吸道感染最重要的病毒病原體，其次為呼吸道合胞病毒RSV。腺病毒ADV和副流感病毒PIV少見(jiàn)。②存在兩種或兩種以上呼吸道病毒感染的現(xiàn)象，也存在同時(shí)或繼發(fā)細(xì)菌感染的病例。③有基礎(chǔ)疾病者感染呼吸道病毒風(fēng)險(xiǎn)增加。

簡(jiǎn)介：後里火擎博士學(xué)位論文B基因型與C基因型乙型肝炎病毒部分生物學(xué)特性的比較院系華山醫(yī)院專業(yè)內(nèi)科學(xué)感染病學(xué)姓名秦艷麗指導(dǎo)教師張繼明教授SHUPINGTONG副教授BROWFLUNIVERSITY導(dǎo)師組成員黃玉仙主任醫(yī)師尹有寬主任醫(yī)師完成口期2010年3月20日本淪文受中國(guó)教育部留學(xué)基金委“國(guó)家建設(shè)高水平大學(xué)公派研究生項(xiàng)目，，資助口●口目錄縮略詞中文摘要英文摘要第一部分目錄中國(guó)HBEAG陽(yáng)性CHB患者基因型及其與BCP／PC區(qū)變異、HBEAG滴度之間的關(guān)系11前言?????????????????????．．91．2材料與方法??????????????????????1013結(jié)果?????????????????????．．141．4討論???．??????????????????～21小結(jié)?????????????????????一23參考文獻(xiàn)??????????????????????24第二部分HBV克隆群轉(zhuǎn)染分析方法的建立2．1前言??????????????????????2722材料與方法??????????????????????3023結(jié)果???????????．??????????．3924討論??????????????????????47小結(jié)??????????????????．???．50參考文獻(xiàn)??????????????????????5L第三部分B和C基因型HBV臨床分離株部分生物學(xué)特性的比較3L前言??????????????????????5532材料與方法??????????????????????5733結(jié)果???????????．?????．?????．643．4討論??????????????????????77小結(jié)????????????????．?????．79參考文獻(xiàn)???????．??????????????．80總結(jié)和展望?????????????????????????83綜述??．???????????????．???????85發(fā)表文章????????????????????????．．104致謝????????????????????????．106

簡(jiǎn)介：目的通過(guò)纖維環(huán)16G針頭穿刺的方法建立一種羊椎間盤緩慢退行性變動(dòng)物模型觀察腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV載體能否在山羊退變椎間盤體內(nèi)安全有效的表達(dá)觀察腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的成骨蛋白1OSTEOGENICPROTEIN，OP1基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染羊退行性變椎間盤的細(xì)胞后有效持續(xù)表達(dá)對(duì)退變椎間盤的修復(fù)效果觀察腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染能否有效持續(xù)表達(dá)并促進(jìn)退變椎間盤修復(fù)觀察腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的OP1基因聯(lián)合HVEGF基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染羊退行性變椎間盤的細(xì)胞后能否有效的持續(xù)表達(dá)，并對(duì)退變椎間盤的產(chǎn)生更佳的修復(fù)效果。方法1動(dòng)物分組88只清潔級(jí)山羊SPECIFICPATHOGENFREE，SPF，抽取4只作為備用動(dòng)物為H組A組，8只動(dòng)物為AAVOP1注射組B組，8只動(dòng)物為AAVVEGF注射組C組，8只動(dòng)物為AAVOP1聯(lián)合AAVVEGF注射組D組，8動(dòng)物為磷酸緩沖鹽溶液（PHOSPHATEBUFFERSALINE，PBS）注射組（安慰劑，對(duì)照組）E組，4只動(dòng)物為AAVEGFP注射F組，8動(dòng)物為單純針刺造模組G組為剩余的8只動(dòng)物，也做手術(shù)，但不損傷椎間盤。即G組和H組的動(dòng)物椎間盤是完整的。2制作纖維環(huán)針刺動(dòng)物模型。排除G組和H組，將剩余的76只動(dòng)物來(lái)做退變動(dòng)物模型。在全麻下，采取側(cè)俯臥位，經(jīng)腹膜外入路顯露椎間盤，任意選相連的3個(gè)椎間盤，用16G針頭穿刺纖維環(huán)，穿刺點(diǎn)位于纖維環(huán)中央偏左側(cè)平行于下位椎體的上終板并控制其深度為10MM、旋轉(zhuǎn)180度。用黑色縫在相應(yīng)椎間盤的橫突作標(biāo)記。3動(dòng)物體內(nèi)椎間盤基因轉(zhuǎn)染（A、B、C、D、E組）。時(shí)間為造模后第4周（28天）。采用相同的手術(shù)入路。A組動(dòng)物造模間盤用27G針頭的顯微注射器各注射50ULAAVOP111012VGLB組動(dòng)物造模間盤注射50ULAAV2VEGF11012VGLC組造模問(wèn)盤各注射50ULAAVOP1和AAVVEGF11012VGLD組造模間盤各注射50ULPBSE組造模間盤各注射50ULAAVEGFP11012VGL。造模后6周42D、8周56D、12周84D、16周102D，OP1、VEGF、雙基因聯(lián)合、空白對(duì)照組每組分別殺死4只動(dòng)物，F(xiàn)、G組每組分別殺死2只動(dòng)物，取得造模間盤造模后16周處死E組4只羊，收獲椎間盤組織。4影像學(xué)觀察，分別于0周、4周28D、6周42D、8周56D、12周84D、16周102D拍攝腰椎正側(cè)位DR平片，應(yīng)用PACS系統(tǒng)做數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。5組織學(xué)觀察，采用HE染色、SAFRANINEO染色、MASSON染色、免疫組化等方法，定性、定量觀察椎間盤退行性變的發(fā)展變化。6生物化學(xué)檢測(cè)，采用免疫熒光、免疫印跡WESTERNBLOT法檢測(cè)等定性、定量觀察基因表達(dá)的生物學(xué)效應(yīng)。7統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。采用SPSS170進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，單因素方差分析，數(shù)據(jù)以±SD表示，P＜001認(rèn)為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜005認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1影像學(xué)分析結(jié)果OP1組動(dòng)物的造模椎間盤高度大于空白對(duì)照組，其％DHI與空白對(duì)照組有明顯差異P＜005，雙基因聯(lián)合組的造模椎間盤高度恢復(fù)的最佳，其％DHI與空白對(duì)照組有顯著差異P＜005，VEGF組和F組動(dòng)物的造模椎間盤高度均持續(xù)下降，與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)相似，其％DHI與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)分析，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。2Ⅱ型膠原免疫組化染色OP1組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅱ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在16周時(shí)差異最顯著，其Ⅱ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組有明顯差異P＜005，OP1能在動(dòng)物體內(nèi)促進(jìn)Ⅱ型膠原合成代謝。VEGF組與D、F組動(dòng)物造模椎間盤髓核Ⅱ型膠原含量在各個(gè)時(shí)期無(wú)顯著性差異，VEGF組和F組動(dòng)物的造模椎間盤Ⅱ型膠原均持續(xù)下降，與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)相似，其Ⅱ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)分析，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。雙基因聯(lián)合組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅱ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在12和16周時(shí)差異最顯著，其Ⅱ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組有顯著差異P＜001，OP1與VEGF雙基因能顯著提高動(dòng)物體內(nèi)Ⅱ型膠原的合成代謝。3Ⅰ型膠原免疫組化染色OP1組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅰ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在16周時(shí)差異最顯著，其Ⅰ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組有明顯差異P＜005，OP1能在動(dòng)物體內(nèi)促進(jìn)Ⅰ型膠原合成代謝。VEGF組與D、F組動(dòng)物造模椎間盤髓核Ⅰ型膠原含量在各個(gè)時(shí)期無(wú)顯著性差異，VEGF組和F組動(dòng)物的造模椎間盤Ⅰ型膠原均持續(xù)下降，與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)相似，其Ⅰ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)分析，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。雙基因聯(lián)合組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅰ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在16周時(shí)差異最顯著，其Ⅰ型膠原免疫組化染色的平均光密度值與空白對(duì)照組有顯著差異P＜001，OP1與VEGF雙基因能顯著提高動(dòng)物體內(nèi)Ⅰ型膠原的合成代謝。435S測(cè)定蛋白多糖合成率OP1組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的蛋白多糖含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在16周時(shí)差異最顯著，其35S蛋白多糖合成率與空白對(duì)照組有明顯差異P＜005，OP1能在動(dòng)物體內(nèi)促進(jìn)蛋白多糖的合成代謝。VEGF組與D、F組動(dòng)物髓核蛋白多糖含量在各個(gè)時(shí)期無(wú)顯著性差異，VEGF組和F組動(dòng)物的造模椎間盤蛋白多糖含量均持續(xù)下降，與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)相似，其35S蛋白多糖合成率與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)分析，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。雙基因聯(lián)合組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的蛋白多糖含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在12和16周時(shí)差異最顯著，其35S蛋白多糖合成率與空白對(duì)照組有顯著差異P＜001，OP1與VEGF雙基因能顯著提高動(dòng)物體內(nèi)蛋白多糖的合成代謝。5WESTERNBLOT法檢測(cè)Ⅱ型膠原OP1組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅱ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在16周時(shí)差異最顯著，其Ⅱ型膠原蛋白灰度值與空白對(duì)照組有明顯差異P＜005，OP1能在動(dòng)物體內(nèi)促進(jìn)Ⅱ型膠原合成代謝。VEGF組與D、F組動(dòng)物造模椎間盤髓核Ⅱ型膠原含量在各個(gè)時(shí)期無(wú)顯著性差異，VEGF組和F組動(dòng)物的造模椎間盤Ⅱ型膠原均持續(xù)下降，與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)相似，其Ⅱ型膠原蛋白灰度值與空白對(duì)照組數(shù)據(jù)分析，均無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。雙基因聯(lián)合組動(dòng)物的造模椎間盤髓核內(nèi)的Ⅱ型膠原含量在造模6周、8周、12周、16周時(shí)高均于空白對(duì)照組、F組，在12和16周時(shí)差異最顯著，其Ⅱ型膠原蛋白灰度值與空白對(duì)照組有顯著差異P＜001，OP1與VEGF雙基因能顯著提高動(dòng)物體內(nèi)Ⅱ型膠原的合成代謝。6免疫熒光E組動(dòng)物在造模椎間盤16周后仍有效表達(dá)EGFP。結(jié)論1AAVOP1和AAVHVEGF體內(nèi)轉(zhuǎn)染后可持續(xù)表達(dá)12周2AAVOP1轉(zhuǎn)染退變椎間盤可延緩其退變速度3AAVOP1和AAVHVEGF有協(xié)同效應(yīng)，雙基因聯(lián)合能更加有效地延緩椎間盤退行性變。

簡(jiǎn)介：山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文太原地區(qū)五歲以下腹瀉住院兒童輪狀病毒的分子流行病學(xué)研究姓名蘭蓓申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師李佩珍20100505PQ醫(yī)科人學(xué)碩I學(xué)何論文MOLECULAREPIDEMIOLOGYOFROTAVIRUSAMONGCHILDRENUNDER5YEARSOLDHOSPITALIZEDFORDIARRHEAINTAIYUANABSTRACTOBJECTIVESTBSTUDYTHEINFECTEDINFORMATION，CLINICALSYMPTOMARLDNNMOLECULAREPIDEMIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHRVINFECTION鋤ONGHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIA玎HEAUNDER5YEARSOLDIN1’AIYUAN，F(xiàn)BM2007TO2008；TOCOREECTTHEBACKGROUNDDATARELATEDWITHVIRALDI礎(chǔ)EA；TOPMVIDEREFERENCESFORPREVENTIONANDTREATOFTHEDISEASEMETHODSATOTALOF346STOOLS、VERECOLLECTEDFROMHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIARRHEA明DER5YEARSOLDINTAIYUANBET、，EEN2007，LLTO2008，L0，ROTAVIMSPOSITIVESPECIMENSⅥ，EREIDENTIFIEDBYELISAKITG／PTYPINGASSAYSWERECONFIRMEDWITHMULTIPLEXSEMINESTEDFMPCRTHESEPOSITIVEPRODUCTSWEREPURIFIED，EXTRACTEDPLASMID，THENSELECTEDTHESPECIEMESWHICHWERECONFINNEDBYPLASMIDPCRTESTTOBESEQUENCEDTHENUCLEICACIDIDENTIFYTHEGENOTYPEANDGENOGROUPOFAVAILABLESTRAINSRESULITSATOTALOF346STOOLSWERECOLLECTEDFBOMHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTEDIARRHEAUNDER5YEARSOLDINTAIYUANBET、VEEN2007，1LTO2008，LOOFTHE346SPECIMENS，THEPERCEMAGEOFSAMPLES謝THI沁TAVIMSWAUS408％AMONG14LROTAVIMSPOSITIVESAMPLES，SERO哆PEGL426％WASTHEPREDOMINAILTS仃AINFOLLO、ⅣEDBYG3262％，G9106％ANDMIXEDGINFECTION64％142％OFSTRAINSREMAINEDT0BENONTYPEABLEPGENO帥INGSHOWEDP8】681％WASMOSTCOMMONFOLLOWEDBYP【4】07％，ANDNONTYPEABLE241％THEMOSTCOMMONCOMBINATIONOFGANDP、VASGLP【8】319％，F(xiàn)OIIOV，EDBYG3P8】184％A11DG9P8】71％M0RETHAN957％OFVIRALDIARRHEAPATIENTSUNDERHOSPITALIZATIONOCCURREDAMONGCHILDRENYOUNGERTHAN2YEARSCONCLUSIONSROTAVIMSREMAINSTLLEMOSTSIGNIFICANTVIRALAGENTCAUSINGDIAHHEAHOSPITALIZATIONAMONGCHILDRENUNDERMEAGEOF5YEARSINTAIYUANTHEMOSTCOMMONCHILDRENWITHROTAVIMSINFECTIONSWEREYOUNGERTHAIL2YEARSOLDRVPREVALENCEPEAKEDFROMSEPTEMBERTONOVEMBER7IHEPREDOMINANTSTMINSOFROTAVIRUSWEREG1ANDP8】INTAIYUANCITYINFORMATIONONTHEDIVERSITYANDCOMPLEXITYOFRVSTRAINSCIRCULATINGINTAIYUANPROVIDESUSEFULDATAFORFO硼ULATINGVACCINEPOLICYANDEVALUATINGVACCINEE伍CACYKEYWORDSROTAVIMS；DIALLRHEA；MOLECULAREPIDEMIOLOGYII

簡(jiǎn)介：第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文基于特異性表位的1型單純皰疹病毒免疫學(xué)診斷方法建立與初步應(yīng)用研究姓名姬小薇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)指導(dǎo)教師毛旭虎20061101第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文4以純化的8GGLL2127作為包被抗原建立并優(yōu)化了檢測(cè)HSV1感染的間接ELISA抗原的最佳包被濃度為5UG／ML；抗原最佳吸附方式為37℃，4H后轉(zhuǎn)4℃過(guò)夜；待檢血清稀釋度為L(zhǎng)40；反應(yīng)條件為37℃溫育60MIN；5％脫脂奶粉作封閉液。以上述條件建立的ELISA對(duì)35份HSV1感染的陽(yáng)性血清和43份陰性血清進(jìn)行檢測(cè)，其敏感度為914％；特異度為976％；陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為969％；陰性預(yù)測(cè)值為933％；準(zhǔn)確度為948％。同樣，以此法對(duì)6份血清進(jìn)行批間、批內(nèi)三次重復(fù)性實(shí)驗(yàn)，顯示其重復(fù)性良好。用本研究建立的ELISA方法與進(jìn)口ELISA試劑盒同時(shí)對(duì)臨床收集的100份待檢血清進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果一致性為98％。結(jié)論GGLL2127是HSV1型特異性抗原表位，本研究成功表達(dá)并獲得了8GGLL2127的重組蛋白，此蛋白具有良好的抗原性和特異的免疫反應(yīng)性，以重組蛋白建立的檢測(cè)HSV1感染的間接ELISA方法，初步應(yīng)用表明有良好的特異性和一定的靈敏性。本研究為研發(fā)HSV感染鑒別診斷的血清學(xué)檢測(cè)試劑盒奠定了理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞單純皰疹病毒1型；型特異性表位；G蛋白；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)6

簡(jiǎn)介：目的評(píng)價(jià)抗體特異性指數(shù)在病毒性腦炎診斷中的意義，了解此種方法在病毒性腦炎診斷中的敏感性與特異性。期望為病毒性腦炎尋找一種具有理想的敏感性和高度特異性的病原學(xué)診斷方法，通過(guò)一種廉價(jià)、快捷、方便的方法來(lái)提高病毒性腦炎的診斷水平，為病毒性腦炎的臨床治療和發(fā)病機(jī)制研究提供幫助。并進(jìn)一步研究不同類型中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的腦脊液細(xì)胞學(xué)特點(diǎn)。方法臨床診斷的病毒性腦炎患者36例，入院三天內(nèi)留取血清和第一份腦脊液標(biāo)本，第二到第三周留取第二份腦脊液標(biāo)本。所有標(biāo)本凍存于20℃低溫冰箱，分批進(jìn)行檢測(cè)。用德國(guó)歐蒙公司提供的ELISA試劑盒，半定量檢測(cè)標(biāo)本中病毒特異性抗體IGG相對(duì)濃度。實(shí)驗(yàn)中，血清稀釋404倍，腦脊液稀釋2倍；通過(guò)四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)本酶標(biāo)檢測(cè)結(jié)果代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算病毒特異性抗體IGG濃度。免疫檢驗(yàn)室通過(guò)散射速率比濁法分別檢測(cè)腦脊液和配對(duì)血清中IGG總量。腦脊液中病毒特異性抗體占腦脊液總IGG比例與血清中病毒特異性抗體占血清總IGG比例之間的比值，即CSF血清相對(duì)比值CSQREL抗體特異性指數(shù)；此比值大于15視為陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單純皰疹病毒1型HSV1，EB病毒EBV，人類巨細(xì)胞病毒HCMV；通過(guò)病毒抗體特異性指數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果建立病毒性腦炎的病原學(xué)診斷。實(shí)驗(yàn)設(shè)立中樞神經(jīng)系統(tǒng)非病毒性感染性疾病患者結(jié)核性腦膜炎14例，化膿性腦膜炎2例，腦囊蟲病4例，脫髓鞘疾病患者多發(fā)性硬化5例，吉蘭巴雷綜合征2例為對(duì)照組。對(duì)兩組患者病毒抗體特異性指數(shù)陽(yáng)性率進(jìn)行比較，來(lái)評(píng)價(jià)病毒抗體特異性指數(shù)作為病原學(xué)診斷方法的敏感性和特異性。動(dòng)態(tài)觀察兩組患者的腦脊液細(xì)胞學(xué)，對(duì)兩組患者的腦脊液細(xì)胞學(xué)進(jìn)行分析比較，進(jìn)一步探討病毒性腦炎的腦脊液細(xì)胞學(xué)表現(xiàn)。對(duì)研究組和對(duì)照感染組結(jié)核性腦膜炎，化膿性腦膜炎，腦囊蟲病的部分臨床資料進(jìn)行比較，分析病毒感染與其它類型感染在臨床表現(xiàn)上的差異。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS120軟件，計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)Α005。結(jié)果1在研究組36例中通過(guò)病毒抗體特異性指數(shù)診斷為單純皰疹病毒性腦炎的6例17％，EB病毒性腦炎3例8％，巨細(xì)胞病毒性腦炎2例6％，總體陽(yáng)性率為31％。對(duì)照組27例中有一例臨床診斷為結(jié)核性腦膜炎，但檢測(cè)中EB病毒抗體特異性指數(shù)為陽(yáng)性。在研究組中未見(jiàn)到多種抗體重疊陽(yáng)性出現(xiàn)。兩組抗體特異性指數(shù)陽(yáng)性率比較，研究組為31％，對(duì)照組為4％，X25578，P0018。此種方法診斷病毒性腦炎的特異性為917％。2兩組的腦脊液細(xì)胞學(xué)都有很高的異常率，研究組為86％，對(duì)照組為78％，兩組間腦脊液細(xì)胞學(xué)的異常率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。病毒性腦炎患者腦脊液細(xì)胞學(xué)以淋巴細(xì)胞反應(yīng)為主，少數(shù)病例在早期見(jiàn)到嗜中性粒細(xì)胞增高現(xiàn)象。6例診斷為單純皰疹病毒性腦炎的患者腦脊液細(xì)胞學(xué)全部異常，其中2例患者腦脊液細(xì)胞學(xué)檢查見(jiàn)到紅細(xì)胞；2例EB病毒性腦炎和巨細(xì)胞病毒性腦炎患者腦脊液細(xì)胞學(xué)有異常，但未發(fā)現(xiàn)與病毒性腦炎腩脊液細(xì)胞學(xué)的一般表現(xiàn)存在差異。3研究組與對(duì)照感染組的部分臨床資料存在差異，其中精神異常、腦膜刺激征的出現(xiàn)率和腦電圖的異常率差異明顯。結(jié)論病毒抗體特異性指數(shù)，反映抗體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)局部合成的情況，此指標(biāo)大于15提示特異性抗體在病毒感染中樞神經(jīng)系統(tǒng)后由鞘內(nèi)合成；此方法在病毒性腦炎的診斷中有著比較理想的敏感性和很高的特異性，其意義值得重視。繼續(xù)擴(kuò)大研究的樣本量，并增加檢測(cè)的病毒抗體的種類，有可能提高此種方法檢測(cè)結(jié)果的總體陽(yáng)性率，近而得到一個(gè)更令人滿意的敏感性。作為一種廉價(jià)、快捷、方便的病原學(xué)診斷方法，有可能為病毒性腦炎的臨床治療和研究帶來(lái)巨大的幫助。流行病學(xué)資料和臨床表現(xiàn)是病毒性腦炎的診斷基礎(chǔ)，腦電圖檢查和腦脊液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)是重要的輔助檢查措施，在病毒性腦炎的診斷中絕對(duì)不能疏漏。

簡(jiǎn)介：Ⅰ型單純皰疹病毒HSVⅠ主要誘發(fā)口咽部皰疹、角膜結(jié)膜炎和散發(fā)性腦炎，同時(shí)，臨床中亦發(fā)現(xiàn)HSVⅠ病毒還能導(dǎo)致新生兒、孕婦出現(xiàn)非嗜肝病毒性肝炎，加之HSVⅠ病毒在人群中的潛伏感染率很高，因此，HSVⅠ病毒在皰疹病毒研究領(lǐng)域一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。HSVⅠ病毒感染能導(dǎo)致一系列的細(xì)胞效應(yīng)，尤其是宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)合成途徑在病毒侵入后出現(xiàn)明顯變化MRNA被降解、轉(zhuǎn)錄被關(guān)閉、蛋白質(zhì)被選擇性地降解或保持穩(wěn)定，甚至重新定義細(xì)胞蛋白功能。由此，病毒感染和未感染細(xì)胞之間出現(xiàn)了蛋白表達(dá)譜的差異，而這些差異蛋白正是病毒感染細(xì)胞、細(xì)胞抵御病毒的具體執(zhí)行者。因此，尋找這些蛋白并探索它們之間的相互作用將對(duì)認(rèn)識(shí)HSVⅠ病毒感染機(jī)制提供大量的研究線索。本課題借助比較蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)平臺(tái)，將HSVⅠ病毒感染的人正常肝細(xì)胞L02與未感染細(xì)胞分別進(jìn)行雙向電泳2DE作蛋白質(zhì)組圖，通過(guò)PDQUEST軟件對(duì)蛋白點(diǎn)定性、定量分析，再利用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜MALDITOFMS鑒定表達(dá)差異較為顯著的蛋白點(diǎn)。在所發(fā)現(xiàn)的差異蛋白中，RPLP1ACIDICRIBOSOMALPHOSPHOPROTEINP1形成MRNA翻譯所需的蛋白復(fù)合體、核不均一性核糖核蛋白H2HETEROGENEOUSNUCLEARRIBONUCLEOPROTEINH2，HNRNPH2正性調(diào)控MRNA剪切和加工、KH型剪切調(diào)控蛋自KHTYPESPLICINGREGULATYPROTEIN，KHSRP參與MRNA快速降解，它們都從不同角度調(diào)節(jié)細(xì)胞正常的蛋白質(zhì)合成通路，但在HSVⅠ病毒感染情況下，細(xì)胞RPLP1和KHSRP蛋白呈現(xiàn)上調(diào)，而HNRNPH2則表現(xiàn)為下調(diào)，這一結(jié)果提示病毒在利用細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控因子關(guān)閉細(xì)胞蛋白質(zhì)合成的同時(shí)又利用細(xì)胞蛋白合成途徑實(shí)現(xiàn)病毒蛋白的合成。盡管上述細(xì)胞蛋白的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究，但本課題為探討病毒如何改變宿主蛋白合成途徑提供了很多新的線索。此外，2DE發(fā)現(xiàn)新蛋白UNNAMEDPROTEIN表達(dá)量因HSVⅠ病毒感染而明顯增加，NTHERNBLOT實(shí)驗(yàn)則提示UNNAMEDPROTEINMRNA在細(xì)胞周期G0、G1期和S期均有表達(dá)，且各階段中MRNA表達(dá)量無(wú)明顯差異。UNNAMEDPROTEIN在病毒感染狀態(tài)下被激活可能與其參與病毒細(xì)胞相互作用有關(guān)?？梢?jiàn)，比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)是尋找差異蛋白和發(fā)現(xiàn)新蛋白的有力工具，將其運(yùn)用于病毒學(xué)研究將有助于認(rèn)識(shí)病毒一宿主細(xì)胞間的相互作用。

簡(jiǎn)介：研究背景和目的SARS爆發(fā)后，蝙蝠作為多種人獸共患病病毒的自然宿主越來(lái)越引起人們的重視。1蝙蝠種類多，分布廣蝙蝠隸屬翼手目CHIROPTERA，是哺乳類中分布最廣、數(shù)量最多的動(dòng)物之一，全世界大約有17科180屬，約960種，其中我國(guó)有7科29屬107種。翼手目分兩個(gè)亞目大蝙蝠亞目MEGACHIROPTERA，又稱狐蝠，我國(guó)有1科5屬7種；小蝙蝠亞目MICROCHIROPTERA，即通常所說(shuō)的蝙蝠，我國(guó)有6科24屬100種。除南北極外，蝙蝠在世界各地都有分布，包括在高緯度地區(qū)、荒涼的沙漠和孤立的島嶼上，甚至在撒哈拉大沙漠也有蝙蝠的活動(dòng)。然而，大多數(shù)蝙蝠種類生活在熱帶和亞熱帶地區(qū)。蝙蝠物種豐富，分布廣泛，壽命長(zhǎng)，并有很強(qiáng)的飛行能力，其中一些蝙蝠種類還有長(zhǎng)途遷移的習(xí)性。蝙蝠與人類接觸密切。有些蝙蝠就棲息在屋檐下，或是房屋的裂縫中；另外蝙蝠在覓食時(shí)經(jīng)常會(huì)誤闖入居民家中；一些旅游景點(diǎn)的巖洞中也居住有蝙蝠。在中醫(yī)里面，菊頭蝠的糞便被做成“夜明沙”用于治療眼疾在廣東，果蝠被一些餐館作為野味擺上餐桌；湖南一些地區(qū)則相信蝙蝠可以用來(lái)治療癲癇。2蝙蝠與冠狀病毒2002～2003年爆發(fā)的SARS，在確定SARS冠狀病毒SARSCOV的動(dòng)物源性后，香港大學(xué)微生物系和中科院的研究人員分別發(fā)表文章宣布從菊頭蝠科的蝙蝠中檢測(cè)出蝙蝠SARS樣冠狀病毒BATSARSCOV，與人SARS冠狀病毒的核苷酸同源性88％，并且從菊頭蝠科的成員中檢出很高的抗體陽(yáng)性率。因此，研究人員將冠狀病毒的自然宿主鎖定在蝙蝠上，并對(duì)野生蝙蝠展開(kāi)了一系列的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蝙蝠所攜帶的冠狀病毒基因多樣性極其豐富，迄今為止已經(jīng)從蝙蝠中發(fā)現(xiàn)了十幾種新的冠狀病毒。但是通過(guò)對(duì)冠狀病毒與宿主受體結(jié)合的S蛋白基因編碼區(qū)的同源性分析表明，BATSARSCOV與SARSCOVS基因的同源性僅為64％，因此，SARSCOV的直接祖先還未被發(fā)現(xiàn)，其從感染動(dòng)物宿主到感染人宿主的進(jìn)化歷程還沒(méi)有完全搞清楚，對(duì)已發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒進(jìn)行的系統(tǒng)進(jìn)化分析也表明還有更多新的冠狀病毒沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已知的可能只是自然界中的冠狀病毒一個(gè)很小的子集。鑒于蝙蝠攜帶冠狀病毒基因型多態(tài)性豐富，以及蝙蝠的生態(tài)學(xué)特性，期望從中發(fā)現(xiàn)其他與SARSCOV更為同源的冠狀病毒，描繪出病毒在自然宿主中的詳細(xì)進(jìn)化歷程，有助于預(yù)防和控制SARS的再次爆發(fā)流行。因此，我們從海南、廣東和湖南省部分地區(qū)收集蝙蝠標(biāo)本，利用免疫學(xué)和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)對(duì)蝙蝠攜帶冠狀病毒進(jìn)行一次初步的分子流行病學(xué)調(diào)查。研究方法1蝙蝠標(biāo)本的收集和處理2007年5月至8月之間，在海南、廣東和湖南省部分地區(qū)共收集蝙蝠468只。進(jìn)行編號(hào)后，請(qǐng)廣州大學(xué)生命科學(xué)院蝙蝠研究專家吳毅教授進(jìn)行鑒定。采集蝙蝠的地方主要有廢棄的房屋，或者房屋的縫隙、屋檐，以及野外陰濕的山洞。①血清的采集。主要用兩種方法，后肢靜脈采血和心臟采血。采集的血樣4℃靜置5H后，3000RMIN離心10MIN，取上清，裝在EP管中，編號(hào)，4℃運(yùn)送回實(shí)驗(yàn)室，立即檢測(cè)。②直腸樣本的處理。通過(guò)無(wú)菌操作解剖蝙蝠，取肛門上端直腸組織標(biāo)本約2～3CM，保存在含有RNALATER的凍存管中，4℃運(yùn)輸，回實(shí)驗(yàn)室后，立即檢測(cè)或放入70℃保存。2蝙蝠血清冠狀病毒抗體的SPAELISA檢測(cè)①利用葡萄球菌A蛋白STAPHYLOCOCCUSPROTEINA，SPA能夠天然地與人及某些哺乳動(dòng)物的IGG分子上的FC片段結(jié)合的特性，建立了一種新的SPAELISA方法，用于檢測(cè)蝙蝠血清冠狀病毒抗體②利用建立的SPAELISA對(duì)海南、廣東和湖南部分地區(qū)收集的蝙蝠血清進(jìn)行檢測(cè)。3蝙蝠腸道冠狀病毒的RTPCR檢測(cè)①參考文獻(xiàn)，以及對(duì)已知的冠狀病毒序列進(jìn)行比對(duì)，找到冠狀病毒的保守序列設(shè)計(jì)引物。引物擴(kuò)增的目的基因位于RNA依賴的RNA多聚酶編碼區(qū)，能夠擴(kuò)增已知的大部分冠狀病毒，包括蝙蝠冠狀病毒；②利用RTPCR檢測(cè)蝙蝠直腸樣本中的冠狀病毒。4測(cè)序和基因分析①對(duì)于擴(kuò)增獲得的目的基因進(jìn)行測(cè)序；②測(cè)序結(jié)果利用GENEBANK的BLAST軟件進(jìn)行在線同源性分析；③在GENEBANK下載其他冠狀病毒序列，利用CLUSTALW進(jìn)行多序列比對(duì)分析；④用MEGA40軟件，采用NEIGHBJOINING法，JUKESCANT模型做進(jìn)化樹(shù)分析。5質(zhì)量控制①槍頭、EP管、凍存管、手套等實(shí)驗(yàn)耗材均為一次性用品；②逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程采用的槍頭、EP管和研磨器用DEPC處理，高溫高壓消毒，烤干后待用，以去除RNA酶污染③RNA的提取，RTPCR的反應(yīng)體系的試劑加樣均在無(wú)菌間生物安全I(xiàn)I級(jí)超凈臺(tái)進(jìn)行操作，防止環(huán)境中RNA酶的污染；④操作過(guò)程中，全程戴口罩、帽子，勤換手套，防止樣本和試劑受到來(lái)自操作者攜帶的RNA酶污染；⑤在RNA提取，RTPCR，SPAELISA過(guò)程中均設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。三、研究結(jié)果1蝙蝠的基本情況本次研究在海南、廣東和湖南3個(gè)省共收集蝙蝠468只，包括4個(gè)科，12個(gè)種。共收集血清樣本274份，直腸樣本468份。2蝙蝠血清冠狀病毒抗體的檢測(cè)情況①建立的SPAELISA檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)便，檢出濃度低，即使在野外的條件下也可以通過(guò)顏色的變化來(lái)簡(jiǎn)單判定結(jié)果；而且需要的血清量小，完全可以在不傷害動(dòng)物的情況下完成檢測(cè)；②利用SPAELISA從采集的274份血清樣本中檢測(cè)出36份陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1314％36274。冠狀病毒抗體檢出自4種蝙蝠，分別為普通長(zhǎng)翼蝠2045％27132，中華菊頭蝠1111％218，中菊頭蝠926％554，棕果蝠364％255。3蝙蝠腸道冠狀病毒的檢測(cè)情況利用RTPCR，從13份蝙蝠直腸樣本中擴(kuò)增獲得目的基因片段，總陽(yáng)性率為278％13468。13份樣本全部來(lái)自湖南省，包括2個(gè)科的4種蝙蝠。其中4份樣本檢出自普通長(zhǎng)翼蝠，陽(yáng)性率263％4152；6份樣本檢出自中菊頭蝠，陽(yáng)性率385％61562份樣本檢出自中華菊頭蝠，陽(yáng)性率690％2291份樣本來(lái)自小菊頭蝠，陽(yáng)性率1667％16。4測(cè)序和基因分析結(jié)果①BLAST同源性比對(duì)結(jié)果，從普通長(zhǎng)翼蝠檢出2種冠狀病毒BATCOVHKU7與BATCOV1A從中菊頭蝠和中華菊頭蝠中都檢測(cè)出2種冠狀病毒，BATCOVHKU2與BATSARSCOV從小菊頭蝠中檢出BATSARSCOV②用軟件CLUSTALW進(jìn)行多序列比對(duì)分析和MAGA40構(gòu)建進(jìn)化樹(shù)表明冠狀病毒的基因多態(tài)性豐富，3種屬于冠狀病毒GROUP1，1種屬于GROUP2。結(jié)論①建立了的蝙蝠血清冠狀病毒抗體SPAELISA檢測(cè)方法②湖南地區(qū)的蝙蝠可攜帶冠狀病毒，血清冠狀病毒抗體陽(yáng)性率為1314％36274，直腸冠狀病毒陽(yáng)性率278％13468③與之前在中國(guó)其他地方蝙蝠中分離出的冠狀病毒基因型相似，但來(lái)自不同的蝙蝠種類；第一次從中菊頭蝠中檢測(cè)到BATCOVHKU2，第一次從普通長(zhǎng)翼蝠中檢測(cè)到BATCOVHKU7，第一次從小菊頭蝠和中菊頭蝠檢測(cè)到BATSARSCOV④通過(guò)基因分析發(fā)現(xiàn)，不同的蝙蝠種類攜帶不同基因型的冠狀病毒，來(lái)自不同地方的同種蝙蝠攜帶的冠狀病毒基因型相似；⑤檢測(cè)出的病毒基因多態(tài)性豐富，但SARSCOV的直接祖先仍未被發(fā)現(xiàn)。

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簡(jiǎn)介：目的監(jiān)測(cè)并分析上海地區(qū)住院和門診腹瀉兒童四種腹瀉病毒的分子流行病學(xué)特點(diǎn)，以全面了解及客觀評(píng)估腹瀉病毒在兒童腹瀉發(fā)病中的作用，為腹瀉的防治和相關(guān)疫苗的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供基本數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。方法收集2006年1月至2011年12月在復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院住院的腹瀉兒童（年齡≤5歲）糞便標(biāo)本674份，并收集2010年7月至2011年12月在復(fù)旦大學(xué)附屬兒科醫(yī)院門診就診的腹瀉兒童（年齡≤5歲）糞便標(biāo)本436份。采用RTPCR方法檢測(cè)糞便標(biāo)本中的輪狀病毒（ROTAVIRUS，RV）、杯狀病毒HUMANCALICIVIRUS，HUCV、星狀病毒HUMANASTROVIRUS，HASTV及腺病毒ADENOVIRUS，ADV。采用引物分型的方法確定RV的基因型別，采用基因測(cè)序和進(jìn)化樹(shù)分析的方法確定諾如病毒NOVIRUS，NV、札幌病毒（SAPOVIRUS，SAV）、HASTV和ADV的基因型別。采用SPSS160統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)研究結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果一、20062011年住院腹瀉兒童腹瀉病毒的分子流行病學(xué)研究結(jié)果如下1腹瀉病毒的總檢出情況四種腹瀉病毒的總檢出率為921％621674，RV、HUCV、HASTV及ADV的總檢出率分別為892％601674、306％206674、301％203674及47％32674。腹瀉兒童單一病毒感染的總檢出率為435％293674，并以RV的單獨(dú)感染為主，其他三種病毒單獨(dú)感染的總檢出率均＜2％。腹瀉兒童多重病毒感染的總檢出率為486％328674，20062011年病毒混合感染的檢出率呈下降趨勢(shì)，2011年降為117％。多重混合感染中，以RVHASTV、RVHUCV及RVHUCVHASTV混合感染的檢出為主。2院內(nèi)和非院內(nèi)感染腹瀉兒童腹瀉病毒的檢出院內(nèi)感染引起腹瀉者占508％302626，以2009年606％和2008年605％最多，2011年降至245％。非院內(nèi)感染腹瀉者單一病毒的總檢出率478％，147308顯著高于院內(nèi)感染腹瀉者381％，121318（P＜005），單一病毒的感染均以RV為主。院內(nèi)感染腹瀉者感染多重腹瀉病毒的總檢出率569％，181318顯著高于非院內(nèi)感染者429％，132308P＜005，且均以RVHASTV及RVHUCV的混合感染為主。3RV基因型①G基因型雖20062011年G基因型以G3型為主，但G3型的流行呈波動(dòng)性下降趨勢(shì)，由2006年的646％降為2011年的128％，而G9和G1型的流行呈上升趨勢(shì)，且G9型511％成為2011年最主要的流行型別，G1型191％為當(dāng)年的次要流行型別。20062011年G混合基因型所占比例為103％62601，混合的G基因型種類較多，以G1、G3及G9型的兩兩混合為主。②P基因型20062011年P(guān)基因型以P4、P8及P混合型的流行為主，而每年P(guān)基因型的流行又處于波動(dòng)性變化中。P混合型以P4P8型為主，其次為P8P10型。③組合型別P8G3型275％是上海地區(qū)20062011年間最主要的RV流行株，其次為PMG3及P4G3型。2011年P(guān)GG9型躍升為當(dāng)年最主要的流行型別405％。院內(nèi)感染和非院內(nèi)感染腹瀉兒童中檢出的RV基因型相似。4HUCV基因型檢出的206例HUCV陽(yáng)性標(biāo)本均屬NV屬且均為GⅡ型。以GⅡ4型757％，156206為主，其次為GⅡ12型223％，46206。GⅡ4型中以2006B亞型733％，151206的流行為主，同時(shí)還分別檢出2例GⅡ7型及GⅡB型。院內(nèi)感染和非院內(nèi)感染腹瀉兒童中檢出的HUCV基因型無(wú)明顯差異。5HASTV基因型住院腹瀉兒童感染HASTV的基因型別單一，均為HASTV1型。6ADV基因型ADV陽(yáng)性標(biāo)本的基因型別以AD41型為主，占500％1632，其次為AD3型250％，832。每年各種基因型的流行又有不同。院內(nèi)感染和非院內(nèi)感染腹瀉兒童檢出的ADV基因型無(wú)異。二、20102011年門診腹瀉兒童的分子流行病學(xué)研究結(jié)果如下1總檢出情況四種病毒的總檢出率為667％291436。RV檢出率最高，為433％189436，其次為HUCV294％，128436，ADV71％，31436及HASTV18％，8436。門診腹瀉兒童以單一病毒的感染為主518％，226436，而RV感染的比例最高300％，131436，其次為HUCV160％，72436。腹瀉病毒混合感染的比例為149％65436，混合感染中均為兩種病毒的混合感染，以RVHUCV的雙重感染為主。2RV的流行特點(diǎn)①流行季節(jié)和年齡分布20102011年門診RV性腹瀉以911月份為高峰，10月檢出率最高700％，0～11月齡者497％所占比例最高，963％的患兒年齡在0～3歲之間。②基因型G基因型以G1、G3和G9型的流行為主，檢出率分別為312％、286％和270％。P基因型以P8型為主910％，172189，其次為P4型53％，10189。G混合基因型以G1G9型600％，1220為主。P混合基因型檢出較少26％，主要是P8P4型。P8G3、P8G1和P8G9型是主要流行的三種組合型別，所占比例分別為275％52189、269％51189和254％48189。3HUCV的流行特點(diǎn)①流行季節(jié)和年齡分布910月為門診腹瀉兒童HUCV性腹瀉的流行高峰，9月份667％的檢出率最高，6月的檢出率也高達(dá)600％，0～11月齡者最多567％，72128，976％的腹瀉患兒在0～3歲之間。②HUCV基因型檢出的128例HUCV陽(yáng)性標(biāo)本中，126例屬NV屬，2例為SAV屬。所有NV株均為GⅡ型，并以GⅡ4型718％，92126為主，其次為GⅡB型156％，20126，尚檢出少量GⅡ12、GⅡ7及GⅡ2型。GⅡ4型中以2006B亞型656％為主，同時(shí)檢出8例2006A亞型。檢出的2例SAV分別是GⅠ2型及GⅡ1型。4HASTV基因型門診腹瀉兒童HASTV陽(yáng)性者型別均為HASTV1型。5ADV基因型以AD41型為主452％，1431，其次為AD3型226％，731及AD40型161％，531。此外還檢出2例AD12型及各1例AD2、5及19型。結(jié)論上海地區(qū)無(wú)論是住院還是門診引起兒童腹瀉的主要病毒均為輪狀病毒和諾如病毒。相比以往上海地區(qū)的監(jiān)測(cè)資料，輪狀病毒和諾如病毒的流行型別又出現(xiàn)了新的變化。院內(nèi)感染與非院內(nèi)感染腹瀉患兒的臨床癥狀、多重感染比例均存在差異，但各病毒流行的主要基因型別相似。門診腹瀉兒童腺病毒的檢出率高于住院腹瀉兒童。住院與門診腹瀉兒童杯狀病毒、腺病毒的流行型別存在一定的差異。

簡(jiǎn)介：河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文巨細(xì)胞病毒激活感染的流行病學(xué)調(diào)查及與動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死患者病例的對(duì)比研究姓名張鵬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師何俊瑛高玉林20070301中文摘要對(duì)河北省部分縣、市人群巨細(xì)胞病毒激活感染狀況進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查人群中除外腦梗死、明顯免疫抑制者，作為對(duì)照組，共1167例檢測(cè)HCMVPP65，平均年齡5544_985歲，年齡與腦梗死組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中男性454例，女性713例。按照1995年全國(guó)第四屆腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取2002年1月至2006年11月我院門診和住院患者臨床和影像學(xué)診斷為動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死除外腔隙性腦梗死的病例為腦梗死組，共350例，其平均年齡59_1466歲，其中男性240例，女性110例。同時(shí)其中40例進(jìn)行了骨髓穿刺檢測(cè)HCMVPP65。應(yīng)用SAS612統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料采用F檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用T檢驗(yàn)，A等于005為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果1對(duì)照組河北省部分地區(qū)人群抽血檢測(cè)巨細(xì)胞病毒晚期抗原PP65，共1167例，計(jì)算PP65陽(yáng)性率1988％。PP65陽(yáng)性率在男、女性別之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表1。PP65陽(yáng)性率在生活環(huán)境、職業(yè)或受教育程度上有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，城鎮(zhèn)、文化工作者或受教育程度高者PP65陽(yáng)性率較低，見(jiàn)表2。PP65陽(yáng)性率在地區(qū)間有顯著差異，滄州地區(qū)最高3673％，保定地區(qū)次之2714％，石家莊地區(qū)最低1239％，見(jiàn)表3和圖3。PP65陽(yáng)性率在各年齡段間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是隨年齡升高，有上升趨勢(shì)，見(jiàn)表4和圖4。2腦梗死組動(dòng)脈粥樣硬化性腦梗死患者共350例，抽血檢測(cè)巨細(xì)胞病毒晚期抗原PP65，其陽(yáng)性率3571％。腦梗死組中PP65陽(yáng)性率在男、女性別之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，見(jiàn)表5。同時(shí)其中40例進(jìn)行了骨髓穿刺檢測(cè)HCMVPP65，計(jì)算PP65陽(yáng)性率5714％，與相應(yīng)的靜脈血PP65陽(yáng)性率4048％比