簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多HBsAg定量對(duì)peg干擾素聯(lián)合LAM治療后持續(xù)性病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測(cè)價(jià)值.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：壘塾叢塞亙韭痘查惑簽企昱盟G￡￡基因璽苤貍生塹堂遷盆⑧論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1萱主強(qiáng)圭堡醫(yī)垣逝江盆厶民醫(yī)院評(píng)閱人2董妊圭堡醫(yī)噓逝亞太堂醫(yī)堂院隘屬簋三醫(yī)院評(píng)閱人3割盛副圭堡醫(yī)垣浙江太堂醫(yī)堂院隘屬巳膣醫(yī)院評(píng)閱人4．評(píng)閱人5答辯委員會(huì)主席簋拍堊圭絲醫(yī)垣浙江太堂醫(yī)堂院隘屬望膣醫(yī)院委員1胡溘塞圭絲醫(yī)短浙江太堂醫(yī)堂院隘屬望腔醫(yī)院委員2睦建壬主絲醫(yī)垣抗劃立笈二醫(yī)院望膣疊委員3一委員4委員5哪PILRRULFFIRLFRILLIIIFLJLILFLIY1852446學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得塹江太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者鮐莽五叩簽字吼M年朋力日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解浙江太堂．有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝江太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名簽字日期≯，『年象L葉導(dǎo)師簽名三P為月謝簽字日期HIF年≥月／日

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多147例慢性乙型肝炎患者NAs治療中出現(xiàn)病毒學(xué)突破的臨床分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的分析慢性丙型肝炎病毒HEPATITISCVIRUS，HCV感染者基線的肝組織學(xué)活動(dòng)指數(shù)HISTOLOGICALACTIVITYINDEX，HAI、TREG、TH17細(xì)胞及IL28BRS12979860基因型的特點(diǎn)探討三者與抗HCV快速病毒學(xué)應(yīng)答RAPIDVIROLOGICALRESPONSE，RVR可能的相關(guān)性。方法收集2012年8月至2013年6月天津市第三中心醫(yī)院門診診斷的慢性丙型肝炎患者63例，記錄臨床一般情況（年齡、性別、身高、體重、可能的感染途徑、既往病史、既往治療情況）、治療前臨床及影像學(xué)資料（血常規(guī)、肝腎功能、血糖、血脂、甲狀腺功能、抗核抗體、HCVRNA載量、HCV基因分型、IL28BRS12979860基因型、肝膽胰脾及雙腎B超）。留取63例HCV感染者及同期健康體檢者新鮮外周血標(biāo)本。按患者意愿行肝穿活檢組織檢查者33例，留取標(biāo)本。所有標(biāo)本取材均通過(guò)我院倫理委員會(huì)審核，家屬知情同意并簽字。所有患者接受標(biāo)準(zhǔn)療法STARDOFCARE，SOC抗HCV治療，定期隨訪。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)63例慢性丙型肝炎CHRONICHEPATITISC，CHC患者外周血CD3T、CD4T、CD8T、CD4CD25FOXP3TREG細(xì)胞頻率，并與23例健康對(duì)照HEALTHYCONTROL，HC進(jìn)行比較。通過(guò)肝穿刺組織HE染色HAEMATOXYLINEOSINSTAIN評(píng)價(jià)HAI、肝臟炎癥壞死分級(jí)GRADE，G及纖維化分期STAGE，S。免疫組織化學(xué)染色法IMMUNOHISTOCHEMISTRY，IHC標(biāo)記肝穿組織中FOXP3TREG細(xì)胞、IL17TH細(xì)胞TH17細(xì)胞。結(jié)果1CHC組外周血CD4T、CD4CD8、CD4CD25FOXP3TREG細(xì)胞頻率分別為2816±8295％、087±0392％、683±2209％，均高于HC組的2357±5492％、060±0120％、486±0740％P＜005，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義CHC組外周血CD3T、CD8T細(xì)胞頻率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2基線HCVRNA載量與浸潤(rùn)肝組織的TREG細(xì)胞低度正相關(guān)R0353，P0047與HAI、外周血T細(xì)胞亞群、浸潤(rùn)肝組織的TH17細(xì)胞、血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALANINETRANSAMINASE，ALT水平均無(wú)相關(guān)性。3HCV感染者基線ALT水平與浸潤(rùn)肝組織的TREG細(xì)胞呈低度負(fù)相關(guān)關(guān)系R0383，P0030與外周血T細(xì)胞亞群、浸潤(rùn)肝臟的TH17細(xì)胞及HAI均無(wú)相關(guān)性。4HAI與浸潤(rùn)肝組織的TREG細(xì)胞低度負(fù)相關(guān)R0443，P0010，與肝組織的TH17細(xì)胞低度正相關(guān)R0404，P0020，與外周血T細(xì)胞亞群無(wú)相關(guān)性。5隨著炎癥壞死分級(jí)的增加，肝組織TREG細(xì)胞數(shù)逐漸減少，肝組織TH17細(xì)胞數(shù)及HAI逐漸增加P＜005）而基線HCVRNA載量、ALT水平及外周血T細(xì)胞亞群，在各分級(jí)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞005）。6隨著纖維化分期的增加，HAI逐漸升高P＞005）。肝組織TH17細(xì)胞在S1期1918±10597HPF低于S2與S3期，而在S2與S3期無(wú)明顯差異2800±14830HPFVS2678±15903HPF?；€HCVRNA載量、血清ALT水平、外周血T細(xì)胞亞群、肝組織TREG細(xì)胞在不同肝組織纖維化分期中，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞005。7基線HCVRNA、ALT、HAI、T細(xì)胞頻率，在脂肪變組與無(wú)脂肪變組差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）。8IL28BRS12979860CC型與CT型相比，血清ALT水平、體重指數(shù)BODYMASSINDEX，BMI、胰島素抵抗指數(shù)HOMEOSTATICMODELASSESSMENTOFINSULINRESISTANCE，HOMAIR、外周血CD3T、CD4T、CD8T細(xì)胞頻率、CD4CD8比值、CD4CD25FOXP3TREG細(xì)胞頻率，HAI、炎癥壞死分級(jí)、纖維化分期、HCVRNA病毒載量、肝組織TREG細(xì)胞及TH17細(xì)胞，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞005。9基線HCVRNA載量、HOMAIR、HAI是慢性HCV感染者SOC治療達(dá)到RVR的獨(dú)立影響因素血清ALT水平、外周血T細(xì)胞亞群的頻率、肝組織TREG、TH17細(xì)胞及TREGTH17比值在RVR組與NRVR組間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論浸潤(rùn)肝組織的TREG及TH17細(xì)胞與慢性HCV感染者肝組織的炎癥有關(guān)，TH17細(xì)胞與較重的肝組織纖維化有關(guān)?；€HCVRNA載量、HOMAIR、HAI是快速病毒學(xué)應(yīng)答的獨(dú)立影響因素。IL28BRS12979860基因型與血清ALT水平、HCVRNA載量、肝組織炎癥壞死、纖維化程度及RVR均無(wú)明顯相關(guān)性。

簡(jiǎn)介：目的探討恩替卡韋治療慢性乙型肝炎（CHB）患者發(fā)生病毒學(xué)突破的相關(guān)危險(xiǎn)因素。方法收集263例CHB感染者使用恩替卡韋（ETV）治療患者的病歷資料，做回顧性調(diào)查并分析患者的生化、病毒學(xué)、用藥史、依從性等指標(biāo)是否影響病毒學(xué)突破的發(fā)生，并分析相關(guān)指標(biāo)與ETV病毒學(xué)突破的關(guān)聯(lián)。結(jié)果263例患者，經(jīng)過(guò)24個(gè)月的隨訪觀察，24例發(fā)生病毒學(xué)突破，突破發(fā)生率為913％。其中HBEAG陽(yáng)性和陰性病毒學(xué)突破率分別為1118、538，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0118）；既往有LAM使用史和無(wú)LAM使用史病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1495，513，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0007）；ETV10MG、05MG病毒學(xué)突破率分別為741，932，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P1000）；有肝硬化和無(wú)肝硬化患者病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1563，704，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0038）；依從性差和依從性好的患者病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為2941，611，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0000）；ETV初治時(shí)ALT低中高三個(gè)水平組病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為1024，648，1429，三個(gè)水平組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005）；ETV初治時(shí)HBVDNA低中高水平組病毒學(xué)突破發(fā)生率分別為506、556、1842，低中水平組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞005），低、高水平組和中、高水平組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。治療6個(gè)月時(shí)HBVDNA轉(zhuǎn)陰率越高，病毒學(xué)突破發(fā)生率越低。既往有拉米夫定（LAM）使用史的患者治療12個(gè)月時(shí)病毒學(xué)突破發(fā)生率為280，治療24個(gè)月時(shí)累積發(fā)生率為1495，發(fā)生病毒學(xué)突破的平均時(shí)間為（1988±476）個(gè)月；而初治時(shí)使用ETV在治療12個(gè)月時(shí)病毒學(xué)突破發(fā)生率為064，治療至24個(gè)月時(shí)發(fā)生率為513。結(jié)論既往有LAM使用史、ETV初治時(shí)HBVDNA＞107COPIESML、有肝硬化、依從性差是恩替卡韋發(fā)生病毒學(xué)突破的危險(xiǎn)因素；治療6個(gè)月時(shí)HBVDNA轉(zhuǎn)陰率越高，病毒學(xué)突破發(fā)生率越低；既往有LAM使用史的患者較ETV初治的患者病毒學(xué)突破發(fā)生率高。

簡(jiǎn)介：研究目的通過(guò)回顧性調(diào)查分析，評(píng)估本檢測(cè)中心澳門公共衛(wèi)生化驗(yàn)所10年來(lái)的病毒性肝炎包括甲、乙、丙、丁、戊型肝炎、TCH和HIV等傳染病的血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果，探討病毒性傳染病在本地區(qū)流行感染情況，為加強(qiáng)對(duì)澳門地區(qū)傳染病的防治和優(yōu)生優(yōu)育對(duì)策提供科學(xué)理論依據(jù)。研究方法根據(jù)本中心的記錄，將這些檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行分類統(tǒng)計(jì)，按年份、年齡、性別、檢驗(yàn)結(jié)果等參數(shù)進(jìn)行分析部分指標(biāo)的檢出率針對(duì)職業(yè)進(jìn)行比較。血清學(xué)的檢測(cè)方法包括肝炎病毒標(biāo)記物、TCH及HIV抗體采用ELISA方法，梅毒抗體采用RPR、TPHA及FTAABS方法，沙眼衣原體DNA和淋病雙球菌DNA之檢測(cè)采用PCR方法其他傳染病的抗體檢測(cè)則采用

簡(jiǎn)介：研究背景我國(guó)是世界上乙肝病毒感染的高度流行區(qū)之一，人群中慢性HBSAG攜帶率約為10％，導(dǎo)致了嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)的慢性HBSAG攜帶者有30％～50％是由于圍產(chǎn)期的母嬰傳播造成的。隨著乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白在新生兒中普及應(yīng)用，已使約90％以上的圍產(chǎn)期母嬰傳播得以阻斷，但仍有5％～10％的嬰兒免疫阻斷失敗，宮內(nèi)感染是其主要原因之一。因此弄清宮內(nèi)HBV感染機(jī)制及危險(xiǎn)因素，明確嬰兒出生后乙肝病毒標(biāo)志物的動(dòng)態(tài)變化，對(duì)我國(guó)HBV感染的進(jìn)一步控制有著重要的意義。研究目的1通過(guò)病例對(duì)照研究進(jìn)一步探討新生兒出生時(shí)HBSAG陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素。2通過(guò)隨訪研究了解新生兒外周血清HBSAG、HBEAG的動(dòng)態(tài)變化，探討其臨床和流行病學(xué)意義。研究方法1從2002年12月至2005年10月在陜西省婦幼保健院連續(xù)收集HBSAG陽(yáng)性的326例孕婦及其335例新生兒為研究對(duì)象，以外周血HBSAG陽(yáng)性的新生兒為病例組，余為對(duì)照組，收集孕婦孕前、孕期及產(chǎn)時(shí)的醫(yī)學(xué)事件；采集孕婦及新生兒外周血，檢測(cè)他們外周血清中的HBVM，采用單因素分析、多因素LOGISTIC回歸分析等統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行新生兒出生時(shí)HBSAG陽(yáng)性危險(xiǎn)因素的病例對(duì)照研究。2同時(shí)，以上述研究對(duì)象的前251例HBSAG陽(yáng)性母親的260例嬰兒為隨訪對(duì)象，觀察嬰兒1年中血清HBSAG、HBEAG的動(dòng)態(tài)變化。3血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)方法母親血清HBSAG、HBEAG采用ELISA法檢測(cè)；新生兒血清HBSAG采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測(cè)；隨訪嬰兒血清HBSAG、抗HBS、HBEAG采用ELISA法檢測(cè)；母親及新生兒血清HBVDNA采用PCR法檢測(cè)。研究結(jié)論1孕婦HBEAG陽(yáng)性、HBVDNA陽(yáng)性、孕中期性行為是新生兒出生時(shí)HBSAG陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素。2母親HBEAG可經(jīng)胎盤被動(dòng)傳遞給胎兒，且會(huì)在一定時(shí)間內(nèi)逐漸轉(zhuǎn)陰，故不可作為HBV宮內(nèi)感染的診斷指標(biāo)。新生兒外周血HBSAG大多數(shù)很有可能是在生產(chǎn)時(shí)從母血瞬間進(jìn)入胎兒體內(nèi)而獲得，因?yàn)?0％以上新生兒的HBSAG均在隨訪中轉(zhuǎn)陰，因此對(duì)出生時(shí)HBSAG陽(yáng)性新生兒生后1年內(nèi)的隨訪可能是判斷其是否發(fā)生HBV宮內(nèi)感染的更為可靠的方法。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多傳染性胰腺壞死病毒VP2--VP3虹鱒腸道乳桿菌表達(dá)系統(tǒng)的免疫學(xué)評(píng)價(jià).pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：蘇州大學(xué)碩士學(xué)位論文嬰幼兒輪狀病毒腹瀉臨床流行病學(xué)研究姓名沈蕙申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病學(xué)與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)指導(dǎo)教師徐勇20030501嬰幼兒輪狀病毒腹瀉臨床流行病學(xué)研究中文摘要母乳喂養(yǎng)可減少嬰兒期輪狀病毒腹瀉，輪狀病毒腹瀉患兒如出現(xiàn)血性腹瀉或腹痛，其病程較無(wú)血性腹瀉或腹痛者長(zhǎng)。關(guān)鍵詞嬰幼兒；腹瀉；輪狀病毒；分型；流行狀況；影響因素LI作者沈蕙指導(dǎo)老師徐勇

簡(jiǎn)介：目的建立HPEV的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，在住院腹瀉患兒和無(wú)癥狀兒童中開(kāi)展HPEV的檢測(cè)工作，初步掌握HPEV在蘭州地區(qū)住院腹瀉患兒和無(wú)癥狀兒童中的流行特征；探討不同HPEV基因型與急性胃腸炎之間的關(guān)系，為進(jìn)一步揭示和闡明嬰幼兒重癥腹瀉的病因構(gòu)成及HPEV的病原學(xué)特點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。方法研究對(duì)象選自2006年7月至2007年6月間，蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科因重癥腹瀉而住院的286名5歲以下兒童作為病例組；以及蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒童體檢中心同期進(jìn)行例行體檢的98名無(wú)臨床癥狀的5歲以下兒童作為對(duì)照組，進(jìn)行病例對(duì)照研究。蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科負(fù)責(zé)收集每位研究對(duì)象的糞便標(biāo)本并填寫相關(guān)標(biāo)本采集表后低溫運(yùn)送至中國(guó)CDC病毒所。糞便標(biāo)本經(jīng)提取核酸后通過(guò)REALTIMERTPCR檢測(cè)HPEV。隨機(jī)選取一例HPEV陽(yáng)性標(biāo)本的REALTIMERFPCR產(chǎn)物經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄成RNA標(biāo)準(zhǔn)品，用以對(duì)HPEV核酸濃度進(jìn)行定量。使用基于VP3VP1基因連接區(qū)的兩對(duì)引物進(jìn)行巢式RTPCR擴(kuò)增，通過(guò)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分型。使用MEGA31序列分析軟件對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行基因序列分析和繪制系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；采用SPSS130統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)研究結(jié)果和臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果在本研究中，共檢出HPEV陽(yáng)性標(biāo)本99例，其中病例組檢出84例，檢出率為294％84286；對(duì)照組檢出15例，檢出率為153％1598。在病例組84例HPEV陽(yáng)性標(biāo)本中，HPEV1共發(fā)現(xiàn)43例，占512％，其余分別為HPEV3，25例298％，HPEV4，4例48％，HPEV6，2例24％，HPEV8，1例12％，未分型標(biāo)本，9例107％；在對(duì)照組15例HPEV陽(yáng)性標(biāo)本中，HPEV1共發(fā)現(xiàn)8例，占533％，其余分別為HPEV3，3例200％，HPEV4，3例200％，HPEV5，1例67％。HPEV2和HPEV7均未檢測(cè)到。HPEV1感染好發(fā)于秋冬季節(jié)，HPEV3感染好發(fā)于秋季；與HPEV1和HPEV3感染患兒年齡相比，HPEV4感染患兒年齡較小。病例組中714％6084的HPEV感染患兒為混合感染，對(duì)照組中HPEV感染患兒混合感染率為133％215，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005，輪狀病毒和人杯狀病毒為最常見(jiàn)的混合感染病毒。病毒載量最高的兩份HPEV陽(yáng)性標(biāo)本均為對(duì)照組兒童，病例組和對(duì)照組間HPEV1、3、4基因型病毒載量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005。VP3VP1基因進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn)，有一份毒株N049330無(wú)法被分型，它與相臨參考株的氨基酸同源性分別為8941％和6744％。對(duì)不同組間臨床癥狀比較發(fā)現(xiàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，HPEV1和HPEV3感染并不能加重腹瀉患兒的臨床癥狀。結(jié)論HPEV在蘭州地區(qū)腹瀉住院患兒和無(wú)癥狀兒童糞便標(biāo)本中的檢出率均較高，且有多種基因型在流行。研究結(jié)果提示，HPEV1和HPEV3可能并不是5歲以下兒童胃腸炎的致病原。因此，推測(cè)HPEV1和HPEV3可能是胃腸道GASTROINTESTINAL，GI中的機(jī)會(huì)性致病原，當(dāng)機(jī)體感染其他病毒時(shí)才被激活而致病。

簡(jiǎn)介：研究背景登革病毒DENGUEVIRUS，DENV是單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科、黃病毒屬。DENV包含4個(gè)血清型DENV1，DENV2，DENV3和DENV4。DENV的感染可引起一系列的臨床癥狀，包括登革熱DENGUEFEVER，DF和登革出血熱DENGUEHEMRHAGICFEVER，DHF登革休克綜合征DENGUESHOCKSYNDROME，DSS。以蚊媒為主要傳播媒介的DENV廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。近20年來(lái)，隨著全球氣候變暖和全球化帶來(lái)的人口流動(dòng)性增加，DENV的暴發(fā)和流行更為頻繁。中國(guó)的臺(tái)灣、海南、福建、廣東、廣西和浙江等沿海省份均為DENV的流行地區(qū)。廣州近幾年的登革疫情呈高發(fā)態(tài)勢(shì)。目前，世界上尚無(wú)可有效預(yù)防登革熱的疫苗和相應(yīng)的治療藥物。利用釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)的HBSAG和HPV顆粒疫苗的成功上市提示開(kāi)發(fā)安全高效的DENV的病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLESVLPS疫苗具有廣闊的應(yīng)用前景。以DENV為代表的黃病毒VLPS是指通過(guò)在體外表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)PRM和E蛋白而組裝成的，具有與病毒粒子類似的空間結(jié)構(gòu)且不含病毒核酸的空心顆粒。由于VLPS保留了與天然病毒粒子類似的空間構(gòu)型和誘導(dǎo)中和抗體的抗原表位，因此VLPS不但能誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫，而且可以激發(fā)CD4T細(xì)胞的增殖和CTL反應(yīng)CYTOTOXICTLYMPHOCYTE。VLPS被認(rèn)為是預(yù)防黃病毒感染的有效的、潛在的亞單位疫苗候選。目的利用含GAPGLYCERALDEHYDE3PHOSPHATEDEHYDROGENASE啟動(dòng)子的畢赤酵母組成性表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)編碼DENV2PRM和E蛋白的融合基因，在成功獲得DENV2VLPS的同時(shí)實(shí)現(xiàn)VLPS在該系統(tǒng)中的連續(xù)和高效表達(dá)。最后對(duì)VLPS的免疫原性和免疫保護(hù)性進(jìn)行研究，為開(kāi)發(fā)四價(jià)的DENV病毒樣顆粒疫苗奠定基礎(chǔ)。方法首先，通過(guò)分子遺傳進(jìn)化分析選擇具有代表性的DENV2流行株作為研發(fā)顆粒疫苗的候選株；利用RTPCR的方法從病毒上清中擴(kuò)增DENV2的PRM和E基因；設(shè)計(jì)并構(gòu)建含全長(zhǎng)的E蛋白的PRME與含截去E蛋白TM2跨膜域的PRME472，分析TM2的缺失對(duì)E蛋白分泌水平和VLPS組裝的影響；利用在PRM的N末端分別引入PRM信號(hào)肽和Α信號(hào)肽以探索VLPS的高水平分泌表達(dá)。然后，將構(gòu)建好的重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)PCR、酶切和測(cè)序鑒定正確后，將重組載體轉(zhuǎn)化畢赤酵母；將PCR鑒定正確的酵母克隆進(jìn)行發(fā)酵表達(dá)；將發(fā)酵上清和細(xì)胞裂解液分別進(jìn)行SDSPAGE和WESTERNBLOTTING檢測(cè)；并分析目的蛋白的連續(xù)性表達(dá)情況；利用發(fā)酵上清進(jìn)行血凝實(shí)驗(yàn)檢測(cè)VLPS的分泌情況；利用蔗糖梯度離心的方法從細(xì)胞裂解液中分離純化細(xì)胞內(nèi)的VLPSINTRACELLULARVLPS，利用超濾濃縮的方法純化上清的VLPSSECRETEDVLPS。通過(guò)電子顯微鏡技術(shù)檢測(cè)VLPS的結(jié)構(gòu)以及在細(xì)胞內(nèi)的組裝特征。最后，將純化到的VLPS免疫BALBC小鼠，通過(guò)ELISA測(cè)定血清中特異性抗體的滴度；利用免疫熒光技術(shù)和體外中和試驗(yàn)檢測(cè)VLPS的免疫反應(yīng)性和中和抗體的滴度；對(duì)免疫鼠進(jìn)行攻毒實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)VLPS能否誘導(dǎo)免疫記憶。結(jié)果1分子遺傳進(jìn)化分析結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)室分離的DENV2ZS0101株在進(jìn)化樹(shù)上與廣東省2001株的DENV2流行株，以及菲律賓19982001年的DENV2流行株比鄰，在基因分型上都屬于全球流行COSMOPOLITAN基因型。因此，選取DENV2ZS0101株作為DENV2病毒顆粒疫苗的候選株具有廣泛的代表性。2本研究成功構(gòu)建了以下3種重組表達(dá)質(zhì)粒，包括含PRM信號(hào)肽和全長(zhǎng)E蛋白的PGAPASPRME；含PRM信號(hào)肽和截去E蛋白TM2端的PGAPASPRME472；含Α信號(hào)肽和全長(zhǎng)E蛋白的PGAPΑAPRME；并將重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化畢赤酵母X33，獲得了重組表達(dá)克隆。3通過(guò)SDSPAGE和WESTERNBLOTTING檢測(cè)發(fā)現(xiàn)E蛋白分別在含PRM信號(hào)肽和Α信號(hào)肽的引導(dǎo)下分泌到上清中。PRM信號(hào)肽的分泌效率高于Α信號(hào)肽。同時(shí)，與全長(zhǎng)的E蛋白相比，缺失TM2端的E蛋白的分泌水平并不沒(méi)有得到明顯的提高。研究結(jié)果還表明含GAP啟動(dòng)子的組成性表達(dá)系統(tǒng)能連續(xù)性和高效表達(dá)E蛋白。4在含PRM信號(hào)肽重組子的表達(dá)上清中檢測(cè)到了血凝活性。說(shuō)明PRM信號(hào)肽能有效的引導(dǎo)VLPS分泌到上清。且TM2端的缺失不會(huì)影響病毒顆粒的組裝。5通過(guò)蔗糖密度梯度離心，分離到了大小分別為30NM和55NM的DENVVLPS。并通過(guò)透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)這兩種VLPS在酵母細(xì)胞內(nèi)的組裝特征與DENV病毒感染細(xì)胞中類似。6通過(guò)免疫電鏡觀察，在含PRM信號(hào)肽的重組子的發(fā)酵上清濃縮液中檢測(cè)到了30NM的VLPS，說(shuō)明VLPS可以被PRM信號(hào)肽有效的引導(dǎo)分泌到上清中。7ELISA檢測(cè)抗體滴度表明VLPS能誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了高水平的的特異性抗體，最高滴度達(dá)到了110000。免疫熒光結(jié)果表明將VLPS免疫血清稀釋1280倍后，仍在DENV2感染的C636細(xì)胞漿內(nèi)檢測(cè)到了強(qiáng)烈的熒光信號(hào)。8體外中和試驗(yàn)表明，VLPS免疫血清能有效的中和DENV2NGC株對(duì)C636細(xì)胞的感染，中和滴度與滅活的DENV2免疫血清相同，均為145。攻毒后VLPS免疫鼠的中和抗體滴度有了很大的提升，達(dá)到了1100。免疫結(jié)果提示VLPS能誘導(dǎo)BALBC鼠產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)。結(jié)論1DENV2ZS0101株屬于全球流行基因型，可作為登革病毒樣顆粒疫苗的候選株。2首次利用畢赤酵母非甲醇誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)成功的高水平表達(dá)了DENV2VLPS。并在發(fā)酵上清中檢測(cè)到了VLPS的分泌，為VLPS后續(xù)的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。3首次在酵母表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)并分離到了兩種大小分別為30NM和55NM的DENV2VLPS。并利用透射電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)DENVVLPS在酵母細(xì)胞中的組裝特征與病毒感染細(xì)胞類似。研究結(jié)果提示組成型表達(dá)DENVVLPS酵母系統(tǒng)或許可以作為研究登革病毒組裝和感染的理想模型。4通過(guò)免疫實(shí)驗(yàn)證實(shí)DENV2VLPS具有良好的免疫原性，免疫反應(yīng)性和體外中和病毒的能力。免疫結(jié)果初步提示VLPS能誘導(dǎo)免疫鼠產(chǎn)生免疫記憶反應(yīng)。

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究姓名徐金芬申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師賈衛(wèi)華20080527廣東鼻咽癌相關(guān)EB病毒BZLFL基因的突變分析及初步的功能學(xué)研究腫瘤中，體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)均表明由BZLFL或BRLFL基因啟動(dòng)的EB病毒的少量裂解復(fù)制可以通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VASCULARENDOTHELIALGROWTHFACTOR，VEGF的生成促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)；但在C18鼻咽癌腫瘤細(xì)胞中注入BZLFL或BRLFL的腺病毒表達(dá)載體誘導(dǎo)EB病毒進(jìn)行大量裂解復(fù)制時(shí)卻可以顯著抑制裸鼠腫瘤的生長(zhǎng)。BZLFL基因在鼻咽上皮細(xì)胞癌變的過(guò)程中究竟扮演什么角色目前尚不清楚，作為引發(fā)EB病毒裂解復(fù)制的必需基因，它在朗病毒與鼻咽癌的相關(guān)分子機(jī)制中可能起著極其重要的作用，對(duì)它的深入研究也是非常有意義的。為了深入研究EB病毒與鼻咽癌的關(guān)系，本課題組從廣東鼻咽癌患者中成功分離一株高致瘤朗病毒亞型GDL并完成其全基因組測(cè)序工作，GDL株與原型B958株相比，存在43個(gè)位點(diǎn)的缺失，44個(gè)位點(diǎn)的插入以及1413個(gè)位點(diǎn)的變異。GDL株來(lái)源于鼻咽癌患者且在廣東鼻咽癌患者中具有高度的代表性，它為EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機(jī)制研究提供了較好的模板。我們對(duì)GDL株髓病毒裂解期立早基因BZLFL簡(jiǎn)稱為GDL型BZLFL基因的序列比對(duì)結(jié)果顯示，相對(duì)原型B958株，GDL型BZLFL基因的3個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子中共存在30個(gè)點(diǎn)突變，3個(gè)單堿基缺失和1個(gè)單堿基插入。鑒于以上研究結(jié)果，我們決定對(duì)GDL型BZLFL基因編碼區(qū)的變異位點(diǎn)進(jìn)行頻率調(diào)查，同時(shí)對(duì)多位點(diǎn)進(jìn)行連鎖變異分析，探討GDL型BZLFL基因在廣東鼻咽癌患者中是否具有代表性；另外通過(guò)對(duì)GDL型BZLFL基因初步的功能學(xué)研究分析這些變異位點(diǎn)對(duì)BZLFL基因的功能影響，進(jìn)一步探討B(tài)ZLFL基因在EB病毒與鼻咽癌相關(guān)的分子機(jī)制中可能起到的作用。2研究方法21耶病毒GDL型BZLFL基因的突變分析方法采集研究對(duì)象的漱口水標(biāo)本并提取DNA，漱口水標(biāo)本包括廣東鼻咽癌患者192例，廣東健康人群197例和河南健康人群128例，另有鼻咽癌組織DNA標(biāo)本54例，利用巢式PCR方法擴(kuò)增BZLFL基因的特定片斷每個(gè)片斷上都分布有多個(gè)突變位點(diǎn)，將PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，用DNASTAR序列分析軟件分析校讀測(cè)序結(jié)果。分析校讀測(cè)序結(jié)果后篩選出可以得到BZLFL基因序列全長(zhǎng)的標(biāo)本。通過(guò)對(duì)BZLFL基因編碼區(qū)的18個(gè)變異位點(diǎn)在廣東鼻咽癌患者和廣東，河南健康人群中的單點(diǎn)變異及多位點(diǎn)連鎖變異分布頻率的調(diào)查分析GDL型BZLFL基因與鼻咽癌的相關(guān)關(guān)系。1L

簡(jiǎn)介：目的血液制品的補(bǔ)充是圍手術(shù)期及創(chuàng)傷救治的重要措施之一。普通新鮮冰凍血漿中某些未能檢測(cè)到的病毒如疾病的窗口期輸注到病人體內(nèi)可能造成輸注者感染病毒。有機(jī)溶劑表面活性劑SD處理法能有效地殺滅血漿中的脂包膜病毒。SDP雖然已成功地應(yīng)用于臨床，但其臨床救治效果、適應(yīng)癥、安全性及臨床副作用仍需進(jìn)一步的臨床驗(yàn)證。本研究著重探討SD血漿輸注后對(duì)機(jī)體凝血、纖溶功能及血液流變學(xué)影響，以便為臨床應(yīng)用提供指導(dǎo)作用。方法接受四肢、脊柱手術(shù)，并估計(jì)失血量在500ML以上的擇期手術(shù)病人，60例，病人年齡在1860歲。分段隨機(jī)法隨機(jī)分為三組SD血漿組SDP組，N20、普通新鮮冰凍血漿組FFP組，N20、10％羥乙基淀粉組HES組，N20。所選擇病例均采取全身麻醉方式，術(shù)中連續(xù)監(jiān)測(cè)直接橈動(dòng)脈血壓、心電圖、脈搏氧飽和度、呼末二氧化碳分壓、間斷監(jiān)測(cè)中心靜脈壓。在失血量達(dá)400500ML時(shí)開(kāi)始在各組輸注實(shí)驗(yàn)藥物，輸注量為810MLKG，在60MIN內(nèi)輸注完畢，術(shù)中根據(jù)HCT考慮是否輸注紅細(xì)胞。在兩種血漿輸注后留取少量血漿標(biāo)本；各組在輸注試驗(yàn)藥物前、輸注完畢后60MIN、輸注完畢后120MIN采集血樣。檢測(cè)凝血相PT、APTT、TT、INR、FIB、TEG、血小板計(jì)數(shù)、ATⅢ抗凝血酶Ⅲ、蛋白C、D二聚體、TPA組織纖溶酶原激活劑、PAI纖溶酶原激活抑制物含量以及全血高切黏度、低切黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、變形指數(shù)、剛性指數(shù)、紅細(xì)胞壓積以及病毒學(xué)檢測(cè)甲肝抗體、乙肝表面抗原、丙肝抗體、愛(ài)滋病抗體、梅毒抗體。采用SPSS110軟件對(duì)各組間進(jìn)行重復(fù)測(cè)量的方差分析法處理，P＜005有顯著性差異，P＜001有非常顯著性差異。結(jié)果1凝血相及TEG檢測(cè)常規(guī)的凝血相檢查在三組病人輸注前后均無(wú)明顯變化P＞005。三組病人在輸注后均朝著凝血速度加快的有利方向發(fā)展，R、K、ANGLE值在輸注血漿組SDP、FFP及血漿代用品組HES均呈現(xiàn)出相似的變化P＜005；輸注SDP及FFP后，血凝塊的強(qiáng)度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高M(jìn)A值明顯升高P＜005，HES組則在輸注后明顯下降P＜001。2輸注HES后體內(nèi)蛋白C及ATⅢ含量在輸注后有不同程度的下降P＜005。SDP組在輸注后血漿內(nèi)蛋白C含量也呈現(xiàn)明顯下降趨勢(shì)P＜005，而FFP組輸注前后無(wú)差異性改變P＞005。ATⅢ在兩組輸注血漿的病例中顯示無(wú)明顯改變P＞005。3D二聚體SDP組、FFP組于輸注后呈明顯增高趨勢(shì)P＜005；HES組輸注前后無(wú)明顯改變P＞005。TPASDP組、FFP組在輸注后逐漸增高，直至輸注后120MIN較輸注增高明顯P＜005；HES組輸注后60MIN明顯下降P＜005，而在120MIN后恢復(fù)至輸注前水平P＞005。PAI1FFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005，SDP組在輸注后120MIN升高明顯P＜001；HES組在輸注后60MIN，120MIN明顯升高P＜001。4血液流變學(xué)全血高切黏度HBV、全血低切黏度LBVFFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005；SDP組于輸注后120MIN較輸注明顯降低P＜005；HES組輸注后60MIN，120MIN明顯低于輸注前P＜005。血漿黏度PV各組在輸注前后均無(wú)前明改變P＞005。紅細(xì)胞壓積HCTSDP組、FFP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005；HES組輸注后明顯下降P＜001。紅細(xì)胞聚集指數(shù)AISDP組及HES組輸注后60MIN120MIN較輸注前均有明顯下降P＜005，F(xiàn)FP組輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005。紅細(xì)胞變形指數(shù)DI、及紅細(xì)胞剛性指數(shù)RI各組在輸注前后均無(wú)明顯改變P＞005。5病毒學(xué)檢測(cè)所有輸注血漿的病例于輸注后均無(wú)新的病毒感染證據(jù)。結(jié)論1血漿進(jìn)行病毒滅活處理與否，輸注后對(duì)機(jī)體血凝塊的強(qiáng)度和血栓的穩(wěn)定性均有不同程度的提高；但輸注羥乙基淀粉后，血凝塊的強(qiáng)度及血栓的穩(wěn)定性有所下降。2SDP及FFP輸注后機(jī)體抗凝血功能優(yōu)于HES組，二者效果相似。3SDP對(duì)于維持機(jī)體失血后凝血與纖溶功能的平衡，防止凝血物質(zhì)過(guò)度消耗上較FFP及HES更為理想。4SDP輸注后可降低血液黏度及紅細(xì)胞聚集能力，改善血液流變學(xué)特性效果與HES相似均優(yōu)于FFP組。5安全性及臨床副作用SD血漿輸注后無(wú)新的病毒感染證據(jù)，臨床副作用與新鮮冰凍血漿相似。經(jīng)病毒滅活的SD血漿在安全性方面更優(yōu)于新鮮冰凍血漿。

簡(jiǎn)介：目的制造兔椎間盤退變模型；應(yīng)用腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV介導(dǎo)人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子Β1HUMANTRANSFMINGGROWTHFACTΒ1，HTGFΒ1、HTGFΒ3基因體內(nèi)轉(zhuǎn)染兔退變椎間盤，觀察目的基因的表達(dá)以及單基因轉(zhuǎn)染或雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染對(duì)退變髓核細(xì)胞的生物學(xué)作用。方法成年新西蘭大白兔通過(guò)注射纖維結(jié)合素片段FIBRONECTINFRAGMENT，F(xiàn)NF制造椎間盤退變模型，造模后2、4、8、12周分別進(jìn)行影像學(xué)、形態(tài)學(xué)、組織學(xué)檢測(cè)，觀察造模椎間盤變化。將造模成功動(dòng)物隨機(jī)分為4組，各組分別于造模髓核內(nèi)注射RAAV2HTGFΒ1、RAAV2HTGFΒ3、RAAV2HTGFΒ1RAAV2HTGFΒ3、RAAV2EGFPENHANCEDGREENFLUESCENTPROTEIN，EGFP，自身對(duì)照組椎間盤內(nèi)注射磷酸鹽緩沖液PBS。手術(shù)后4、8、12周時(shí)，收獲各組髓核組織作組織培養(yǎng)或裂解，蛋白多糖的合成由35S硫酸鹽結(jié)合率來(lái)測(cè)定，免疫印跡WESTERNBLOT法檢測(cè)髓核Ⅱ型膠原的含量。分別于術(shù)后1周、12周觀察HTGFΒ1和EGFP的表達(dá)。結(jié)果1退變椎間盤內(nèi)注射RAAV2HTGFΒ11周后，髓核中HTGFΒ1含量較注射PBS椎間盤顯著增多；注射RAAV2EGFP椎間盤，術(shù)后12周仍可觀察到EGFP的表達(dá)。2基因轉(zhuǎn)染后4周、8周、12周，轉(zhuǎn)染。RAAV2HTGFΒ1組、RAAV2HTGFΒ3組和雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組髓核組織Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)均較自身PBS組增高，各組均有顯著差異。轉(zhuǎn)染RAAV2EGFP組同自身對(duì)照PBS組比較沒(méi)有顯著差異；3造模后4、8、12周，雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染組椎間盤Ⅱ型膠原和蛋白多糖的表達(dá)高于單基因轉(zhuǎn)染椎間盤，有顯著差異。結(jié)論RAAV2介導(dǎo)的HTGFΒ1和HTGFΒ3轉(zhuǎn)染退變的椎間盤髓核細(xì)胞后，HTGFΒ1和HTGFΒ3可持續(xù)表達(dá)12周，并可有效的促進(jìn)退變椎間盤蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成；雙基因聯(lián)合轉(zhuǎn)染具有協(xié)同效應(yīng)。

簡(jiǎn)介：背景和目的全球每年約5％10的成年人和200的兒童被流感病毒感染。病毒的不斷進(jìn)化可致疫苗保護(hù)性下降甚至失效，產(chǎn)生抗藥毒株。除季節(jié)性流感，過(guò)去已發(fā)現(xiàn)大量禽流感感染人類并引起嚴(yán)重疾病如H5N1、H7N9、H10N8和H5N6等。兒童是感染流感的高危人群之一，且可傳染成人看護(hù)者，因此在兒童中監(jiān)測(cè)流感對(duì)防控流感有重要意義。本研究旨在監(jiān)測(cè)汕頭兒童中流感流行活動(dòng)及H3N2和H7N9的分子變異特征和進(jìn)化規(guī)律。方法使用RTPCR（逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)）對(duì)ILI標(biāo)本進(jìn)行流感分型。在某些情況下，用MDCK細(xì)胞分離病毒，對(duì)比RTPCR與細(xì)胞分離法在流感檢出效率上的差異。選出陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)序，分析分子變異特征和進(jìn)化規(guī)律。比較不同流感患者的人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床特征。為了解H7N9的傳播途徑，還在本地菜市場(chǎng)活禽中開(kāi)展了小規(guī)模采樣監(jiān)測(cè)。結(jié)果流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長(zhǎng)的形態(tài)。2014年夏出現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株。檢出一例兒童H7N9輕癥，和汕頭報(bào)導(dǎo)的4例重癥H7N9的病毒基因組各片段的進(jìn)化距離都非常近。未出現(xiàn)人傳人的突變組合和神經(jīng)氨酸酶抑制劑耐藥性的突變，但有優(yōu)先結(jié)合SAΑ26GAL受體的突變（HAT160A、Q226L和T221P），抗離子通道抑制劑類藥物的突變（M2S31N和V27I）和在小鼠感染中增強(qiáng)毒力的突變（M1N30D和T215A，NS1A42S，NA6973位缺失），然而能在小鼠感染中增強(qiáng)病毒復(fù)制能力的兩個(gè)氨基酸位點(diǎn)保守未變PB2E627和D701。活禽市場(chǎng)同時(shí)檢出H7N9和H9N2?！?歲更易感染流感；結(jié)論1流感在汕頭幾乎全年流行。甲型H1N1和H3N2基本處于此消彼長(zhǎng)。22014年夏發(fā)現(xiàn)抗原性漂移的H3N2毒株，對(duì)20142015和20152016年疫苗的保護(hù)性均具挑戰(zhàn)。3不同型流感患者在人口統(tǒng)計(jì)學(xué)和臨床特征上的某些顯著性差異，可為醫(yī)生診斷、治療流感提供參考。4在汕頭兒童普通流感監(jiān)測(cè)中成功篩查出輕癥病例，說(shuō)明在兒科普通流感監(jiān)測(cè)中檢測(cè)H7N9十分必要。5人感染H7N9的威脅仍來(lái)自環(huán)境。H7N9和H9N2在禽類中仍在進(jìn)行內(nèi)部基因交換。但該時(shí)期汕頭的H7N9基因多樣性還比較穩(wěn)定。