廣東鼻咽癌相關EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學研究.pdf

1、中山大學碩士學位論文廣東鼻咽癌相關EB病毒BZLF1基因的突變分析及初步的功能學研究姓名：徐金芬申請學位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學指導教師：賈衛(wèi)華20080527廣東鼻咽癌相關EB病毒BZLFl基因的突變分析及初步的功能學研究腫瘤中，體內和體外實驗均表明由BZLFl或BRLFl基因啟動的EB病毒的少量裂解復制可以通過促進血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，vEGF)的生成促進腫瘤的生長；但在C1

2、8鼻咽癌腫瘤細胞中注入BZLFl或BRLFl的腺病毒表達載體誘導EB病毒進行大量裂解復制時卻可以顯著抑制裸鼠腫瘤的生長。BZLFl基因在鼻咽上皮細胞癌變的過程中究竟扮演什么角色目前尚不清楚，作為引發(fā)EB病毒裂解復制的必需基因，它在朗病毒與鼻咽癌的相關分子機制中可能起著極其重要的作用，對它的深入研究也是非常有意義的。為了深入研究EB病毒與鼻咽癌的關系，本課題組從廣東鼻咽癌患者中成功分離一株高致瘤朗病毒亞型GDl并完成其全基因組測序工作，G

3、Dl株與原型B958株相比，存在43個位點的缺失，44個位點的插入以及1413個位點的變異。GDl株來源于鼻咽癌患者且在廣東鼻咽癌患者中具有高度的代表性，它為EB病毒與鼻咽癌相關的分子機制研究提供了較好的模板。我們對GDl株髓病毒裂解期立早基因BZLFl(簡稱為GDl型BZLFl基因)的序列比對結果顯示，相對原型B958株，GDl型BzLFl基因的3個外顯子和2個內含子中共存在30個點突變，3個單堿基缺失和1個單堿基插入。鑒于以上研究結

4、果，我們決定對GDl型BzLFl基因編碼區(qū)的變異位點進行頻率調查，同時對多位點進行連鎖變異分析，探討GDl型BZLFl基因在廣東鼻咽癌患者中是否具有代表性；另外通過對GDl型BzLFl基因初步的功能學研究分析這些變異位點對BzLFl基因的功能影響，進一步探討B(tài)ZLFl基因在EB病毒與鼻咽癌相關的分子機制中可能起到的作用。2研究方法：21耶病毒GDl型BZLFl基因的突變分析方法：采集研究對象的漱口水標本并提取DNA，漱口水標本包括：廣東

5、鼻咽癌患者192例，廣東健康人群197例和河南健康人群128例，另有鼻咽癌組織DNA標本54例，利用巢式PCR方法擴增BZLFl基因的特定片斷(每個片斷上都分布有多個突變位點)，將PCR產(chǎn)物直接測序，用DNAstar序列分析軟件分析校讀測序結果。分析校讀測序結果后篩選出可以得到BZLFl基因序列全長的標本。通過對BZLFl基因編碼區(qū)的18個變異位點在廣東鼻咽癌患者和廣東，河南健康人群中的單點變異及多位點連鎖變異分布頻率的調查分析GDl型