簡介：點(diǎn)擊查看更多A組人輪狀病毒NSP2基因克隆、表達(dá)及免疫學(xué)性質(zhì)研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：本文主要從以下幾個部分展開論述第一部分粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗流感病毒機(jī)制研究粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子GRANULOCYTEMACROPHAGECOLONYSTIMULATINGFACT，GMCSF最初是從小鼠肺條件培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)的一種能刺激粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞形成集落的因子。隨著對其研究的深入，發(fā)現(xiàn)除了促進(jìn)造血祖細(xì)胞的增殖和分化，GMCSF對成熟白細(xì)胞的功能也有激活作用，有助于增強(qiáng)機(jī)體的抗感染免疫。本研究在前期的工作中首次證實(shí)GMCSF對FM1流感模型小鼠有顯著的保護(hù)作用，經(jīng)GMCSF預(yù)防治療后，能明顯降低流感模型小鼠肺流感病毒滴度，減輕肺組織病變，提高模型小鼠的生存率，該研究結(jié)果已于2010年發(fā)表于CYTOKINE雜志上。為了在已有的藥效學(xué)研究基礎(chǔ)上進(jìn)一步闡明GMCSF抗流感病毒的作用機(jī)制，本論文第一部分從炎癥和細(xì)胞凋亡兩方面對此進(jìn)行了較為系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)探索。沿用之前的預(yù)防治療方式，經(jīng)滴鼻途徑給予BALBC小鼠GMCSF7天，劑量為134MGKGDAY，然后再對小鼠感染致死量的A型流感病毒FM1，并于感染病毒的第0天、第2天和第4天各選取一定數(shù)量的小鼠進(jìn)行解剖，收獲肺標(biāo)本，分別用ELISA法檢測肺勻漿中的細(xì)胞因子，流式細(xì)胞術(shù)檢測肺組織內(nèi)免疫細(xì)胞的占比，REALTIMERTPCR技術(shù)檢測肺組織內(nèi)A型流感病毒M基因、NFΚB、CASPASE3、BAX和BCL2MRNA表達(dá)水平，WESTERNBLOT檢測NFΚB、磷酸化NFΚB、IΚB、CASPASE3、CLEAVEDCASPASE3、BAX和BCL2蛋白表達(dá)水平，免疫組化檢測肺組織石蠟切片中磷酸化NFΚB和CLEAVEDCASPASE3的定位表達(dá)。數(shù)據(jù)顯示，經(jīng)GMCSF預(yù)防治療后的小鼠肺TNFΑ和IFNΑΒ生成量顯著增加，在病毒感染早期肺組織內(nèi)的天然免疫細(xì)胞的數(shù)量占比也高于模型對照組，而之后這些細(xì)胞因子濃度和粒細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞數(shù)量占比下降，均低于模型對照組，該結(jié)果表明GMCSF預(yù)防治療可以在病毒感染初期顯著上調(diào)機(jī)體的抗感染免疫水平并在之后控制機(jī)體的免疫應(yīng)答強(qiáng)度。感染第2天和第4天的A型流感病毒M基因定量分析顯示GMCSF治療組均顯著低于模型對照組，提示GMCSF對肺流感病毒載量的有效抑制作用，這可能與GMCSF及早啟動抗病毒免疫應(yīng)答，控制了病毒的復(fù)制和擴(kuò)散有關(guān)。NFΚB是調(diào)控炎癥因子和干擾素表達(dá)的重要因子，檢測表明小鼠經(jīng)GMCSF預(yù)防干預(yù)后，肺NFΚBMRNA和磷酸化NFΚB蛋白表達(dá)增加，并且在感染流感病毒后也穩(wěn)定在相當(dāng)水平，而模型組小鼠肺NFΚBMRNA和磷酸化NFΚB蛋白水平在感染病毒后大幅上升，顯著高于GMCSF干預(yù)組。對細(xì)胞凋亡相關(guān)因子的檢測表明，GMCSF可以抑制促凋亡因子BAX、CASPASE3和CLEAVEDCASPASE3的表達(dá)，增加抑凋亡因子BCL2的表達(dá)，提示GMCSF明顯減少流感病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們推測GMCSF對流感模型小鼠的保護(hù)機(jī)制1GMCSF通過激活NFΚB信號途徑，促進(jìn)肺抗病毒細(xì)胞因子TNFΑ和Ⅰ型IFN生成，并且在感染早期有效募集天然免疫細(xì)胞，從而控制了病毒的復(fù)制和擴(kuò)散。由于病毒載量的顯著抑制，使得炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答一直控制在適度水平，從而避免了炎癥性病理損傷的發(fā)生2GMCSF上調(diào)抑凋亡因子BCL2和下調(diào)促凋亡因子BAX的表達(dá)，抑制CASPASE信號途徑的激活，顯著減少了流感病毒誘導(dǎo)的肺細(xì)胞的凋亡和由此導(dǎo)致的嚴(yán)重肺損傷。簡言之，GMCSF的預(yù)防干預(yù)使機(jī)體抗感染免疫水平在感染之初即顯著上調(diào)，及早啟動的抗病毒免疫應(yīng)答，有效控制了流感病毒的復(fù)制和擴(kuò)散，避免了因高病毒載量導(dǎo)致的過度炎癥反應(yīng)和細(xì)胞凋亡的發(fā)生，從而有效保護(hù)了流感病毒感染小鼠。該研究結(jié)果為GMCSF應(yīng)用于流感的預(yù)治提供了理論基礎(chǔ)。第二部分恩替卡韋與黃芩苷組合物抗乙肝病毒藥效學(xué)研究黃芩苷BAICALIN，BA是從唇形科植物黃芩SCUTELLARIABAICALENSISGEIGI的干燥根中提取的一種黃酮類化合物，藥理作用廣泛，具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、解熱、鎮(zhèn)靜、降壓等功效。體外實(shí)驗(yàn)表明，黃芩苷對乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV復(fù)制有一定抑制作用，而黃芩苷藥物作為乙肝治療的輔助用藥在臨床上亦有不錯的療效，但是有關(guān)黃芩苷抗乙型肝炎病毒的機(jī)制尚未見文獻(xiàn)報道。本論文首次對黃芩苷抗乙肝病毒的作用機(jī)制進(jìn)行了探索。分別以黃芩苷50ΜM、25ΜM和125ΜM作用于HEPG22215細(xì)胞模型，采用ELISA和REALTIMEPCR方法分別檢測細(xì)胞上清中HBV抗原和HBVDNA水平，結(jié)果顯示黃芩苷對HBSAGHBEAG和HBVDNA均有一定抑制作用。NTHERNBLOT和REALTIMERTPCR檢測表明黃芩苷顯著減少HEPG22215細(xì)胞內(nèi)的HBV2124KB和35KBRNA表達(dá)水平，同時發(fā)現(xiàn)黃芩苷顯著下調(diào)宿主細(xì)胞的肝細(xì)胞核因子HNF1Α和HNF4Α的表達(dá)，而HNF1Α和HNF4Α都是重要的HBVRNA轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控因子，由此推測黃芩苷可能通過下調(diào)HNF1Α和HNF4Α的表達(dá)，抑制HBVRNA的轉(zhuǎn)錄生成，繼而影響病毒蛋白的表達(dá)和HBVDNA的合成，從而抑制HBV的復(fù)制。本研究又將恩替卡韋ENTECAVIR，ETV與黃芩苷配伍，分別在HEPG22215細(xì)胞模型和通過對HBV進(jìn)行RTM204VRTL180M突變（YMDD主要突變類型之一）并建立的拉米夫定耐藥細(xì)胞模型中考察了恩替卡韋黃芩苷組合物ETVBA對野生型HBV及拉米夫定耐藥突變HBV的抑制效果。結(jié)果表明，在HEPG22215細(xì)胞模型中，組合物ETV3NMBA50ΜM、ETV075NMBA50ΜM和ETV019NMBA50ΜM對野生型HBV的HBSAGHBEAG和HBVDNA的合成均顯示顯著的抑制作用，較之單獨(dú)使用ETV干預(yù)，對HBSAG抑制率分別提高3505％、3567％和3944％，對HBEAG抑制率分別提高1099％、1245％和1246％，對HBVDNA抑制率分別提高1066％、1319％和1217％。而在HBV拉米夫定耐藥細(xì)胞模型中，組合物ETV48NMBA50ΜM、ETV16NMBA50ΜM、ETV3NMBA50ΜM和ETV075NMBA50ΜM也顯示對HBVRTM204VRTL180M突變株的顯著抑制作用，較之單獨(dú)使用ETV干預(yù)，對HBSAG抑制率分別提高3000％、3000％、2958％和3292％對HBEAG抑制率分別提高2888％、3108％、3267％和3094％對HBVDNA抑制率分別提高3760％、4100％、3580％和3388％。以上數(shù)據(jù)表明，相比單獨(dú)使用ETV干預(yù)，ETVBA組合物可以提高對野生型HBV和拉米夫定耐藥突變HBV抑制效果，這可能與ETV和BA具有不同抗病毒機(jī)制有關(guān)，ETV主要通過影響病毒聚酶活性抑制HBVDNA的復(fù)制，而BA則通過下調(diào)HNF1Α和HNF4Α表達(dá)影響HBVRNA的合成，兩者配伍組合后，作用機(jī)制上的互補(bǔ)使得抗HBV效果得以提升。另外，由于HBVYMDD變異株對ETV敏感性明顯減弱，而BA的通過下調(diào)宿主的肝細(xì)胞核因子影響HBV復(fù)制，抗HBV效果不受病毒變異影響，使得ETVBA組合物對HBVYMDD突變株的抑制效果提升更為顯著，提示ETVBA組合物在治療HBV拉米夫定耐藥株感染方面可能更具優(yōu)勢。本研究還采用口服給藥方式在鴨乙肝動物模型中進(jìn)一步考察了該組合物在體內(nèi)的抗DHBV療效。通過斑點(diǎn)印跡雜交和SOUTHERN印跡雜交檢測治療后的鴨血清和肝臟DHBVDNA水平。結(jié)果顯示，組合物ETV01MGKGDBA250MGKGD和ETV0025MGKGDBA250MGKGD治療13天后，對鴨血清DHBVDNA的抑制率分別達(dá)5361％和4696％，比單獨(dú)使用ETV治療的抑制效果分別提高1474％和1503％對鴨肝臟DHBVDNA的抑制率分別達(dá)726％和6283％，比單獨(dú)使用ETV治療的抑制效果分別提高860％和1924％，表明ETVBA組合物在體內(nèi)同樣具有顯著的抗乙肝病毒作用，并且比單獨(dú)ETV治療具有更好的抗病毒療效。這些發(fā)現(xiàn)對提高抗乙肝病毒療效和克服核苷類藥物的耐藥等具有重要意義。

簡介：目的了解2013年貴陽市流感病毒流行株的型別及其流行趨勢，比較流感病毒不同檢測方法的差異，探討影響流感病毒分離培養(yǎng)陽性率的因素。方法1在貴陽市流感哨點(diǎn)監(jiān)測醫(yī)院（貴陽市第一人民醫(yī)院和清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院）隨機(jī)采集2013年度075歲流感樣病例的鼻咽拭子標(biāo)本1725份；2將全部標(biāo)本分別接種狗腎傳代細(xì)胞（MDCK細(xì)胞），倒置顯微鏡高倍鏡下觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），收集CPE達(dá)到75％以上的培養(yǎng)物，即使無CPE也應(yīng)該于第7天進(jìn)行收集。所收集的細(xì)胞培養(yǎng)物用血凝試驗(yàn)（HA）進(jìn)行流感病毒初篩，效價≥116為血凝試驗(yàn)陽性；血凝試驗(yàn)陽性的細(xì)胞培養(yǎng)物繼續(xù)做血凝抑制試驗(yàn)HI，鑒定流感病毒的亞型；3提取1725例標(biāo)本的流感病毒RNA，通過實(shí)時熒光RTPCR技術(shù)，進(jìn)行甲型流感病毒的通用型、季節(jié)性H1型、季節(jié)性H3型、甲型新型流感病毒H1型、乙型流感病毒通用型五種基因的檢測；4將全部標(biāo)本的流感病毒MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)物鑒定結(jié)果按照標(biāo)本來源醫(yī)院、分離病毒所用MDCK細(xì)胞的代次、標(biāo)本分離接種的時間（24H內(nèi)與24H外），分成三組；將全部標(biāo)本的實(shí)時熒光RTPCR檢測結(jié)果按照患者性別、年齡以及發(fā)病季節(jié)，分成三組；用EXCEL2007軟件建立數(shù)據(jù)庫，用卡方Χ2檢驗(yàn)對上述六組檢測結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，分析不同組別間流感病毒陽性率差異的影響因素，同時比較MDCK細(xì)胞流感病毒分離培養(yǎng)技術(shù)與實(shí)時熒光RTPCR檢測技術(shù)在流感病毒檢測結(jié)果上的差異。結(jié)果1貴陽市流感哨點(diǎn)醫(yī)院采集的1725例流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本中，貴陽市第一人民醫(yī)院為875例，清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院為850例；2在1725例標(biāo)本的MDCK細(xì)胞培養(yǎng)物中，HA陽性者42例，陽性率243；HA陽性細(xì)胞培養(yǎng)物的HI結(jié)果顯示，甲型流感病毒通用型32例，陽性率186，包含季節(jié)性甲型流感病毒H3型7例，陽性率為041，甲型新型流感病毒H1型25例，陽性率為145，季節(jié)性甲型流感病毒H1型0例，乙型流感病毒通用型10例，陽性率為058；31725例標(biāo)本實(shí)時熒光RTPCR檢測結(jié)果顯示，流感病毒陽性167例，陽性率為968，其中甲型流感病毒通用型陽性128例，陽性率為742，包含季節(jié)性甲型流感病毒H3型29例，陽性率為168，甲型新型流感病毒H1型99例，陽性率為574，季節(jié)性甲型流感病毒H1型0例，乙型流感病毒通用型39例，陽性率為226；4流感病毒MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定結(jié)果的卡方（Χ2）檢驗(yàn)顯示貴陽市第一人民醫(yī)院和清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院采集標(biāo)本的流感病毒分離陽性率差別無統(tǒng)計學(xué)意義；病毒分離所用不同代次的細(xì)胞間流感病毒分離陽性率的差別無統(tǒng)計學(xué)意義；標(biāo)本在采集24H內(nèi)分離的流感病毒分離陽性率明顯高于采集24H后分離的流感病毒分離陽性率。流感病毒實(shí)時熒光RTPCR檢測結(jié)果卡方（Χ2）檢驗(yàn)顯示男、女性流感病毒陽性率差別無統(tǒng)計學(xué)意義；015歲年齡組、6075歲以上年齡組與1525歲年齡組、2560歲年齡組流感病毒陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義，015歲年齡組、6075歲年齡組流感病毒陽性率明顯高于1525歲年齡組、2560歲年齡組；13月份、1012月份與46月份、79月份流感病毒陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義，13月份、1012月份流感病毒陽性率明顯高于46月份、79月份；5MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)流感病毒陽性率和實(shí)時熒光RTPCR技術(shù)檢測流感病毒陽性率的符合率為100，卡方（Χ2）檢驗(yàn)比較兩種方法的流感病毒檢測陽性率，具有顯著差異。結(jié)論1MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定方法與實(shí)時熒光RTPCR技術(shù)檢測結(jié)果顯示2013年度貴陽市流感病毒以季節(jié)性甲型流感病毒H3型、甲型新型流感病毒H1型、乙型流感病毒通用型為主，未發(fā)現(xiàn)季節(jié)性甲型流感病毒H1型；2流感病毒分離陽性率與MDCK細(xì)胞的代次沒有明顯關(guān)聯(lián)；流感病毒的分離時效性可影響分離陽性率，標(biāo)本采集后的24H內(nèi)分離培養(yǎng)陽性率明顯高于24H后分離培養(yǎng)陽性率；3冬春季為貴陽市2013年度流感病毒流行期，流感主要累及少年兒童和老年人，男女間無差異；4實(shí)時熒光RTPCR技術(shù)直接檢測標(biāo)本內(nèi)流感病毒的陽性率高于HI檢測細(xì)胞培養(yǎng)物內(nèi)流感病毒的有效率，實(shí)時熒光RTPCR技術(shù)對于流感病毒的檢測與鑒定具有更高的靈敏度。

簡介：研究背景高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（HIGHLYACTIVEANTIRETROVIRALTHERAPY，HAART）被認(rèn)為是現(xiàn)今治療HIVAIDS行之有效的方法。奈韋拉平NEVIRAPINE，NVP是非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的一種，目前我國使用HAART方案治療的患者中大部分仍以NVP作為初始治療的首選藥物。因此，優(yōu)化NVP臨床用藥方案，觀察NVP血藥濃度與病毒學(xué)應(yīng)答的關(guān)系，探討NVP藥物相關(guān)肝毒性和皮疹發(fā)生的影響因素及發(fā)生機(jī)制等具有重要的臨床意義和價值。洛匹那韋LOPINAVIR，LPV和利托那韋RITONAVIR，RTV均是蛋白酶抑制劑，替諾福韋TENOFOVIR，TNF是核苷酸類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的一種，目前在我國主要應(yīng)用于初治治療失敗的HIVAIDS患者，研究這兩種藥物在中國HIVAIDS患者體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征對促進(jìn)其臨床安全有效應(yīng)用具有重要價值。研究目的探討NVP在中國HIVAIDS人群中的臨床藥效學(xué)和藥動學(xué)特點(diǎn)；建立高效液相色譜法測定人血漿中TNF濃度，觀察TNF在中國HIVAIDS人群中臨床藥代動力學(xué)特征；建立高效液相色譜法同時測定人血漿中LPV和RTV濃度，觀察LPV在中國HIVAIDS人群中的臨床藥動學(xué)特征。研究對象與方法篩選2005～2011年期間接受包含NVP治療方案、規(guī)律隨診、自愿簽署知情同意書的828例HIVAIDS患者，于服藥前或服藥后2～4小時采集靜脈血2ML并分離血漿，應(yīng)用高效液相色譜紫外檢測法HPLCUV測定人血漿中藥物濃度，并詳細(xì)記錄治療前及每次隨診時患者的一般情況、血尿常規(guī)、肝腎功能、淋巴細(xì)胞亞群計數(shù)及病毒載量等結(jié)果，進(jìn)行NVP相關(guān)臨床藥動學(xué)和藥效學(xué)分析。招募接受包含TNF和／或LPV抗病毒治療方案的16位患者住院治療，于服藥前以及服藥后05，1，15，2，2534，6，8，10，12，16，24小時，采集靜脈血并分離凍存血漿，應(yīng)用本研究建立的HPLCUV法分別測定人血漿中TNF和LPV藥物濃度，采用WINONLIN軟件計算TNF和LPV臨床藥動學(xué)參數(shù)。研究結(jié)果導(dǎo)入期末NVP血漿谷濃度（CTROUGH）為426ΜGMLIQR305561，峰濃度CMAX為507ΜGMLIQR392644，均已達(dá)到國際公認(rèn)有效治療濃度下限30ΜGML，但是顯著低于穩(wěn)態(tài)NVPCTROUGH（615ΜGML，IQR463820，P0000）和NVPCMAX（651ΜGML，IQR522841，P0000）。分層分析發(fā)現(xiàn)，基線ALT≥15ULN患者的導(dǎo)入期末NVPCTROUGH顯著高于ALT＜15ULN患者（486VS425ΜGML，P0045）；隨著用藥時間的延長，HIV合并HCV感染患者NVPCTROUGH逐漸升高，至隨訪第48周CTROUGH顯著高于未合并HCV感染患者816VS615ΜGML，P0004。發(fā)生病毒學(xué)失敗VIRALOGOCALFAILURE，VF的患者NVPCTROUGH均值顯著低于完全病毒學(xué)抑制和部分病毒學(xué)抑制患者組323ΜGMLVS673和660ΜGML，P0000。當(dāng)NVPCTROUGH＜39ΜGML時，發(fā)生VF的風(fēng)險是NVPCTROUGH≥39ΜGML患者的615倍，預(yù)測VF發(fā)生的靈敏度和特異度分別為879％和90。單因素分析提示合并HCV感染、ALT和AST≥125ULN、CD4計數(shù)≥250MM3與肝損發(fā)生相關(guān)，女性、體重＜55KG與CD4計數(shù)≥250MM3與重度肝損發(fā)生相關(guān)，進(jìn)一步分層分析發(fā)現(xiàn)男性合并HCV感染會增加肝損發(fā)生風(fēng)險，女性合并HCV感染則未觀察到這一現(xiàn)象；多因素LOGISTIC回歸分析發(fā)現(xiàn)ALT和AST水平升高以及高CD4計數(shù)與肝損發(fā)生密切相關(guān)，低體重和高CD4計數(shù)與重度肝損發(fā)生密切相關(guān)。男性患者肝損當(dāng)次NVPCTROUGH≥10ΜGML時發(fā)生重度肝損的比例是NVPCTROUGH＜10ΜGML患者的377倍，女性患者則未觀察到這一現(xiàn)象。當(dāng)肝損前次NVPCTROUGH≥5ΜGML時，發(fā)生肝損的風(fēng)險是NVPCTROUGH＜5ΜGML患者的236倍，預(yù)測肝損發(fā)生的靈敏度和特異度分別為6L9和593。當(dāng)導(dǎo)入期NVPCTROUG≥6ΜGML時，發(fā)生肝損的風(fēng)險是NVPCTROUGH＜6ΜGML患者的221倍，預(yù)測肝損發(fā)生的靈敏度和特異度分別為600和595。女性NVP相關(guān)皮疹發(fā)生風(fēng)險是男性患者的173倍，合并HBVHCV感染或高CD4計數(shù)不會增加服藥患者皮疹發(fā)生風(fēng)險；皮疹患者皮疹發(fā)生前次、當(dāng)次和后次MIG、IP10和IFNΓ因子水平均顯著高于正常健康人群，皮疹患者其當(dāng)次MIG和IP10因子水平均顯著高于皮疹發(fā)生前次和后次。建立同時測定人血漿中LPV和RTV濃度的高效液相色譜方法，LPV在05～20ΜGML范圍內(nèi)，RTV在005～5ΜGML范圍內(nèi)線性良好（R09995和09997）；建立測定人血漿中TNF濃度的高效液相色譜方法，TNF在20～2000NGML范圍內(nèi)線性良好R09997。兩種高效液相色譜檢測方法靈敏度高，操作簡便，精密度、準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性結(jié)果考察良好。WINNONLIN軟件計算顯示，替諾福韋符合二室模型，計算的藥動參數(shù)分別為TMAX（120±047H）、CMAX36151±21904NGML、AUC407750±155488NGHML、T122953±1412H和CLF8089±2149LH統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)未合并LPV的患者其TNF血漿T12顯著大于合并LPV的患者（3804VS2209H，P0023）。TNF的非房室模型藥動參數(shù)分別為T122184±764H、TMAX133±045H、CMAX44709±21739NGML、CTROUGH9866±3666NGM、AUC（40747±155186NGHML）和CLF4577±1305LH。LPV在中國服藥人群具有達(dá)峰時間晚、個體差異大等特點(diǎn)結(jié)論NVP200MG一天一次的給藥方式在中國HIVAIDS人群中可能具有可行性；基線肝臟功能異常和合并HCV感染會對NVP藥物代謝產(chǎn)生影響，臨床應(yīng)予以重視；NVPCTROUGH降低與病毒學(xué)失敗的發(fā)生相關(guān)，與國際通用的NVPCTRUGH30ΜGML閾值相比，在中國人群中以39ΜGML作為預(yù)測病毒學(xué)失敗發(fā)生的治療濃度閾值具有較高靈敏度；NVPCTROUGH升高與肝毒性發(fā)生相關(guān)特別是在男性患者中，肝損前次NVPCTROUG≥5ΜGML及導(dǎo)入期NVPCTROUGH≥6ΜGML預(yù)測肝損發(fā)生有一定的臨床意義；女性患者易出現(xiàn)NVP相關(guān)皮疹，IP10和MIG等炎癥性趨化因子可能通過介導(dǎo)TH1型免疫應(yīng)答反應(yīng)促進(jìn)組織損傷從而參與了NVP相關(guān)皮疹的發(fā)生發(fā)展；中國HIVAIDS患者服用TNF的穩(wěn)態(tài)血漿T12、CMAX、CTROUGH及AUC均顯著高于國外研究水平，TMAX與國外研究報道類似，合并LPV用藥可能會對TNF的藥物消除產(chǎn)生影響，臨床應(yīng)予以重視；LPV在中國服藥人群具有達(dá)峰時間晚、個體差異大等特點(diǎn)。

簡介：目的本研究對河北省20022004年兩個流行期的流感進(jìn)行了流行病學(xué)監(jiān)測分析和分子流行病學(xué)研究結(jié)論120022003年和20032004年2個流行期監(jiān)測表明經(jīng)Χ分割法兩兩比較監(jiān)測門診的流感樣病例百分率1月份與各月份間存在顯著性差異1月份最高而且兒童15歲以下和成人15歲以上的流感樣病例百分率也存在顯著性差異兒童較高220022003年流行期分離出甲3亞型O相毒株和乙型毒株20032004年流行期分離出甲3亞型O毒株320022004年兩個流行期分離的H3N2流感病毒能用MDCK細(xì)胞分離出能凝集豚鼠紅細(xì)胞而不凝集雞紅細(xì)胞即為O相毒株4RTPCR對血凝素HA1基因分型分析表明20032004年流行期分離病毒株為甲3亞型由此能夠推出RTPCR可作為O相毒株鑒定分型的一種方法5對4株20032004年流行期流感毒株HA1基因核苷酸序列分析表明這4株毒株與20022003年國內(nèi)外分離到的甲3亞型毒株同源性接近由此可以推出20022004年河北省甲3亞型流感病毒活動增強(qiáng)并成為優(yōu)勢株是由于HA1基因發(fā)生突變所造成6基因進(jìn)化分析表明4株20032004年流行期流感毒株與AJOHANNESBUR6403屬同一種系

簡介：研究背景腹瀉病是世界范圍內(nèi)尤其是發(fā)展中國家兒童發(fā)病和死亡的主要原因。每年全球約有150200萬兒童死于與腹瀉相關(guān)的疾病或是并發(fā)癥。輪狀病毒、杯狀病毒、腺病毒和星狀病毒被認(rèn)為是引起腹瀉的主要病原，輪狀病毒是世界范圍內(nèi)引起兒童重癥腹瀉的最常見病原，全球每年約4460萬兒童因輪狀病毒腹瀉而死亡，疫苗是唯一可行的預(yù)防和控制輪狀病毒較高發(fā)病率和死亡率的方法，不同地區(qū)不同年份優(yōu)勢流行株有較大變異，有必要進(jìn)行長期而系統(tǒng)的監(jiān)測，為有效的疫苗研制和應(yīng)用提供依據(jù)。目的了解蘭州地區(qū)主要的四種腹瀉病毒的流行病學(xué)特點(diǎn)，為病毒性腹瀉的防治提供依據(jù)。方法收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科2005年7月至2006年6月5歲以下住院腹瀉患兒257例的糞便標(biāo)本，采用DAKO公司酶免疫試劑盒檢測輪狀病毒，對輪狀病毒酶免疫法ELISA陽性標(biāo)本，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶聯(lián)反應(yīng)RTPCR進(jìn)行毒株分型鑒定；杯狀病毒、腺病毒和星狀病毒采用多重RTPCR或PCR進(jìn)行檢測，對PCR陽性標(biāo)本克隆和測序進(jìn)行型別鑒定。結(jié)果257份標(biāo)本中共檢出18972％例至少有一種病毒感染。四種病毒檢測陽性率依次為輪狀病毒607％156257，腺病毒54％14257、杯狀病毒51％13257、星狀病毒51％13257。其中混合感染的病例數(shù)占35％9257。輪狀病毒毒株G血清型分型結(jié)果為G1型615％、G3型250％、G2型32％、G9型27％，不同G型混合感染32％，未能分型45％P基因型分型結(jié)果為P8756％、P438％、P4P8混合感染一份064％，未能分型31份199％。G血清型和P基因型組合P8G1650％，P8G3260％，P4G224％，P4G116％。杯狀病毒分型結(jié)果顯示93％屬于諾如病毒GⅡ組，扎如病毒1例。14例腺病毒AD感染分屬于腺病毒A、C、F三個亞屬，血清型分別是AD12、AD18、AD2、AD6、AD40、AD41。13例星狀病毒感染血清型均為1型。病毒性腹瀉的高發(fā)季節(jié)輪狀病毒最為明顯為912月份。發(fā)病年齡主要為2歲以下嬰幼兒，輪狀病毒的高發(fā)年齡是623月。杯狀病毒、腺病毒和星狀病毒感染未表現(xiàn)出明顯的季節(jié)性。結(jié)論病毒因子是蘭州地區(qū)嬰幼兒腹瀉的主要病原。輪狀病毒是蘭州地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的最主要病原，杯狀病毒、腺病毒和星狀病毒也是本地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的重要病原。本年度輪狀病毒的主要流行株為G1P8，與往年明顯不同。

簡介：點(diǎn)擊查看更多漢灘病毒核蛋白及其片段的表達(dá)、純化和免疫學(xué)特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：乙腦病毒減毒活疫苗SA142株已在中國成功使用多年大大降低了乙腦的發(fā)病率目前已被WHO推薦推廣使用該研究對疫苗株、減毒中間株進(jìn)行全序列測定探索疫苗減毒的分子基礎(chǔ)并對乙腦病毒感染性克隆的構(gòu)建方法進(jìn)行了研究不僅有利于闡明病毒的致病性、減毒及穩(wěn)定性機(jī)理也將為促進(jìn)該疫苗走向世界有所貢獻(xiàn)乙型腦炎病毒的研究主要完成以下工作1對乙腦病毒活疫苗生產(chǎn)株SA142株的全序列進(jìn)行了分段克隆和測序與已發(fā)表序列對比基本一致也略有差異提出了可通過監(jiān)控幾個位點(diǎn)對疫苗生產(chǎn)質(zhì)量進(jìn)行控制2首次對乙腦病毒減毒中間株SA1217的全序列進(jìn)行了克隆和測序并與疫苗株、野毒株序列進(jìn)行比較推測決定病毒減毒及穩(wěn)定性的位點(diǎn)為闡明病毒致病機(jī)理奠定了基礎(chǔ)3在全序列測定基礎(chǔ)上將疫苗株各段通過酶切、體外連接成全長基因組CDNA并體外轉(zhuǎn)錄成RNA后轉(zhuǎn)染細(xì)胞獲得感染性克隆目前已觀察到細(xì)胞病變對細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行的RTPCR鑒定表明病毒具有設(shè)立的標(biāo)記確為重組病毒進(jìn)一步的鑒定仍在進(jìn)行中此外對瘧疾感染引起瘧原蟲特異性CD4T細(xì)胞的缺失機(jī)制及其重要性進(jìn)行了研究

簡介：原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中己經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名單塹止日期砂華沙、，‘關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名導(dǎo)師簽名工嘎級日期WQS山東大學(xué)博士論文兒于出生時留取臍血檢測HBVDNA。入選研究的孕婦，均符合2000年全國肝炎會議擬定的無癥狀乙肝病毒攜帶者診斷標(biāo)準(zhǔn)。早產(chǎn)兒、低體重兒、窒息兒及有妊娠期出血史產(chǎn)婦所分娩的新生兒排除本研究。孕婦外周血和新生兒臍血血清中HBVDNA均陽性者作為研究組，孕婦外周血HBVDNA陽性但新生兒臍血血清中HBVDNA陰性者作為對照組，用PCR微板核酸雜交一ELISA法行HBV基因分型。所有新生兒于出生后12小時內(nèi)及第14天各注射乙肝免疫球蛋白HBIG200U，出生24小時內(nèi)、1月及6月齡共接種3次乙肝疫苗，對新生兒及嬰兒進(jìn)行前瞻性隨訪研究，由產(chǎn)婦自愿選擇母乳喂養(yǎng)或人工喂養(yǎng)，分別于嬰兒7月及12個月時隨訪，檢測嬰兒外周靜脈血HBVDNA及乙肝血清標(biāo)志物，同時詢問嬰兒喂養(yǎng)方法，母乳喂養(yǎng)1個月以上者為母乳喂養(yǎng)組，從未行母乳喂養(yǎng)的為人工喂養(yǎng)組，母乳喂養(yǎng)少于1月者排除本研究。嬰兒7月時未感染乙肝但抗一HBS陰性者給予乙肝疫苗5119加強(qiáng)注射。結(jié)果1乙肝血清學(xué)標(biāo)志物HBSAGHBEAG及抗一HB。均陽性孕婦血清中HBVDNA均陽性，陽性率為1004949HBSAG與HBEAG陽性者HBVDNA陽性率亦為100A1616HBSAG及抗一HBC陽性者，HBVDNA陽性率為54171324HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者HBVDNA陽性率較低，僅為4173N2。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例HBVDNA陽性。2HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率最高，為1837949HBSAG與HBEAG陽性及HBSAG與抗一HBC陽性者次之，分別為1250216及12503124HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者為133175。單純HBSAG陽性和HBSAG及抗一HBE陽性孕婦無1例新生兒臍血陽性。HBSAGHBEAG及抗一HBC均陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性者有統(tǒng)計學(xué)意義Z29415P0002HBSAG與抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率與HBSAG、抗一HBE及抗一HBC陽性孕婦所生的新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學(xué)意義P0043其余各組對比無統(tǒng)計學(xué)意義。315例臍血HBVDNA陽性的新生兒11例發(fā)生于HBEAG陽性的孕婦，陽性率為16921165，僅4例發(fā)生于HBEAG陰性的孕婦，陽性率為377O3774106HBEAG陽性與HBEAG陰性孕婦所生新生兒臍血HBVDNA陽性率有統(tǒng)計學(xué)意義X28706P0003。

簡介：研究目的1估計云南省個舊市暗娼及礦工的HIVSTIS感染率；2分析該地暗娼及礦工HIVSTIS的可能危險因素；3評價該地暗娼及礦工HIV相關(guān)知識、態(tài)度和行為；4描述該地暗娼及礦工的流動情況。研究方法2005年12月～2006年1月，在云南省個舊市，分別以普查方式和方便抽樣的方法，招募并調(diào)查了暗娼239人、礦工526人。對所有研究對象進(jìn)行一對一面對面訪談方式進(jìn)行匿名問卷調(diào)查，同時采集血標(biāo)本檢測HLVELISA法初篩，蛋白印跡法確認(rèn)、梅毒螺旋體RPR法初篩、TPPA法確認(rèn)、HSV2ELESA法，采集女性宮頸分泌物標(biāo)本和男性尿標(biāo)本檢測淋病奈瑟菌和衣原體復(fù)合PCR法、采集女性陰道分泌物標(biāo)本檢測滴蟲濕片法鏡檢，對所有研究對象的尿液標(biāo)本進(jìn)行嗎啡檢測ACONMOP試紙法。研究結(jié)果1、暗娼人群1暗娼HIV感染率為186﹪，其中，吸毒暗娼感染率554﹪，非吸毒暗娼感染率為18﹪。多因素LOGISTIC回歸分析發(fā)現(xiàn)，吸毒3994、經(jīng)常變換工作場所619是當(dāng)?shù)匕垫礁腥綡IV的主要的危險因素；隨著當(dāng)?shù)匕垫侥挲g的增加，HIV感染人數(shù)呈上升趨勢117。25種SFIS的總感染率為749﹪。其中梅毒、單純皰疹病毒2型HSV2、淋病奈瑟菌、沙眼衣原體、滴蟲感染率分別為38﹪，646﹪，44﹪，153﹪，48﹪。HIV473感染和安全套使用046是影響STIS的因素。3294﹪感染2種或2種以上病原體。4272﹪的暗娼自我報告使用過毒品，其中908﹪注射過毒品。暗娼與非付費(fèi)性伴和付費(fèi)性伴不持續(xù)使用安全套的比例分別為7616﹪和3277﹪X1363955，DF4，P289275，DF3，P00001。6通過暗娼收集到114﹪的付費(fèi)性伴是礦工。2、礦工人群1礦工HIV感染率為06﹪。4種STIS的總感染率為183﹪，其中，HSV2、梅毒、淋病奈瑟菌、沙眼衣原體的感染率分別為1329﹪、14﹪、02﹪和516﹪。198﹪的礦工合并感染2種或2種以上HIVSTIS。多因素分析發(fā)現(xiàn)多性伴196和吸毒378是HIVSTIIS感染的危險因素。2有過性行為的對象中，586﹪與2個及2個以上的人發(fā)生過性關(guān)系，161﹪有過商業(yè)性行為，849﹪最近1年從不使用安全套。在商業(yè)性行為中，643﹪在嫖娼時從不使用安全套。527﹪在個舊市區(qū)找暗娼。295﹪的礦工與他人共用過剃須刀。HIV三種傳播途徑的正確回答率為6005﹪，所有艾滋病相關(guān)問題正確回答率為335﹪。39734﹪的礦工是離家外出打工者，其中4238﹪換過工作城市。結(jié)論目前云南省個舊市暗娼人群中HIVSTIS流行形勢嚴(yán)重，合并感染率高，給當(dāng)?shù)豀IVSTIS的控制帶來嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。本研究發(fā)現(xiàn)該地暗娼HIV感染的主要因素是吸毒和場所之間流動。無保護(hù)性行為和流動是HLVSTIS向其性伴傳播的因素，尤其是同定性伴。急需對暗娼人群進(jìn)行合理的教育和干預(yù)，防止HIVSTIS繼續(xù)傳播蔓延。HIV在當(dāng)?shù)氐V工中總體上呈低流行，但引起礦工HLV感染的因素廣泛存在。本研究發(fā)現(xiàn)多性伴和吸毒是該地礦工HIVSTIS感染的主要影響因素，少數(shù)民族礦工HIVSFIS感染率高于漢族礦工。因此，對礦工人群有針對性的宣傳教育和行為干預(yù)迫在眉睫。通過暗娼了解其付費(fèi)性伴，可以發(fā)現(xiàn)艾滋病控制的重點(diǎn)人群。

簡介：目的和意義本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，從理論淵源，臨床試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)研究三個方面探討青銀注射液治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱證的理論依據(jù)、臨床療效、安全性，從而進(jìn)一步探尋中醫(yī)藥治療該疾病的新法、新藥，更好地發(fā)揮中醫(yī)藥優(yōu)勢，為人類健康服務(wù)。理論探討部分首先論述了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對急性上呼吸道感染的認(rèn)識；分析并指出急性上呼吸道感染外感風(fēng)熱證當(dāng)屬現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)“外感熱病”范疇，提出了“風(fēng)熱毒邪”是其主要致病因素，溫邪外襲、毒隨邪入、熱由毒生、肺衛(wèi)失和是本病的主要病機(jī)，論述了“疏風(fēng)透邪、清熱解毒”是治療本病的主要治法；介紹了清開靈注射液是符合該治法的公認(rèn)有效的、安全的藥物，闡述了青銀注射液的組方特點(diǎn)、單藥性味、現(xiàn)代研究和臨床運(yùn)用，認(rèn)為青銀注射液組方具有“寓疏于清、寓透于清”的特點(diǎn)。臨床研究部分目的意義通過觀察治療前后癥狀體征的變化情況，評價具有疏表透邪、清熱解毒作用的青銀注射液通過靜滴給藥治療上呼吸道感染風(fēng)熱證的臨床療效。通過觀察三大常規(guī)、心電圖、肝、腎功能及出現(xiàn)的不良事件，對其安全性做出評價。研究方法以清開靈注射液作為陽性對照藥，采用隨機(jī)、多中心，雙盲、陽性藥平行組對照設(shè)計。按II期臨床試驗(yàn)11對照原則，考慮不超過20％的退出率，總的例數(shù)確定為120對共240例，分為試驗(yàn)組和對照組；試驗(yàn)組青銀注射液30ML加入5％GS250ML中靜滴，再予5％GNS250ML靜滴，15～2H輸注完成，一日1次，對照組清開靈注射液30ML加入5％GS250ML中靜滴，再予5％GNS250ML靜滴，15～2H輸注完成，一日1次。連續(xù)兩天的給藥間隔時間至少12小時。連續(xù)用藥3天為一個療程觀察兩組療效指標(biāo)、安全性指標(biāo)，定性指標(biāo)以頻數(shù)表，百分率或構(gòu)成比描述；定量指標(biāo)以均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差，或中位數(shù)描述，兩組對比分析，定性資料采用卡方檢驗(yàn)，F(xiàn)ISHER精確概率法，WILCOXON秩和檢驗(yàn)，CMHX2檢驗(yàn)。定量資料符合正態(tài)分布用T檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布用WILCOXON秩和檢驗(yàn)假設(shè)檢驗(yàn)統(tǒng)一使用雙側(cè)檢驗(yàn)，給出檢驗(yàn)統(tǒng)計量及其對應(yīng)的P值。以P研究結(jié)果對急性上呼吸道感染外感風(fēng)熱證治療符合方案集對照組的總有效率、痊愈率、分別為8224％、4299％，試驗(yàn)組的總有效率、痊愈率分別為8649％、4865％，兩組間痊愈率、總有效率組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005，兩組綜合療效差別無統(tǒng)計學(xué)意義P03197。兩組總有效率的95％CI627，1476，對照組與試驗(yàn)組的非劣性檢驗(yàn)有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為656；試驗(yàn)組與對照組的非劣性檢驗(yàn)有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為193全分析集兩組綜合療效組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P01641，對照組總有效率、痊愈率分別為7982％、4123％，試驗(yàn)組總有效率、痊愈率分別為8729％、4746％，兩組間痊愈率、總有效率組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005兩組總有效率的95％CI299，1792。對照組與試驗(yàn)組的非劣性檢驗(yàn)有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為965；試驗(yàn)組與對照組的非劣性檢驗(yàn)有統(tǒng)計學(xué)意義，95％CI的CL為528符合方案集為排除中心差異，以中心分層兩組綜合療效總有效率的差別無統(tǒng)計學(xué)意義，中心間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。兩組首診輸液前后體溫、體溫變化的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P005，值得關(guān)注的是具有即刻退熱療效試驗(yàn)組為3153％雖高于對照組2804％，但組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P05729，首診輸液結(jié)束時發(fā)熱消失率試驗(yàn)組為27％、對照組為374％，兩組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義兩組首診當(dāng)天各記錄時點(diǎn)體溫的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。體溫恢復(fù)正常時間試驗(yàn)組為2676±1686小時、對照組為2738±1734小時，組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義P07489兩組終點(diǎn)記分與基線比較的差別均有高度統(tǒng)計學(xué)意義。治療后第2天、第3天各記錄時點(diǎn)體溫及發(fā)熱消失率的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。發(fā)熱基線記分的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義，兩組之間具有可比性。治療第2天、第3天、第4天就診記分及記分下降值的組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義。兩組終點(diǎn)記分與基線比較的差別均有高度統(tǒng)計學(xué)意義?？梢妰山M都不具備較好的即刻退熱作用在改善四肢酸痛癥狀以及第四天頭痛、咽痛和四肢酸痛消失率方面試驗(yàn)組優(yōu)于對照組P005；試驗(yàn)組對血紅蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、尿常規(guī)轉(zhuǎn)異常率高于對照組，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理無顯著性差異P005；兩組血清肌酐療后轉(zhuǎn)異常率為0，PT、APTT兩組治療后無一例異常。兩組無一例嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。治療組所有患者療后心電圖報告轉(zhuǎn)異常率為0從本研究可見青銀注射液安全性良好。實(shí)驗(yàn)研究部分對感染了流感病毒FM1株的小鼠進(jìn)行青銀注射液體內(nèi)藥效試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示3045GKGD的青銀注射液對小鼠流感病毒性肺炎有治療作用，其抑制率達(dá)41484703％，其結(jié)果與病毒對照組或溶劑對照組相比，有高度顯著性差異P結(jié)論1“疏風(fēng)透邪，清熱解毒”法是治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱癥的主要治法。2青銀注射液具有疏風(fēng)透邪，清熱解毒的作用。3每日單次30M1劑量靜脈滴注青銀注射液治療急性上呼吸道感染風(fēng)熱證是安全有效的。與青開靈注射液相比綜合療效、總有效率、痊愈率無統(tǒng)計學(xué)意義P005，青銀注射液在改善咽痛、四肢酸痛、頭痛方面優(yōu)于清開靈注射液組P43045GKGD的青銀注射液對小鼠流感病毒性肺炎有治療作用，對流感病毒有抑制作用。5青銀注射液具有抗病毒、抗菌、退熱、抗炎、抗內(nèi)毒素及調(diào)節(jié)免疫的作用。

簡介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼L∞23學(xué)號S2008240無菌大鼠的人工培育及生物學(xué)特性的測定仙臺病毒膠體金免疫層析方法的建立所院中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所姓名仉慧敏指導(dǎo)教師劉云波教授導(dǎo)師小組劉云波教授宋銘晶教授魏強(qiáng)教授學(xué)科專業(yè)動物學(xué)研究方向?qū)嶒?yàn)動物學(xué)完成日期二零一一年五月目錄中文摘要2ABSTRACT3第一部分無菌大鼠的人工培育及生物學(xué)特性的測定4弓I言4實(shí)驗(yàn)材料6實(shí)驗(yàn)方法10實(shí)驗(yàn)結(jié)果2L討論36第二部分仙臺病毒膠體金免疫層析方法的建立4L引言41實(shí)驗(yàn)材料43實(shí)驗(yàn)方法44實(shí)驗(yàn)結(jié)果48討論52參考文獻(xiàn)54P付錄59致謝61獨(dú)創(chuàng)性聲明62學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書62

簡介：目的研究單純皰疹病毒性腦炎HSE小鼠在發(fā)病及治療過程中腦組織白細(xì)胞介素2IL2和白細(xì)胞介素10IL10的表達(dá)情況并探討其相關(guān)的免疫學(xué)機(jī)制。方法將40只昆明小鼠隨機(jī)分為4組正常對照組病毒感染組阿昔洛韋組和地塞米松組。后3組顱內(nèi)注射HSV1制造HSE模型空白對照組僅注射無病毒的維持液。顱內(nèi)注射后第1天阿昔洛韋組和地塞米松組給予阿昔洛韋灌胃第3天地塞米松組給予地塞米松腹腔注射余均給予生理鹽水做對照。密切觀察小鼠神經(jīng)損傷表現(xiàn)在處死前行神經(jīng)癥狀評分和體重測量并比較。取標(biāo)本后通過免疫組化測定小鼠腦組織IL2IL10的表達(dá)。制作病理切片以HE染色法比較不同干預(yù)組小鼠腦組織病變情況。將另外40只小鼠隨機(jī)分為4組正常對照組病毒感染組阿昔洛韋組和地塞米松組各組干預(yù)同前。詳細(xì)記錄小鼠死亡時間和死亡數(shù)量直到不再有小鼠死亡應(yīng)用KAPLANMEIER法對各組小鼠生存率進(jìn)行比較。應(yīng)用PEARSON相關(guān)分析探討神經(jīng)癥狀評分、IL2和IL10之間的相關(guān)性。結(jié)果小鼠顱內(nèi)感染病毒后IL2、IL10的表達(dá)明顯增加P＜005應(yīng)用阿昔洛韋后IL2IL10的表達(dá)下降P＜005阿昔洛韋和地塞米松聯(lián)合應(yīng)用IL2IL10的表達(dá)下降明顯P＜005。病毒感染組神經(jīng)癥狀評分最高體重增長最低阿昔洛韋組次之地塞米松組神經(jīng)癥狀評分最低體重增長最高P＜005。顱內(nèi)感染病毒14天后病毒感染組小鼠全部死亡與之相比阿昔洛韋組生存率提高地塞米松組生存率最高三者有顯著差異P＜005。相關(guān)性分析顯示神經(jīng)癥狀評分越高IL2和IL10的表達(dá)越高即神經(jīng)癥狀評分與IL2表達(dá)呈正相關(guān)R070P＜005與IL10表達(dá)亦呈正相關(guān)R080P＜005在HSE小鼠發(fā)病及治療過程中IL2與IL10表達(dá)趨勢大致一致此二者關(guān)系為正相關(guān)R058P＜005。結(jié)論病毒進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后腦內(nèi)即出現(xiàn)免疫應(yīng)答反應(yīng)IL2和IL10增高免疫增強(qiáng)與免疫抑制并存同時伴有神經(jīng)損傷的臨床表現(xiàn)。臨床癥狀越重死亡率越高后遺癥越多?？共《舅幬锏膽?yīng)用降低了病毒負(fù)荷量IL2和IL10的產(chǎn)生減少免疫反應(yīng)減輕臨床癥狀也減輕生存率提高死亡率下降?？共《舅幬锫?lián)合糖皮質(zhì)激素治療免疫反應(yīng)的強(qiáng)度進(jìn)一步減輕機(jī)體的臨床癥狀減輕生存率提高更顯著。故在治療HSE時除應(yīng)用抗病毒藥物外加用糖皮質(zhì)激素等免疫抑制劑可減輕腦內(nèi)的免疫應(yīng)答反應(yīng)從而減輕臨床癥狀提高生存率降低死亡率減輕后遺癥的發(fā)生。

簡介：實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馓m州地區(qū)急性呼吸道感染ARTIS患兒中呼吸道病原譜的分布現(xiàn)狀，為本地區(qū)兒童急性呼吸道感染的防治提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。明確新發(fā)現(xiàn)病毒人博卡2病毒在呼吸道中的致病性。對象及方法1收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科2008年11月到2009年10月因急性呼吸道感染就診患兒的鼻咽抽吸物NASOPHARYNGEAASPIRATES，NPAS和門診患兒的咽拭子THROATSWABS及正常體檢兒童的呼吸道分泌物標(biāo)本。2分別采用聚合酶鏈反應(yīng)PCR檢測呼吸道合胞病毒RSV、流感病毒IFVA、B型、和副流感病毒PIV13型、鼻病毒HRV、人偏肺病毒HMPV、冠狀病毒NL63HCOVNL63、冠狀病毒HKU1HCOVHKU1、冠狀病毒229EHCOV229E、冠狀病毒OC43HCOVOC43、多瘤病毒W(wǎng)UWUPYV和多瘤病毒KIKIPYV14種常見及新發(fā)現(xiàn)呼吸道感染相關(guān)的病毒。結(jié)合詳細(xì)的臨床資料，做出臨床流行病學(xué)分析。3建立博卡病毒的病例對照研究采用巢式PCRNESTPCR方法檢測急性呼吸道感染患兒和正常兒童呼吸道標(biāo)本中的HBOV1和HBOV2基因，并對擴(kuò)增產(chǎn)物測序及進(jìn)行BLAST基因序列比對。討論其在呼吸道中的致病性。結(jié)果1在收集的510份呼吸道標(biāo)本中，共檢出病毒感染陽性病例382例檢出率749％。其中RSV陽性擴(kuò)增產(chǎn)物160份，檢出率為314％；IFVA陽性擴(kuò)增產(chǎn)物53份，檢出率為104％；IFVB陽性擴(kuò)增產(chǎn)物25份，檢出率為49％；PIV3陽性擴(kuò)增產(chǎn)物83份，檢出率為161％；HRV陽性擴(kuò)增產(chǎn)物48份，檢出率為94％；HMPV陽性擴(kuò)增產(chǎn)物16份，檢出率為04％；HCOVNL63陽性擴(kuò)增產(chǎn)物3份，檢出率為06％；HCOVHKU1陽性擴(kuò)增產(chǎn)物2份，檢出率為04％；WUPYV陽性擴(kuò)增產(chǎn)物7份，檢出率為14％，KIPYV陽性擴(kuò)增產(chǎn)物15份，檢出率為29％，未檢出PIV12和HCOV229EOC43。314例男性患者中病毒感染216例583％，女性196例感染166例555％，男女感染率的之比為13∶1；患兒年齡最小10天，最大14歲，中位年齡28個月。其中1歲以下患兒病毒感染208例，占總病毒感染人數(shù)的545％；1～3歲患兒病毒感染84例，占22％；3～5歲患兒病毒感染54例，占141％；大于5歲患兒病毒感染36例，占94％。隨著年齡的增長，病毒陽性檢出率逐漸下降。本地區(qū)兒童病毒性急性呼吸道感染的季節(jié)分布較明顯，以冬春季節(jié)為主。510份病例組呼吸道患兒標(biāo)本檢測到7例HBOV2陽性擴(kuò)增產(chǎn)物，檢出率為14％。將陽性PCR產(chǎn)物進(jìn)行序列測定及分析，發(fā)現(xiàn)其與GENEBANK中已知標(biāo)準(zhǔn)株HUMANBOCAVIRUS2STRAINHBOV2BNI213序列的同源性在98％100％之間，提示HBOV2蘭州株的核苷酸變異較小?；純焊腥灸挲g從4個月到65個月，中位年齡85個月，除一例標(biāo)本外，其余均在2歲以下兒童。全部為男性患兒。檢出病例主要在冬春季節(jié)，12月檢出最多。該病毒混合感染率高達(dá)571％，與RSV混合感染最多。臨床診斷包括喘息性支氣管肺炎、急性支氣管肺炎、急性支氣管炎，其中喘息性支氣管肺炎最多見，為5例。HBOV2在對照兒童中檢出率為14％4290，HBOV2陽性的患兒均≤6個月，標(biāo)本分別在3月，5月，6月，8月中檢出，男女比例為3∶1。病例組中HBOV1在病例組中檢出率為143％73510，正常兒童中HBOV1的檢出率為31％9290。結(jié)論1本研究中749％的患兒病毒檢測陽性，結(jié)合本課題組20062008年的研究結(jié)果說明，病毒病原在蘭州地區(qū)兒童呼吸道感染中仍占有重要地位。在20082009年的研究中發(fā)現(xiàn)兒童病毒性呼吸道感染病原以RSV、PIV3、HRV及IFVA占主要地位，與20072008年相比IFVA及PIV3兩種呼吸道病毒在本地區(qū)的感染有所上升，跟20072008的呼吸道病毒感染譜略有差異，呼吸道病毒病原分布具有明顯的季節(jié)分布特征，以冬春季節(jié)多見。2HBOV2與疾病P＞0005FISHERSEXACTTEST無統(tǒng)計學(xué)意義。HBVO2感染與呼吸道疾病無關(guān)。HBOV1與疾病P＜0005PEARSONCHISQUARE有統(tǒng)計學(xué)意義，病例組中感染HBOV1更高。HBOV1可以引起呼吸道疾病。

簡介：碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼10023學(xué)號S2007452A組輪狀病毒VP5★和VP8★的表達(dá)及免疫學(xué)性質(zhì)研究所院姓名指導(dǎo)教師導(dǎo)師小組學(xué)科專業(yè)研究方向完成日期醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所張艷陳元鼎研究員文喻玲病原生物學(xué)分子病毒學(xué)與病毒疫苗研究2010年5月目錄摘要1ABSTRACT。前實(shí)驗(yàn)材料及方法7一、實(shí)驗(yàn)材料7二、實(shí)驗(yàn)方法9結(jié)果與分析18討小2729參考文獻(xiàn)。30論文綜述。，。。。32附錄。。?！?1一、縮略詞一4L二、主要溶液配方42致謝。研究生簡歷獨(dú)創(chuàng)性聲明63學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書63I