2013年貴陽(yáng)市流感病毒分離、鑒定及流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:了解2013年貴陽(yáng)市流感病毒流行株的型別及其流行趨勢(shì)，比較流感病毒不同檢測(cè)方法的差異，探討影響流感病毒分離培養(yǎng)陽(yáng)性率的因素。
　　方法:
　　1.在貴陽(yáng)市流感哨點(diǎn)監(jiān)測(cè)醫(yī)院（貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院和清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院）隨機(jī)采集2013年度0-75歲流感樣病例的鼻咽拭子標(biāo)本1725份；
　　2.將全部標(biāo)本分別接種狗腎傳代細(xì)胞（MDCK細(xì)胞），倒置顯微鏡高倍鏡下觀(guān)察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），收集CPE達(dá)到75％以上的培養(yǎng)物，

2、即使無(wú)CPE也應(yīng)該于第7天進(jìn)行收集。所收集的細(xì)胞培養(yǎng)物用血凝試驗(yàn)（HA）進(jìn)行流感病毒初篩，效價(jià)≥1:16為血凝試驗(yàn)陽(yáng)性；血凝試驗(yàn)陽(yáng)性的細(xì)胞培養(yǎng)物繼續(xù)做血凝抑制試驗(yàn)(HI)，鑒定流感病毒的亞型；
　　3.提取1725例標(biāo)本的流感病毒RNA，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)，進(jìn)行甲型流感病毒的通用型、季節(jié)性H1型、季節(jié)性H3型、甲型新型流感病毒H1型、乙型流感病毒通用型五種基因的檢測(cè)；
　　4.將全部標(biāo)本的流感病毒MDCK細(xì)胞分離培

3、養(yǎng)物鑒定結(jié)果按照標(biāo)本來(lái)源醫(yī)院、分離病毒所用MDCK細(xì)胞的代次、標(biāo)本分離接種的時(shí)間（24h內(nèi)與24h外），分成三組；將全部標(biāo)本的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果按照患者性別、年齡以及發(fā)病季節(jié)，分成三組；用Excel2007軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，用卡方(χ2)檢驗(yàn)對(duì)上述六組檢測(cè)結(jié)果分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析不同組別間流感病毒陽(yáng)性率差異的影響因素，同時(shí)比較MDCK細(xì)胞流感病毒分離培養(yǎng)技術(shù)與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)技術(shù)在流感病毒檢測(cè)結(jié)果上的差異。
　

4、　結(jié)果:
　　1.貴陽(yáng)市流感哨點(diǎn)醫(yī)院采集的1725例流感樣病例鼻咽拭子標(biāo)本中，貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院為875例，清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院為850例；
　　2.在1725例標(biāo)本的MDCK細(xì)胞培養(yǎng)物中，HA陽(yáng)性者42例，陽(yáng)性率2.43%；HA陽(yáng)性細(xì)胞培養(yǎng)物的HI結(jié)果顯示，甲型流感病毒通用型32例，陽(yáng)性率1.86%，包含季節(jié)性甲型流感病毒H3型7例，陽(yáng)性率為0.41%，甲型新型流感病毒H1型25例，陽(yáng)性率為1.45%，季節(jié)性甲型流感病毒H1

5、型0例，乙型流感病毒通用型10例，陽(yáng)性率為0.58%；
　　3.1725例標(biāo)本實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，流感病毒陽(yáng)性167例，陽(yáng)性率為9.68%，其中甲型流感病毒通用型陽(yáng)性128例，陽(yáng)性率為7.42%，包含季節(jié)性甲型流感病毒H3型29例，陽(yáng)性率為1.68%，甲型新型流感病毒H1型99例，陽(yáng)性率為5.74%，季節(jié)性甲型流感病毒H1型0例，乙型流感病毒通用型39例，陽(yáng)性率為2.26%；
　　4.流感病毒MDCK細(xì)胞分離培

6、養(yǎng)鑒定結(jié)果的卡方（χ2）檢驗(yàn)顯示：貴陽(yáng)市第一人民醫(yī)院和清鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院采集標(biāo)本的流感病毒分離陽(yáng)性率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；病毒分離所用不同代次的細(xì)胞間流感病毒分離陽(yáng)性率的差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；標(biāo)本在采集24h內(nèi)分離的流感病毒分離陽(yáng)性率明顯高于采集24h后分離的流感病毒分離陽(yáng)性率。流感病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)結(jié)果卡方（χ2）檢驗(yàn)顯示：男、女性流感病毒陽(yáng)性率差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；0-15歲年齡組、60-75歲以上年齡組與15-25歲年齡組、25-6

7、0歲年齡組流感病毒陽(yáng)性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，0-15歲年齡組、60-75歲年齡組流感病毒陽(yáng)性率明顯高于15-25歲年齡組、25-60歲年齡組；1-3月份、10-12月份與4-6月份、7-9月份流感病毒陽(yáng)性率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，1-3月份、10-12月份流感病毒陽(yáng)性率明顯高于4-6月份、7-9月份；
　　5. MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)流感病毒陽(yáng)性率和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)流感病毒陽(yáng)性率的符合率為100%，卡方（χ2）檢驗(yàn)比較兩種方法的

8、流感病毒檢測(cè)陽(yáng)性率，具有顯著差異。
　　結(jié)論:
　　1. MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)鑒定方法與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR技術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：2013年度貴陽(yáng)市流感病毒以季節(jié)性甲型流感病毒H3型、甲型新型流感病毒H1型、乙型流感病毒通用型為主，未發(fā)現(xiàn)季節(jié)性甲型流感病毒H1型；
　　2.流感病毒分離陽(yáng)性率與MDCK細(xì)胞的代次沒(méi)有明顯關(guān)聯(lián)；流感病毒的分離時(shí)效性可影響分離陽(yáng)性率，標(biāo)本采集后的24h內(nèi)分離培養(yǎng)陽(yáng)性率明顯高于24h后分離培養(yǎng)陽(yáng)性