應(yīng)力刺激下Wnt-β-catenin信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞成骨效應(yīng)的調(diào)控.pdf

1、正畸矯治力作用下，牙槽骨內(nèi)壓力側(cè)的牙周膜壓縮，張力側(cè)的牙周膜拉伸，引發(fā)了牙周組織一系列分子生物學(xué)改變，最終導(dǎo)致壓力側(cè)骨吸收和張力側(cè)骨形成，牙移動(dòng)由此發(fā)生。牙齒在這一過(guò)程中承受相同的作用力，伴隨牙周組織的改建，在牙齒移動(dòng)的過(guò)程中，牙根因?yàn)槭芰σ矔?huì)發(fā)生一定程度的吸收及修復(fù)。位于牙骨質(zhì)與牙周膜之間的成牙骨質(zhì)細(xì)胞在牙根吸收后修復(fù)的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，它的功能主要是形成牙骨質(zhì)。研究成牙骨質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)功能，探索成牙骨質(zhì)細(xì)胞對(duì)牙根吸收后修復(fù)的機(jī)

2、制是有必要的。經(jīng)典Wnt/β-catenin信號(hào)通路是一條力學(xué)相關(guān)通路，現(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)力學(xué)刺激能夠激活成骨細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進(jìn)成骨細(xì)胞發(fā)揮成骨效應(yīng)。成牙骨質(zhì)細(xì)胞與成骨細(xì)胞在功能上具有極大的相識(shí)性，而力學(xué)刺激下經(jīng)典Wnt信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞成骨效應(yīng)的調(diào)控作用，目前國(guó)內(nèi)外對(duì)這方面的研究還沒(méi)有，本課題主要是通過(guò)張應(yīng)力刺激以及細(xì)胞信號(hào)通路的特異性阻斷劑干預(yù)，以Runx2為切入點(diǎn)，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、Western免疫印跡等

3、方法，研究應(yīng)力刺激對(duì)成牙骨質(zhì)樣細(xì)胞中Wnt信號(hào)通路的激活效應(yīng)以及該通路對(duì)成骨因子Runx2的調(diào)控作用。對(duì)正畸力作用下成牙骨質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)改變機(jī)制及促進(jìn)牙根吸收修復(fù)的關(guān)系進(jìn)行了探討，為進(jìn)一步研究正畸矯治中牙根吸收后修復(fù)的分子生物學(xué)理論提供依據(jù)。
　　實(shí)驗(yàn)分為四個(gè)部分:
　　1.應(yīng)力刺激對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)RUNX2的調(diào)控作用目的:探索應(yīng)力刺激對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Runx2的調(diào)控作用。方法:應(yīng)用FX4000T應(yīng)力加載裝置對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞株

4、OCCM30分別加載張應(yīng)力0h、3h、6h、12h，RT-PCR檢測(cè)Runx2mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示張應(yīng)力刺激后，Runx2mRNA表達(dá)水平上調(diào)，且隨加載時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì)。結(jié)論:張應(yīng)力刺激后，成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Runx2mRNA表達(dá)上調(diào)。
　　2.應(yīng)力刺激下成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路的活化水平目的:探索應(yīng)力刺激對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的激活效應(yīng)。方法:應(yīng)用FX4000T應(yīng)力加

5、載裝置對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM30分別加載張應(yīng)力0h、3h、6h、12h，Western blot檢測(cè)β-catenin水平。結(jié)果:Western blot結(jié)果顯示張應(yīng)力刺激后，β-catenin表達(dá)水平上調(diào)，且隨加載時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì)。結(jié)論:張應(yīng)力刺激能夠激活成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。
　　3.經(jīng)典Wnt信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Runx2的調(diào)控作用目的:探索經(jīng)典Wnt信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Runx2的調(diào)控作用。方法:分

6、別用濃度為20ng/ml，50ng/ml，80 ng/ml，100ng/ml，150ng/ml的DKK1處理成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM3048h，Western blot檢測(cè)β-catenin水平，RT-PCR檢測(cè)Runx2mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:DKK1濃度達(dá)到80ng/ml，100ng/ml時(shí)β-catenin蛋白表達(dá)明顯減少，DKK1濃度為150ng/ml時(shí)β-catenin蛋白的量顯著減少，Runx2 mRNA的表達(dá)量也相應(yīng)減少。結(jié)

7、論:阻斷經(jīng)典Wnt信號(hào)通路RUNX2 mRNA的表達(dá)下調(diào)。
　　4.張應(yīng)力刺激下Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞成骨效應(yīng)的調(diào)控目的:探索張應(yīng)力刺激下Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞成骨效應(yīng)的調(diào)控。方法:將實(shí)驗(yàn)分為A、B、C、D四組，A組為空白對(duì)照，不加力不加阻斷劑;B組加力加阻斷劑;C組加力不加阻斷劑:D組不加力加阻斷劑，加阻斷劑組即B、D組加入150ng/mlDKK1，其余兩組加入PBS液，48h