Wnt-β-catenin信號對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響.pdf

1、目的:初步探討經(jīng)典Wnt/β-catenin信號通路協(xié)同BMP9對誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響。
　　方法:
　　(1)以C3H10T1/2為目的細(xì)胞，重組腺病毒介導(dǎo)BMP9過表達(dá)，聯(lián)用β-catenin重組腺病毒上調(diào)經(jīng)典Wnt信號通路關(guān)鍵節(jié)點β-catenin的表達(dá)，并通過RNA干擾抑制β-catenin的表達(dá);
　　(2)通過化學(xué)方法分析其堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性變化，R

2、T-PCR檢測骨鈣蛋白(Osteocalcin，OC)和骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，并利用Western blotting檢測OPN及OC的蛋白水平;利用茜素紅S染色檢測鈣鹽沉積;
　　(3)通過異位成骨動物模型，在體外進(jìn)一步驗證Wnt/β-catenin信號對BMP9誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的影響。
　　結(jié)果:
　　(1) BMP9單獨(dú)作用能誘導(dǎo)C3H10T1/2向成骨方向分化，

3、增強(qiáng)ALP活性;單獨(dú)的β-catenin無成骨誘導(dǎo)作用，但可劑量依賴性地增強(qiáng)BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞ALP的活性，并能促進(jìn)BMP9誘導(dǎo)的OC和OPN的表達(dá)及鈣鹽沉積;
　　(2) RNA干擾抑制β-catenin基因表達(dá)可顯著降低BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞的ALP活性(P＜0.05)，并下調(diào)OC和OPN的表達(dá)，并抑制鈣鹽沉積;
　　(3)裸鼠皮下干細(xì)胞移植5W后，取出異位成骨形成的骨塊，大體標(biāo)本觀測及行