BMP9通過Erk5信號通路調控間充質干細胞成骨分化.pdf

1、目的：初步分析絲裂原活化蛋白激酶ERK5在骨形成蛋白9誘導小鼠間充質干細胞C3H10T1/2、小鼠成骨細胞株MC3T3、小鼠成肌細胞株C2C12、小鼠胚胎成纖維細胞MZF成骨分化過程中的作用。
　　方法：利用BMP9重組腺病毒感染C3H10T1/2、MC3T3、C2C12、MEF細胞，western blot檢測ERK5激酶總蛋白表達情況和磷酸化情況。ERK5的特異性抑制劑S1531抑制ERK5活性后，分析ALP活性變化，利用茜素

2、紅S染色檢測鈣鹽沉積，Real Time PCR檢測Runx2和Smad7的mRNA表達水平，RT-PCR檢測Id-1，Id-2，Id-3，CTGFmRNA表達水平，western blot檢測Runx2，Smad1/5/8，OPN，OCN蛋白表達水平，熒光素酶活性檢測Smad1/5/8活性。
　　結果：BMP9不影響ERK5激酶的蛋白表達水平，但卻可以促進ERK5激酶的磷酸化；ERK5抑制劑S1531可劑量依賴性地抑制由BMP9

3、誘導的C3H10T1/2、MC3T3、C2C12、MEF細胞的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)活性，S1531還可劑量依賴性地抑制BMP9誘導的C3H10T1/2、C2C12、MEF細胞的鈣鹽沉積；BMP9的靶基因Id-1，Id-2，Id-3，CTGF和Smad7的mRNA水平可以被ERK5特異性抑制劑S1531抑制；BMP9-Smad經(jīng)典通路中的Smad1/5/8磷酸化水平和熒光素酶活性也被S1531所抑制