TNF-α對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡、RANKL-OPG mRNA表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同濃度TNF-α對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞增殖、凋亡、RANKL/OPG mRNA表達(dá)的影響，為探討TNF-α在牙根吸收中的生物學(xué)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　將體外培養(yǎng)的成牙骨質(zhì)細(xì)胞株OCCM-30分為6組：實(shí)驗(yàn)組5組，對(duì)照組1組。實(shí)驗(yàn)組分別加入濃度為5ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml TNF-α的培養(yǎng)液，對(duì)照組加入不含TNF-α的培養(yǎng)液。
　　

2、1、采用MTT法檢測(cè)TNF-α作用24h、48h、72h后OCCM-30細(xì)胞增殖變化；2、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TNF-α作用48h后OCCM-30細(xì)胞凋亡變化；
　　3、采用RT-PCR檢測(cè)TNF-α作用24h后OCCM-30 RANKL/OPG mRNA的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析與處理。
　　結(jié)果：
　　1、MTT法結(jié)果顯示：不同濃度的TNF-α作用24h時(shí)，5ng/ml組OCCM-30細(xì)胞吸

3、光度值比對(duì)照組增高，25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml組的吸光度值比對(duì)照組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。TNF-α作用48h和72h時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的吸光度值與對(duì)照組相比逐漸降低，差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)。
　　2、流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：不同濃度的TNF-α作用48h時(shí)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組OCCM-30的晚期凋亡率隨著TNF-α濃度的上升而逐漸增高，各組間比較差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01

4、)。
　　3、RT-PCR結(jié)果顯示：TNF-α作用24h時(shí)，與對(duì)照組相比，5ng/ml組OCCM-30的RANKL表達(dá)減弱，50ng/ml和100ng/ml組RANKL表達(dá)增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。5ng/ml、10ng/ml的TNF-α對(duì)OPG mRNA的表達(dá)和RANKL/OPG的比值無(wú)明顯影響。25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml的TNF-α能夠抑制OPG mRNA的表達(dá)，并顯著上調(diào)RANKL/OPG

5、的比值，以100ng/ml TNF-α作用最為明顯，差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、TNF-α對(duì)成牙骨質(zhì)細(xì)胞的增殖具有雙向調(diào)節(jié)作用，低濃度短時(shí)間促進(jìn)細(xì)胞增殖，高濃度抑制細(xì)胞增殖，且抑制作用呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性。
　　2、TNF-α能夠誘導(dǎo)成牙骨質(zhì)細(xì)胞的凋亡，且誘導(dǎo)作用呈濃度依賴性。
　　3、高濃度的TNF-α能夠促進(jìn)成牙骨質(zhì)細(xì)胞RANKL的表達(dá)，抑制OPG的表達(dá)，升高 RANKL