骨形成蛋白2調(diào)控成牙骨質(zhì)細胞中sclerostin表達變化的初步研究.pdf

1、隨著大眾對生活品質(zhì)的要求漸漸提高,越來越多的錯頜畸形患者開始尋求牙齒正畸治療,在正畸治療改善患者笑容,改正牙齒咬合狀況的同時，其副作用也逐漸引起人們的重視，正畸治療導致的炎性牙根吸收（Orthodontically induced inflammatory root resorption, OIIRR）就是其中之一。越來越多的正畸學者開始研究預防及治療OIIRR的有效方法。眾所周知，成牙骨質(zhì)細胞參與了牙根形成、牙周組織再生和牙根吸收的修

2、復，所以成牙骨質(zhì)細胞成為眾多正畸力學研究的對象之一。
　　骨形成蛋白2（Bone morphogenetic protein2, BMP2）是一種骨形成誘導劑，在牙根發(fā)育中起著重要作用。本課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)，分化成熟的成牙骨質(zhì)細胞表達BMP2，在機械應力的調(diào)控下，BMP2信號得到增強，同時Smad1/5/8蛋白的表達也出現(xiàn)變化，提示BMP2/Smads信號通路可能參與了應力刺激對成牙骨質(zhì)細胞功能的調(diào)控。骨硬化蛋白Scleros

3、tin(SOST)是硬化性骨化癥（sclerosteosis）基因編碼表達的一種分泌型糖蛋白，是一種骨形成抑制劑，特別是可抑制BMP誘導的骨形成。但是BMP2能否調(diào)控SOST的表達還不明確。
　　本課題通過增強 BMP2信號，探討成牙骨質(zhì)細胞中 BMP2對sclerostin的表達的調(diào)控作用，并且初步探索哪些BMP相關通路參與了BMP2的這種調(diào)控作用。實驗分為三個部分：
　　1.不同濃度BMP2對OCCM30內(nèi)scleros

4、tin表達的影響
　　目的：探索不同濃度BMP2對OCCM30內(nèi)sclerostin（SOST）表達的影響。
　　方法：應用含有BMP2濃度分別為0ng/ml,50ng/ml,100ng/ml的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞3d、5d、7d, RT-PCR檢測 SOSTmRNA水平， Western blot檢測sclerostin蛋白水平。結(jié)果：RT-PCR以及Western blot結(jié)果均顯示，BMP2可以上調(diào)SOST的表達，且具有

5、濃度依賴性。隨著時間的增加，SOST表達隨之增強。
　　結(jié)論：在OCCM-30中BMP2正向調(diào)控SOST表達，且隨著BMP2孵育時間的增加，SOST表達也隨之增強。
　　2.不同濃度dorsomorphin, PD98059, SB202190對OCCM30增殖的影響
　　目的：探索不同濃度 dorsomorphin, PD98059, SB202190對OCCM30增殖的影響，為后續(xù)實驗篩選最佳阻斷劑濃度。
　

6、　方法：應用含不同濃度dorsomorphin, PD98059, SB202190的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)成牙骨質(zhì)細胞株OCCM30，濃度梯度均設置為2μM、4μM、6μM、8μM、10μM、12μM。 CCK檢測細胞增殖。
　　結(jié)果：各個濃度的dorsomorphin對OCCM30的增殖均表現(xiàn)出抑制， dorsomorphin濃度越高抑制作用越明顯。各個濃度的 SB202190以及PD98059對OCCM30的增殖在24h、48h未表

7、現(xiàn)出明顯抑制,而在72h表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，且阻斷劑濃度越高，抑制作用越明顯。
　　3. BMP2相關通路對成牙骨質(zhì)細胞中SOST表達變化的影響
　　目的：探索BMP2相關通路（Smad通路/MAPK通路/ERK1/2通路）對成牙骨質(zhì)細胞中SOST表達變化的影響。
　　方法：將實驗分為A、B、C、D、E五組，A組為空白對照，不加BMP2不加阻斷劑;B組加BMP2；C組加BMP2+dorsomorphin；D組加B

8、MP2+SB202190，E組加BMP2+PD98059。分別于第3d、5d收樣進行檢測，RT-PCR檢測各組SOSTmRNA表達，Western Blot檢測sclerostin表達。
　　結(jié)果：相對于BMP2組，BMP2+2μMdorsomorphin組、BMP2+10μM SB202190組以及 BMP2+10μM PD98059組 sclerostin水平均降低， BMP2+2μMdorsomorphin組降低最多。