簡(jiǎn)介：密級(jí)論文題目通直省櫻型I釜鴨圣型旺筮疸壹旦H旦Y2僉王速塹痘堂迥查叢曼巡拉旦叢旦Y佳囪達(dá)驗(yàn)盟宜英文題目MOLECULAREPIDEMIOLOGICALANALYSISOFDUCKHEPATITISB，VIRUSINCHERRY_VALLEYDUCKINHENANPROVINCEANDANTIDUCKHEPATITISBVIRUSACTIVITIESOFFNCINVIVO學(xué)位申請(qǐng)人姓名導(dǎo)師姓名學(xué)科研究專業(yè)方向論文提交日期學(xué)位授予日期河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明、使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾書學(xué)位論文題目河南省櫻桃谷鴨乙型肝炎病毒DHBV分子流行病學(xué)調(diào)查及FNC抗DHBV體內(nèi)試驗(yàn)研究差魯I碩士研究生級(jí)別J’、一“一學(xué)生姓名學(xué)位論文是否保密劉揚(yáng)科L霉翌L預(yù)防獸醫(yī)學(xué)導(dǎo)師姓名陳陸王川慶否I如需保密，解密時(shí)間年月日獨(dú)創(chuàng)性聲明本人呈交論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包括為獲得河南農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明，并表示了謝意。特此聲明。研究生簽名讖奶昂峙日期70116月日導(dǎo)師簽名睜P虧日期形年擁C7ET學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷本和電子版本，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意河南農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。本人完全了解河南農(nóng)業(yè)大學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)辦法的有關(guān)規(guī)定，在畢業(yè)離開河南農(nóng)業(yè)大學(xué)后，就在校期間從事的科研工作發(fā)表的所有論文，第一署名單位為河南農(nóng)業(yè)大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河南農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，否則，承擔(dān)相應(yīng)的法律責(zé)任。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書。研究生簽名鍘蝻耐導(dǎo)師簽名侈礫眵學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)簽名圈日期≯F1年6月1同同期沙C年侈FLLQ日期年月日

簡(jiǎn)介：目的研究猿腺病毒6型及7型血清中和抗體在中國(guó)健康人群、慢性乙型病毒性肝炎及原發(fā)性肝癌中的流行率。方法通過(guò)轉(zhuǎn)染將已構(gòu)建好的重組缺陷猿腺病毒轉(zhuǎn)入人胚腎臟293細(xì)胞中生產(chǎn)出大量腺病毒，通過(guò)改良氯化銫梯度離心法純化獲得高滴度腺病毒，用PBS稀釋得到濃度為51012VPML的腺病毒，放入80。C冰箱中儲(chǔ)存。收集中國(guó)5個(gè)地區(qū)健康自愿者血清樣本998份，慢性乙肝患者血清樣本196份，原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者血清樣本193份。最后進(jìn)行中和滴定實(shí)驗(yàn)。結(jié)果在健康志愿者中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是1222％12299895％可信區(qū)間CI，10341440％和1313％13199895％CI，11171536％。在乙肝病人中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是2143％4219695％CI，16262769％和2551％5019695％CI，19923204％。在原發(fā)性肝癌患者中猿腺病毒6型及7型中和抗體的血清流行率分別是2746％5319395％CI21653415％和3109％6019395％CI24983793％。結(jié)論猿腺病毒抗體血清流行率在人群中較低，且與年齡及性別無(wú)關(guān)。本研究將為猿腺病毒載體用于疫苗和基因治療提供依據(jù)。

簡(jiǎn)介：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文犬細(xì)小病毒的分離鑒定與生物學(xué)特性研究姓名周云朵申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師劉正飛201106華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2011屆碩士研究生學(xué)位論文ABSTACTCANINEPARVOVIRUSCEVEMERGEDIN1978ANDSPREADEDALLOVERTHEWORDSINCETHENTHISDISEASEBECOMESENDEMICWORDWIDETHISSTUDYAIMSTOOBTAINCPVSTRAINSINTHEMIDDLEOFCHINAANDSTUDYTHEIRGENOTYPES，EPIDEMIOLOGYBIOLOGICALCHARACTERISTICSANDPATHOGENICITY42FECESSWABSTHATWEREPOSITIVEINCOLLOIDALGOLDTESTWERECOLLECTEDFROMPETCLINICSINWUHANTHENTHEYWEREPASSAGEDINFELINEKIDNEY81F81ANDOBSERVATIONBYTRANSMISSIONELECTRONMICROSCOPIC2PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDACCORDINGTOCONSERVATIVECAPSIDPROTEIN2VP2ANDTHEOTHERPAIRWERESYNTHESIZEDACCORDINGTEFERENCEANOTHER4PAIRSPRIMERSWEREDESIGNEDTOCLONETHEORFOFCPVTHESTRAINSWEREPURIFIEDBYPLAQUEASSAYANDTHENONESTEPGROWTHCURVESWEREOBTAINEDSUBSEQUENTLYTENSECTIONSWEREMADEATTHEENDANIMALEXPERIMENTWASCARRIEDOUT28CPVSTRAINSWEREISOLATED390BP，583BPAND1755BPNUCLEOTIDESEQUENCESWEREACQUIREDAFTERSEQUENCINGANDANALYZINGTHEGENEFRAGMENTS，THERESULTSHOWSTHATALLTHEISOLATESWERECPVWHILE25WERECPV2AAND3WERECPV2BTHESYSTEMPHYLOGENETICANALYSISEXPLORESTHEISOLATES5AND10WERECLOSETOTHECHINESEISOLATES，F(xiàn)ARTHERFROMTHEISOLATESINEUROPEANDTHEAMERICAS，F(xiàn)ARTHESTFROMTHEEARLIESTISOLATETHECURVESSHOWTHEGROWTHOFCPVATDIFFERENTSTAGESAFTERINFECTIONTHEREPRODUCTIVEACTIVITYCOULDREACHORBEYOND105一PFU／M1THERESULTALSOSHOWSTHATTHETWOCURVESWERESLIGHTLYDIFFERENTATTHEBEGINNINGTHECURVEACCORDINGTOTHEEXPERIMENTTHATTHECELLSWEREINFECTEDWHENTHECELLHADPASSAGED8HOURSSHOWEDDESCENDINGATTHEBEGINNINGHOWERE，ANOTHERCURVEWASRISINGALLTHEISOLATESCOULDAGGLUTINATEREDBLOODCELLSOFSWINEUNDERCERTAINCONDITIONSANDTHEAGGLUTINATIONCANBEINHIBITEDTHEPHOTOGRAPHSOFTENSHOWTHATMITOCHONDRIAARESWELLINGTHEORFSOFTHE2ISOLATESWEREOBTAINEDFINALLYANIMALEXPERIMENTSHOWSTHATEVERYDOGHADCLINICALSYMPTOMSINDIFFERENTDEGREES，SUCHASVOMITINGANDBLOODYEXCREMENTAFTERWETESTEDTHEANUSSWABSCOLLECTEDATDIFFERENTTIME，WEFOUNDTHATTHEDOGSHADDISCHARGEVIRUSANDTHEHIGHESTQUANTITYCANREACH102一TCID50THERESULTSOFDISSECTIONREFLECTTHATTHEREARENECROSISINTHESMALLINTESTINEANDTHEMYOCARDIUMBECOMESTHINNERAFTERPATHOLOGICALSECTIONSWEREMADE，OBSERVATIONWERETAKENUPANDTHERESULTSHOWSTHATMYOCARDIALCELLSAREMETAMORPHICANDNECROTICTHISSTUDYPROVIDESGROUNDWORKFORFURTHERSTUDYOFMOLECULARBIOLOGYANDPATHOPOIESIAOFCPVKEYWORDSCANINEPARVOVIRUS；ISOLATION；TEN；ANIMALASSAYⅡ

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文邱小伙2012分類號(hào)密級(jí)洳≥J、涪單位代碼Q335學(xué)號(hào)21QQ魚3碩士學(xué)位論文⑧豬圓環(huán)病毒2型感染的流行病學(xué)檢測(cè)技術(shù)研究STUDIESONDIAGNOSTICTECHNIQUEOFEPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPORCINECIRCOVIRUSTYPE2INFECTION姓名邱小伙指導(dǎo)教師周繼勇教授學(xué)科、專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)所在學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院提交日期二零一三年一月中國(guó)杭州浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文邱小伙2012STUDIESONDIAGNOSTICTECHNIQUEOFEPIDEMIOLOGICALSURVEYOFPORCINECIRCOVIRUSTYPE2INFECTIONBYXIAOHUOQIUSUPERVISORPROFESSORJIYONGZHOUADISSERTATIONFORMASTERDEGREEPREVENTIVEVETERINARYMEDICINECOLLEGEOFANIMALSCIENCEZHEJIANGUNIVERSITYHANGZHOU，PR。CHINAJANUARY2013

簡(jiǎn)介：中山大學(xué)博士學(xué)位論文家蠶質(zhì)多角體病毒入侵、復(fù)制機(jī)理的電子顯微學(xué)研究姓名譚玉蓉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)生物物理學(xué)指導(dǎo)教師張景強(qiáng)20050420中山人學(xué)博士學(xué)位論文ABSTRACTCYPOVIRUSESCPVSARENONENVELOPEDDOUBLESTRANDEDRNA陽(yáng)SRNAVIRUSESANDBELONGTOTHEGENUSCYPOV打USINTHEFAMILYREOVIRIDAECPVSINFECTMIDGUTEPITHELIALCELLSOFAWIDERANGEOFINSECTSATPRESENT，THEMODEOFCPVENTRYISNOTFINALLYRESOLVEDACCORDINGTOKOBAYASHI1971，BOMBYXMORICYPOVIRUS1BMCPV1VIRIONSINJECTTHEVIRALCOREMATERIAL，THROUGHTHEVIRALSPIKE，INTOTHECYTOPLASMOFMIDGUTCELLSINPRIMARYCULTURE，WITHTHEINTACTCAPSIDSHELLREMAININGOUTSIDETHECELLSURFACEMORERECENFLY’BELLONCIKETA11986PROPOSEDTHATEUXOASCANDENSCPVESCPVVIRIONSENTEREUXOASCANDENSCELLLINEBYENDOCYTOSISUNTILNOWNO／NVIVOSTUDYONCPVENTRYHASBEENREPORTEDHEREWEREPORTEDAN／NVIVOELECTRONMICROSCOPICSTUDYOFTHEENTRYOFBMCPV1INTOMIDGUTCELLSOFSILKWORMBOMBYXMORIOURRESULTSSHOWEDINTACTBMCPV1VKIONSENTEREDMIDGUTCELLSINVIVOBYDIRECTPENETRATIONOLTHEPLASMAMEMBRANE，WHICHISREPORTEDFORTHEFIRSTTIMECPVREPLICATIONHASNOTBEENWELLDOCUMENTEDEARLYSTUDYUSINGAUTORADIOGRAPHYATTHELIGHTMICROSOPICLEVELSHOWEDTHATCPVRNAISPRODUCEDINTHENUCLEUS，ANDTHENTRANSMITTEDINTOTHECYTOPLASMWHERETHECOMPLETEVIRUSISFORMEDWITHITSPROTEINCOATHOWEVERTHISFINDINGISCONFLICTINGWITHTHATOFOTHERREOVIRIDAEMEMBERS，WHOSEWHOLEREPLICATIONPROCESSHASBEENFULFILLEDINTHECYTOPLASMOFHOSTCELLSTOCLARIFYANDLOCALIZETHESYNTHESISSITEOFCPVRNAELECTRONMICROSCOPIC／NSITUHYBRIDIZATIONTECHNIQUEWASUSEDINTHISSTUDYULTRASTRUCTURALLOCALIZATIONOFBMCPV1NUCLEICACID，WITHVIRUSSPECIFICDIGOXYGENINLABELLEDOLIGODEOXYNUCLEOTIDEPROBE，SHOWEDTHATVIRALPLUSSTRANDEDRNASREPLICATIVEINTERMEDIATEWEREPRODUCEDINTHENUCLEOLUSOFMIDGUTCOLUMNARCELLSANDTHESYNTHESISOFVIRALDOUBLESTRANDEDRNAGENOMEOCCURREDINTHECYTOPLASMICVILOGENICSTROMAVSINORDERTOUNDELSTANDTHEPATHWAYOFSYNTHESIS，TRANSPORTANDASSEMBLYOFVIRALPROTEINS，BMCPV1SPECIFICANTIBODYWASEMPLOYEDTODETECTANDLOCALIZEVIRALPROTEINWITHINHOSTCELLSUSINGIMMUNOELECTRONMICROSCOPYTHERESULTSSHOWEDTHATVIRALPROTEINSWERESYNTHESIZEDBYRIBOSOMEANDTRANSPORTEDINTONEARBYVSFORACCUMULATIONACCORDINGTHERESULTSOFULTRASTRUCTURALLOCALIZATIONOFINTRACELLULARVIRALNUCLEICACIDANDVIRALPROTEINS，WEPROPOSEDTHEHYPOTHESISFORASSEMBLYOFBMCPV1，THATIS，WITHINTHEVS，VIRALPROTEINSASSOCIATEDWITH10SEGMENTSOFPLUSSTRANDEDRNASFORMPRECURSORVIRIONTHENSYNTHESIZEVIRALDOUBLESTRANDEDRNAINTHEPRECURSORVIFION，F(xiàn)INALLYMATURETOINTACTVIRIONKEYWORDSBOMBYXMORIEYPOVIRUS1，ENTRYREPLICATION，IMMNNOELECTRONMICROSCOPYELECTRONMICROSCOPICINSITUHI，BRIDIZATIONIL

簡(jiǎn)介：目的本課題采用同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù)（ISOBARICTAGSFRELATIVEABSOLUTEQUANTITATION，ITRAQ），探索慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證與健康正常人之間的差異表達(dá)蛋白質(zhì)，尋找慢性乙型肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證的差異蛋白表達(dá)譜，初步篩選出肝郁脾虛證、脾胃濕熱證的潛在生物學(xué)標(biāo)志物，為慢性乙型病毒性肝炎中醫(yī)證候的本質(zhì)提供現(xiàn)代化依據(jù)，推動(dòng)該病中醫(yī)證候診斷客觀化的研究。方法運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)ITRAQ技術(shù)對(duì)臨床單位采集的慢性乙型肝炎肝郁脾虛證、脾胃濕熱證患者及健康正常人進(jìn)行蛋白質(zhì)檢測(cè)，采用SPSS190系統(tǒng)、MOT鑒定軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，篩選出兩種證型可能的差異表達(dá)蛋白質(zhì)。結(jié)果1肝郁脾虛證組和健康對(duì)照組比較，共篩選出157個(gè)差異表達(dá)蛋白（P＜005），其中112個(gè)蛋白上調(diào)，45個(gè)蛋白下調(diào)；脾胃濕熱證組和健康對(duì)照組比較，共篩選出163個(gè)差異表達(dá)蛋白（P＜005），其中128個(gè)蛋白上調(diào)，35個(gè)蛋白下調(diào)。2肝郁脾虛證組和脾胃濕熱證組比較，肝郁脾虛組共篩選出30個(gè)差異表達(dá)蛋白（P＜005），22個(gè)蛋白上調(diào)，8個(gè)蛋白下調(diào)。其中，發(fā)現(xiàn)表達(dá)差異倍數(shù)在兩倍以上的蛋白1個(gè)TUBA1A上調(diào)表達(dá)；脾胃濕熱證組和肝郁脾虛證組比較，脾胃濕熱組共篩選出24個(gè)差異表達(dá)蛋白（P＜005），22個(gè)蛋白上調(diào)，2個(gè)蛋白下調(diào)。其中，發(fā)現(xiàn)表達(dá)差異倍數(shù)在兩倍以上的蛋白6個(gè)ACTA2、ACTG2、ZNF628、DEFA1、DEFA3、CAM均上調(diào)表達(dá)。3差異蛋白與課題組前期兩證型MICRNA分析均表明酶活性調(diào)節(jié)、代謝過(guò)程、細(xì)胞發(fā)育、細(xì)胞凋亡、炎癥應(yīng)答、免疫反應(yīng)等功能為慢性乙型肝炎肝郁脾虛證相關(guān)；免疫系統(tǒng)、細(xì)胞殺傷、細(xì)胞凋亡、刺激反應(yīng)、肌動(dòng)蛋白等功能可能與慢性乙型肝炎脾胃濕熱證相關(guān)。結(jié)論1慢性乙型肝炎肝郁脾虛和脾胃濕熱證組與健康對(duì)照組存在差異蛋白表達(dá)。2TUBA1A可能是慢性乙型病毒性肝炎肝郁脾虛證的潛在生物學(xué)標(biāo)志物；ACTA2、ACTG2、ZNF628、DEFA1、DEFA3、CAM可能是慢性乙型病毒性肝炎脾胃濕熱證的潛在生物學(xué)標(biāo)志物。3肝郁脾虛證和脾胃濕熱證組中，差異蛋白和課題前期研究MICRNA間存在共同的功能。4本研究探索性的應(yīng)用蛋白組學(xué)ITRAQ技術(shù)，進(jìn)一步證明了此技術(shù)在慢性乙型肝炎中的科學(xué)性與創(chuàng)新性，可為今后慢性乙肝的研究提供參考依據(jù)。

簡(jiǎn)介：、●’●，E1羊分類號(hào)密級(jí)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬繁殖與呼吸綜合征病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及NSP2、ORF5基因的遺傳變異分析PATHOGENICPORCINEREPRODUCTIVEANDRESPIRATORYVIRUSMOLECULAREPIDEMIOLOGY；GENETICVARIATIONOFNSP2ANDORF5研究生郭雪亮指導(dǎo)教師方六榮教授指導(dǎo)小組肖少波教授專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)江云波副教授羅銳講師研究方向動(dòng)物病毒學(xué)獲得學(xué)位名稱農(nóng)學(xué)碩士獲得學(xué)位時(shí)間2011年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二。一一年六月IL■■R、N善氅，、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文否如需保密，解密時(shí)間年月日是否保密獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說(shuō)明，并表示了謝意。黜張蠶嘞帆刎件∥月它日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定“，即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印刷本和電子版本；學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄檢索和閱覽服務(wù)，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。注保密學(xué)位論文在解密后適用于本授權(quán)書學(xué)位論文作者簽名南而勃導(dǎo)師簽名云，蒸’簽名日期力，『年占月2日簽名日期乙一DIF年6月E日

簡(jiǎn)介：浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文一株苜蓿花葉病毒的全基因組序列及其寄主生物學(xué)研究姓名金磊磊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師陳集雙201103浙江理工大學(xué)碩士論文本研究還構(gòu)建了AMVHZ與CMVFNY間的人工假重組體FLF2A3，體外轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)證實(shí)此重組體沒(méi)有侵染活性。關(guān)鍵詞苜?；ㄈ~病毒，雙鏈心A，單引物擴(kuò)增技術(shù)，序列分析，寄主生物學(xué)II

簡(jiǎn)介：禽流感病毒宿主范圍廣泛，不僅可以感染各種禽類，對(duì)家禽養(yǎng)殖業(yè)造成重大的經(jīng)濟(jì)損失，偶爾也可感染人類，因其感染后引起的高死亡率而嚴(yán)重危害著人類的生命健康。流感病毒的生存嚴(yán)格依賴于宿主細(xì)胞，病毒的感染、復(fù)制、致病以及逃避宿主免疫離不開與宿主各種蛋白發(fā)生相互作用。非結(jié)構(gòu)蛋白NS1是流感病毒的一個(gè)重要的毒力因子，它能夠通過(guò)多種策略逃避宿主免疫反應(yīng)而調(diào)節(jié)病毒的復(fù)制。NS1蛋白的81113位氨基酸能夠招募宿主蛋白真核翻譯起始因子4GIEIF4GI到病毒MRNA5端未翻譯區(qū)，優(yōu)先翻譯病毒MRNA，促進(jìn)病毒復(fù)制。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)NS1片段缺失EIF4GI結(jié)合區(qū)的重組H5N1禽流感病毒RNS1SD30相對(duì)于野生病毒RNS1WT，在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)中其毒力和致病性都顯著地降低，并且在MDCK細(xì)胞上抑制干擾素的能力也受到損傷。然而重組缺失毒RNS1SD30感染引起的宿主蛋白變化，以及有那些宿主因子參與了毒力及其致病的降低的作用機(jī)制還不清楚。不均一核糖核蛋白（HNRNPS）家族蛋白的功能繁多，主要參與細(xì)胞中MRNA的剪接、轉(zhuǎn)錄、穩(wěn)定、翻譯和轉(zhuǎn)運(yùn)等的調(diào)節(jié)功能，一些蛋白還參與了宿主的免疫調(diào)節(jié)。近年來(lái)有關(guān)HNRNPS調(diào)控病毒復(fù)制的研究越來(lái)越多，通過(guò)調(diào)節(jié)病毒MRNA的剪接以及與病毒蛋白互作調(diào)節(jié)病毒復(fù)制，而HNRNPK參與了多個(gè)病毒的復(fù)制過(guò)程。HNRNPK直接與甲型流感病毒的M1MRNA結(jié)合促進(jìn)M1MRNA剪接產(chǎn)生M2MRNA，導(dǎo)致編碼產(chǎn)生的M2蛋白增多，進(jìn)而促進(jìn)流感病毒的復(fù)制。然而HNRNPK與流感病毒蛋白的相互作用以及是否參與了宿主的天然免疫調(diào)節(jié)還不清楚。本研究采用比較蛋白質(zhì)組學(xué)的方法研究了RNS1WT及RNS1SD30病毒感染雞胚成纖維CEF細(xì)胞后蛋白質(zhì)的差異表達(dá)情況，研究了差異表達(dá)蛋白ANXA7對(duì)病毒增值以及禽天然免疫調(diào)節(jié)的作用，還研究了人源HNRNPK與流感病毒的相互作用以及調(diào)控IFN產(chǎn)生的作用機(jī)制。本研究主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下1RNS1WT及RNS1SD30病毒感染CEF的蛋白質(zhì)組學(xué)研究RNS1WT及RNS1SD30病毒感染CEF12H，24H和36H后運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定到81個(gè)差異表達(dá)宿主蛋白，對(duì)鑒定到的蛋白進(jìn)行功能分類分析，發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白主要參與了細(xì)胞骨架的形成、凋亡和應(yīng)激反應(yīng)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、MRNA加工剪切、運(yùn)輸和代謝以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等進(jìn)程。進(jìn)而克隆表達(dá)部分基因并研究其對(duì)病毒復(fù)制的影響，發(fā)現(xiàn)ANXA7抑制RNS1SD30在DF1細(xì)胞的增殖，而對(duì)RNS1WT并沒(méi)有影響。2ANXA7通過(guò)調(diào)節(jié)MDA5的表達(dá)正調(diào)控雞RLR信號(hào)通路構(gòu)建了雞RLR信號(hào)通路研究平臺(tái)，發(fā)現(xiàn)ANXA7、ALDH7A1及DCTN2等蛋白促進(jìn)MDA5誘導(dǎo)的IFNΒ產(chǎn)生。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)ANXA7促進(jìn)RNS1SD30刺激的IFNΒ產(chǎn)生，而并不影響RNS1WT誘導(dǎo)的IFNΒ產(chǎn)生。ANXA7促進(jìn)POLYI∶C及MDA5介導(dǎo)的IFNΒ產(chǎn)生通過(guò)靶向MDA5并調(diào)節(jié)其蛋白表達(dá)，同時(shí)ANXA7與MDA5存在相互作用，其C端鈣離子磷脂結(jié)合區(qū)是促進(jìn)IFNΒ的關(guān)鍵區(qū)域。3人源HNRNPK通過(guò)與NS1蛋白互作促進(jìn)流感病毒增殖流感病毒感染A549細(xì)胞下調(diào)HNRNPK的表達(dá)，同時(shí)過(guò)表達(dá)HNRNPK顯著促進(jìn)多個(gè)亞型流感病毒的增殖，沉默HNRNPK抑制病毒的增殖。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)HNRNPK與NS1存在RNA非依賴性的相互作用，NS1的N端RBD以及HNRNPK的RNA結(jié)合區(qū)KH2和蛋白蛋白互作區(qū)KI是NS1與HNRNPK發(fā)生相互作用的關(guān)鍵區(qū)域。HNRNPK的RNA結(jié)合區(qū)KH2和核穿梭區(qū)KNS是促進(jìn)流感病毒增殖的關(guān)鍵區(qū)域。4HNRNPK抑制IFNΒ產(chǎn)生并參與到NS1逃避的天然免疫研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK抑制流感病毒和仙臺(tái)病毒SEV介導(dǎo)的IFNΒ產(chǎn)生以及IRF3的磷酸化。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK與RIGⅠ信號(hào)通路的TRAF3發(fā)生相互作用，HNRNPK的兩個(gè)RNA結(jié)合區(qū)KH1和KH2以及蛋白互作區(qū)KI和TRAF3的RINGFINGER在TRAF3與HNRNPK的相互作用中起著關(guān)鍵作用。此外，研究發(fā)現(xiàn)HNRNPK能夠增強(qiáng)NS1蛋白抑制的流感病毒介導(dǎo)的IRF3磷酸化，并且HNRNPK的存在有利于NS1TRAF3復(fù)合物的形成。

簡(jiǎn)介：口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一種重大動(dòng)物疫病，我國(guó)歷史上發(fā)生和近年來(lái)流行的有O、A和ASIA1三個(gè)血清型，其中O型口蹄疫對(duì)我國(guó)畜牧養(yǎng)殖業(yè)的威脅最大。疫苗免疫是防控本病的重要手段，現(xiàn)有的市售口蹄疫疫苗包括常規(guī)滅活疫苗和合成肽疫苗。但是，前者不利于與口蹄疫病毒自然感染動(dòng)物的鑒別診斷，后者在有新發(fā)外來(lái)病毒株入侵時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)免疫失敗。目前，隨著口蹄疫反向疫苗學(xué)的發(fā)展，借助基因工程手段缺失或沉默口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白的免疫優(yōu)勢(shì)表位創(chuàng)制的負(fù)標(biāo)記疫苗有效解決了第一個(gè)瓶頸問(wèn)題本研究探索性地在口蹄疫病毒外部衣殼蛋白VP3的GH環(huán)中進(jìn)行靶向改造，旨在為廣譜、多聯(lián)（價(jià)）、正標(biāo)記疫苗的研發(fā)提供借鑒性思路。首先，為了評(píng)估外部衣殼蛋白VP3GH環(huán)展示外源標(biāo)簽的能力，本研究利用成熟的O型CATHAY拓?fù)湫涂谔阋卟《痉聪蜻z傳操作技術(shù)平臺(tái)POFS→RHN，構(gòu)建了兩種HA插入型（第31713172位）的基因組全長(zhǎng)CDNA。遺憾的是，未能拯救到基因工程毒。遂將HA、FLAG、VSVG替換性引入該區(qū)段，構(gòu)建了六種外源標(biāo)簽替換型的基因組全長(zhǎng)CDNA。同樣地，也未能獲得基因工程毒，而且，其中一種HA替換型的口蹄疫病毒基因組全長(zhǎng)CDNA經(jīng)密碼子優(yōu)化后仍無(wú)法獲得基因工程毒。這表明骨架病毒RHN的VP3GH環(huán)中存在著與口蹄疫病毒感染性相關(guān)的關(guān)鍵性氨基酸。為此，本研究對(duì)照一種HA修飾型質(zhì)粒，對(duì)骨架病毒的基因組全長(zhǎng)感染性CDNA進(jìn)行定點(diǎn)突變，構(gòu)建了四種突變型質(zhì)粒，同時(shí)，參考C型和SAT2型口蹄疫病毒代表株，構(gòu)建了三種血清型間嵌合型質(zhì)粒。轉(zhuǎn)染結(jié)果證實(shí)，僅有突變型質(zhì)粒POFSV3174Y和血清型間嵌合型質(zhì)粒POFSD3173NV3174EN3179C具有感染性，兩種定點(diǎn)突變體分別命名為RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C。最后，本研究對(duì)兩種定點(diǎn)突變體與骨架病毒進(jìn)行了生物學(xué)特性鑒定和免疫血清學(xué)比較分析。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，①RHND3173NV3174EN3179C定點(diǎn)突變體在BHK21細(xì)胞上連續(xù)傳代時(shí)容易引發(fā)假回復(fù)突變和第二位點(diǎn)突變②RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C細(xì)胞傳代毒均獲得了侵染CHO系列細(xì)胞的能力（非RGD依賴型受體），③RHN、RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株在BHK21細(xì)胞上的蝕斑表型、復(fù)制動(dòng)力學(xué)略有差異，但差異不顯著。④與RHN相比，RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株的體內(nèi)外致病力均有下降，后者更為明顯⑤與RHN的免疫陽(yáng)性血清相比，RHNV3174Y和RHND3173NV3174EN3179C遺傳穩(wěn)定株的免疫陽(yáng)性血清對(duì)我國(guó)現(xiàn)已分離的O型MYA98和PANASIA1譜系FMDV的交叉中和能力均有不同程度的改變，且后者的R值均大于05符合OIE規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)，R≥03。上述研究結(jié)果提示，可通過(guò)嘗試性地在空間結(jié)構(gòu)上外露于病毒衣殼表面且靠近口蹄疫病毒抗原位點(diǎn)的莖環(huán)區(qū)進(jìn)行氨基酸殘基的人為修飾，有望針對(duì)性地拓實(shí)口蹄疫疫苗候選株的免疫效力。

簡(jiǎn)介：LILLIIIIIIILLLITILY3393832密級(jí)論文編號(hào)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院學(xué)位論文基因重組對(duì)歐洲類禽H1N1亞型豬流感病毒生物學(xué)特性的影響THEEFFECTSOFGENERECOMBINATIONONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFEUROPEANAVIANLIKEH1N1SUBTYPESWINEINFLUENZAVIRUS碩．士研究生汪琪指導(dǎo)教師于海研究員申請(qǐng)學(xué)位類別農(nóng)學(xué)碩士專業(yè)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向獸醫(yī)微生物及其分子生物學(xué)培養(yǎng)單位上海獸醫(yī)研究所研究生院2018年5月SECRECYNO。CHINESEACADEMYOFAGRICULTURALSCIENCESDISSERTATIONTHEEFFECTSOFGENERECOMBINATION．ONBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFEUROPEANAVIANLIKEH1N1SUBTYPESWINEINFLUENZAVIRUSM．S．CANDIDATEQIWANGSUPERVISORPROFESSORHAIYUMAJORPREVENTIVEVETERINARYMEDICINESPECIALTYVETERINARYMICROBIOLOGYANDMOLECULARBIOLOGYMAY2018

簡(jiǎn)介：目的在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)融合蛋白乙型肝炎病毒前C蛋白小鼠IGGFC蛋白HBVPRECEPROTEINMOUSEIGGFC，HBVPRECFC，擴(kuò)增桿狀病毒。在SF9細(xì)胞中表達(dá)，探索表達(dá)的最佳條件，純化得到純度高的蛋白，通過(guò)免疫BALBC小鼠鑒定其免疫原性。方法目的基因HBVPRECFC連接到PFASTBAC1載體，獲得的PFASTBAC1HBVPRECFC質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10BAC感受態(tài)，通過(guò)TN7轉(zhuǎn)座子將目的基因轉(zhuǎn)座到BAC中，得到BACHBVPRECFC穿梭載體，脂質(zhì)體包被后轉(zhuǎn)染SF9昆蟲細(xì)胞獲得P1代病毒，重復(fù)轉(zhuǎn)染SF9獲得高滴度病毒。為了提高蛋白的產(chǎn)量，確定MOI前提下收獲36，48，60，72，84，96，108，120小時(shí)收獲細(xì)胞上清，通過(guò)WESTERNBLOT方法鑒定并確定最佳的收獲時(shí)間再在最佳收獲時(shí)間前提下，設(shè)置MOI為1，2，4，8，16，32收獲細(xì)胞上清，通過(guò)WESTERNBLOT方法鑒定并確定最佳的病毒濃度。在最佳時(shí)間和最佳病毒濃度下收集細(xì)胞上清超濾后通過(guò)PROTEING親和層析柱純化得到目的蛋白HBVPRECFC。純化的蛋白大腿內(nèi)側(cè)肌肉注射免疫BALBC小鼠并檢測(cè)血清中乙型肝炎病毒核心蛋白抗體產(chǎn)生量。結(jié)果HBVPRECFC在昆蟲細(xì)胞中成功表達(dá)，純化后蛋白純度達(dá)90％以上，蛋白產(chǎn)量約為303MGL，純化蛋白能有效刺激BALBC小鼠產(chǎn)生特異抗體。結(jié)論成功在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)了具有免疫原性的HBVPRECFC蛋白，為生產(chǎn)乙肝治療性疫苗奠定了基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的研究乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點(diǎn)，并與原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者及健康人尿液蛋白質(zhì)譜進(jìn)行比較，篩選出乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎尿液中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，探討質(zhì)譜技術(shù)對(duì)該病的臨床診斷意義。方法留取健康人N3、原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎N3及乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者N6的空腹清潔中段晨尿標(biāo)本，避免細(xì)菌生長(zhǎng)和蛋白酶解于1小時(shí)內(nèi)放置于80℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｈ〕?2份標(biāo)本溶解完全后，用直徑022ΜM的微孔超濾膜過(guò)濾除去較大的雜質(zhì)，再用20℃預(yù)冷丙酮進(jìn)行蛋白沉淀，置于20℃冰箱過(guò)夜后，經(jīng)4℃4000XG離心20分鐘，棄上清液，留取含尿蛋白的沉淀物，真空干燥濃縮。濃縮干燥的蛋白沉淀物用PBS充分溶解后應(yīng)用BRADFD法測(cè)定蛋白濃度。據(jù)測(cè)定的標(biāo)本蛋白濃度稱取每例樣品含1MG蛋白質(zhì)的混合固體，充分酶解后調(diào)整蛋白濃度為1ΜGΜ1，行HPLCESIMSMS分析，得到的肽序列結(jié)果用MOT軟件行數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，所用的庫(kù)為IPIHUMAN，V305。將查得的蛋白序列號(hào)在UNIPROT數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，查詢所表達(dá)的蛋白質(zhì)名稱、蛋白的作用及細(xì)胞學(xué)定位等相關(guān)信息。結(jié)果健康人3份尿液標(biāo)本中共鑒定出101種蛋白質(zhì)，通過(guò)手工驗(yàn)證，所有3份標(biāo)本共同表達(dá)了37種蛋白質(zhì)。原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者的3份尿液標(biāo)本共鑒定出73種蛋白質(zhì)，所有3份標(biāo)本中共同表達(dá)了15種蛋白質(zhì)。乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者的6份尿液標(biāo)本共鑒定出206種蛋白質(zhì)，所有6份標(biāo)本共同表達(dá)了19種蛋白質(zhì)。從乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者共有的19種蛋白質(zhì)中手工剔除檢測(cè)出的健康人及原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者尿液中也存在的蛋白質(zhì)，還剩余9種蛋白質(zhì)，它們分別是血漿銅藍(lán)蛋白、Α1抗胰凝乳蛋白酶、IGΛ鏈C區(qū)、IGΓ2鏈C區(qū)、IGΑ1鏈C區(qū)、IGΑ2鏈C區(qū)、維生素D結(jié)合蛋白、前列腺素D2合酶、未命名蛋白C9JAM6。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)利用HPLCESIMSMS技術(shù)研究了乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎患者的尿液蛋白質(zhì)譜特點(diǎn)，得到206種蛋白質(zhì)，并與健康人及原發(fā)性腎小球腎炎伴慢性乙型肝炎患者尿液蛋白譜進(jìn)行比較，尿液中有特異性表達(dá)的Α1抗胰凝乳蛋白酶、前列腺素D2合酶、血漿銅藍(lán)蛋白、維生素D結(jié)合蛋白有可能成為乙型肝炎病毒相關(guān)性腎炎的生物標(biāo)志物。

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簡(jiǎn)介：背景目前研究數(shù)據(jù)表明拉米夫定有助于改善乙肝病毒自發(fā)活動(dòng)引起的慢加急性肝衰竭的肝功能及提高短期生存率，但與長(zhǎng)期預(yù)后及耐藥有關(guān)的數(shù)據(jù)仍有限。本文旨在探索早期病毒應(yīng)答對(duì)乙肝病毒再活動(dòng)引起的慢加急性肝衰竭96周的預(yù)后及耐藥的預(yù)測(cè)作用。方法回顧性搜集140例于我科住院符合乙型肝炎病毒自發(fā)再活動(dòng)導(dǎo)致的慢加急性肝衰竭患者的臨床數(shù)據(jù)，其中76例給予拉米夫定支持治療（LAM組），64例僅給予支持治療（非核苷類似物組）。所有病人隨訪至96周或者死亡，主要的觀察終點(diǎn)為96周的生存率以及4周和12周時(shí)病毒應(yīng)答與96周預(yù)后及耐藥的關(guān)系。結(jié)果96周時(shí)LAM組累計(jì)生存率明顯高于非核苷類似物組43765658％VS9641406P0000。4周時(shí)完全病毒應(yīng)答患者96周隨訪期間其生存率明顯高于部分病毒應(yīng)答患者27299310VS16453556P0000。完全病毒應(yīng)答患者M(jìn)ELD評(píng)分明顯高于部分病毒應(yīng)答患者。二元回歸分析表明4周時(shí)完全病毒應(yīng)答及MELD評(píng)分是96周預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。隨訪結(jié)束時(shí)有12例出現(xiàn)LAM耐藥，耐藥率為2222，且都來(lái)自于4周部分病毒應(yīng)答患者。結(jié)論LAM治療明顯提高乙肝病毒再活動(dòng)引起的ACLF患者的長(zhǎng)期預(yù)后，且4周時(shí)完全病毒應(yīng)答對(duì)長(zhǎng)期的臨床預(yù)后及耐藥具有預(yù)測(cè)價(jià)值。