一株苜?；ㄈ~病毒的全基因組序列及其寄主生物學(xué)研究.pdf

1、苜?；ㄈ~病毒(Alfalfa mosaic virus,AMY)是侵染苜蓿和三葉草等豆科植物的主要植物病毒,能引起花葉,斑紋,皺縮等癥狀。本研究通過(guò)雙鏈RNA(Double-stranded RNA,dsRNA)提取和改進(jìn)的單引物擴(kuò)增技術(shù)(Modified single primer amplification technique,SPAT)于白三葉草(Trifolium repens)上分離得到一株AMV,并對(duì)分離的AMV進(jìn)行序列分析

2、和寄主生物學(xué)研究,探討該AMV與同科的黃瓜花葉病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)標(biāo)準(zhǔn)株系Fny構(gòu)建的假重組體的侵染活性。
　　 我們首先從杭州下沙采集到表現(xiàn)黃色斑紋葉的白三葉草,以此為毒源經(jīng)過(guò)汁液摩擦接種至指示植物心葉煙(Nicotiana glutinosa),發(fā)現(xiàn)該病毒能夠在心葉煙上引起感病癥狀,從心葉煙的葉組織中提取dsRNA發(fā)現(xiàn)類似AMV基因組大小的dsRNA條帶。所有dsRNA條帶通過(guò)M-SPA

3、T進(jìn)行基因擴(kuò)增,并克隆和測(cè)序獲得其全長(zhǎng)序列信息。序列分析表明從白三葉草上分離得到的病毒為AMV,命名為AMV-HZ。AMV-HZ的RNA1全長(zhǎng)3643nt,編碼1126個(gè)氨基酸序列的P1蛋白;RNA2全長(zhǎng)為2595nt,編碼804個(gè)氨基酸序列的P2蛋白;RNA3全長(zhǎng)為2041nt,編碼300個(gè)氨基酸序列的移動(dòng)蛋白和218個(gè)氨基酸序列的外殼蛋白(Coat protein,CP)。三條基因組序列信息公布于GenBank數(shù)據(jù)庫(kù),登錄號(hào)分別為H

4、Q316635、HQ316636和HQ316637。蛋白質(zhì)氨基酸序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)AMV-HZ與NCBI上公布的27個(gè)AMV株系的CP同源性高達(dá)92～99％,所有株系間的CP氨基酸序列同源性在90％以上。但在氨基酸序列比對(duì)分析中發(fā)現(xiàn)株系Caa1、Dac16、Lyh1、VRU和Lye80在67、72、84、176、212、221和214七個(gè)氨基酸位點(diǎn)上與其它株系有較大的差別。進(jìn)化分析結(jié)果可以將AMV株系分成兩個(gè)分組(Ⅰ組和Ⅱ組),株系Caa

5、1、Dac16、Lyh1、VRU和Lye80組成Ⅱ組,AMV-HZ與其它多數(shù)株系一樣屬于Ⅰ組。Ⅰ組和Ⅱ組CP堿基序列問(wèn)存在限制性酶切位點(diǎn)的差異。利用設(shè)計(jì)的AMV基因組全長(zhǎng)引物和通用探針,對(duì)AMV-HZ的侵染進(jìn)行了RT-PCR及Northern blot雜交驗(yàn)證。
　　 寄主生物學(xué)研究表明,AMV-HZ能在煙草屬植物(Nicotiana spp.)、莧色藜(Chenopodium amaranticolor)、朝天椒(Capsic

6、um frutescens var)上引起病癥,病癥隨著時(shí)間推移發(fā)生變化。在心葉煙上,典型癥狀為:系統(tǒng)性褪綠花葉,局部出現(xiàn)蝕紋和泛白斑;在本生煙(Nicotiana benthamian)上的典型癥狀為:系統(tǒng)性褪綠黃斑葉,有局部的明脈現(xiàn)象;在三生煙(Nicotiana tobacum cv.Samsun NN)上的典型癥狀是:系統(tǒng)性褪綠黃色紋狀花葉:在莧色藜上典型癥狀為:系統(tǒng)性黃色斑紋葉;在朝天椒上的典型癥狀為:系統(tǒng)性亮黃色塊斑葉,呈現(xiàn)