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文檔簡(jiǎn)介
1、傳染性脾腎壞死病毒(InfectiousSpleenandKidneyNecrosisVirus,ISKNV)屬于虹彩病毒科(Iridoviridae),近年在廣東地區(qū)流行,導(dǎo)致養(yǎng)殖鱖魚(yú)大批死亡。通過(guò)對(duì)ISKNV的全基因組測(cè)序結(jié)果分析,推定基因組中001LORF表達(dá)產(chǎn)物為膜蛋白(P001L),具有10-11個(gè)跨膜區(qū)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)PCR將001LORF的DNA序列從基因組中擴(kuò)增出來(lái)后克隆到真核表達(dá)載體PEGFP-N3上,隨后轉(zhuǎn)染FHM細(xì)胞,
2、通過(guò)熒光顯微鏡和共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)P001L除了表達(dá)于細(xì)胞膜上外,在細(xì)胞核附近的區(qū)域有較多的聚集,推測(cè)該位置是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或高爾基體上。另外為了驗(yàn)證001LORF中預(yù)測(cè)潛在的信號(hào)錨定序列,分別將001LORF氨基酸序列中1-34和1-61個(gè)潛在的信號(hào)錨定序列以及35-378、62-378和缺失了35-61位氨基酸的剩余序列克隆到PEGFP-N3載體中,通過(guò)轉(zhuǎn)染FHM(musclecelloffatheadminnow)細(xì)胞發(fā)現(xiàn)缺失了前61
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