傳染性脾腎壞死病毒VP23R、VP48R和VP92R的功能研究.pdf

1、腫大細(xì)胞病毒(Megalocytivirus)隸屬虹彩病毒科(Iridoviridae),是養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)危害最大的病毒之一,可以感染60多種淡水和海水魚(yú)類(lèi)。器官出血、腹水增多等脈管系統(tǒng)病變,是導(dǎo)致魚(yú)類(lèi)死亡的主要因?yàn)?。VP23R和VP48R是腫大細(xì)胞病毒屬病毒所共有的基因,研究表明,VP23R具有層粘連蛋白同源區(qū),VP48R隸屬VEGF家族基因,這兩個(gè)基因的功能都與脈管系統(tǒng)有關(guān)。本文對(duì)VP23R和VP48R在ISKNV感染過(guò)程中的功能進(jìn)行研究

2、。VP23R的292—576與鱖的lamininγIII2—6序列有44.5％的同源性,這個(gè)同源區(qū)是laminin與nidogen相互作用的結(jié)合位點(diǎn)。免疫熒光證實(shí)VP23R定位于被感染細(xì)胞的外膜上,但并不是病毒的囊膜蛋白。免疫共沉淀證實(shí)VP23R可以與nidogen-1相互作用。免疫組化和電鏡實(shí)驗(yàn)表明VP23R和nidogen在ISKNV感染腫大細(xì)胞外形成一個(gè)類(lèi)基底膜結(jié)構(gòu)為內(nèi)皮細(xì)胞的貼附提供位點(diǎn)；免疫組化表明腫大細(xì)胞外貼附的內(nèi)皮細(xì)胞為淋

3、巴管內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物Prox-1陽(yáng)性,證明其為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。我們構(gòu)建了缺失VP23R基因的ISKNV突變株,缺失VP23R之后的ISKNV只能在MFF-1培養(yǎng)細(xì)胞中傳代一次,表明VP23R的功能與細(xì)胞的傳代有關(guān)。為了研究VP48R基因的功能,我們構(gòu)建了缺失VP48R基因的ISKNV突變株,VP48R缺失的病毒對(duì)活體鱖組織細(xì)胞的感染率大幅度降低,免疫組化證實(shí)ISKNV感染的細(xì)胞類(lèi)型為淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞,表明VP48R的功能是作為淋巴管內(nèi)