雞傳染性貧血病毒（CIAV）VP2和VP3基因真核表達(dá)以及VP2蛋白功能的初步研究.pdf

1、本研究采用PCR技術(shù)從雞傳染性貧血病毒DNA中擴(kuò)增出VP2和VP3基因，并將二者分別克隆到pMD18-T simple vector中，經(jīng)測序證實所克隆的VP2和VP3基因與CIAV cux-1標(biāo)準(zhǔn)株相同。并將VP2和VP3基因分別亞克隆到真核表達(dá)載體pcDNA4.0和pEGFP-N1中，構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA4.0-VP2和pEGFP-VP3。將二者各自轉(zhuǎn)染BHK和293T細(xì)胞，經(jīng)Western-blotting證實，轉(zhuǎn)染的

2、真核細(xì)胞能夠表達(dá)VP2蛋白并具有良好的抗原性；經(jīng)RT-PCR和熒光觀察證實，轉(zhuǎn)染的真核細(xì)胞能夠表達(dá)VP3蛋白。 為了分析VP2是否對宿主細(xì)胞的增殖有影響，用pcDNA4.0-VP2轉(zhuǎn)染293T和BHK細(xì)胞，分別在24 h、48 h、72 h、96 h和120 h后進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，與對照組(空載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞以及未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞)相比，VP2的瞬時表達(dá)對這2種細(xì)胞的增殖沒有影響，提示雞傳染性貧血病毒的VP2基因可能不影響宿主細(xì)胞的分裂周期。

3、為研究VP2對宿主細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子NF-κB活化的影響，將pcDNA4.0-VP2與NF-κB的活化報告質(zhì)粒pNF-κB-Luc共轉(zhuǎn)染293T和BHK細(xì)胞，檢測報告基因——熒光素酶基因的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與空載體pcDNA4.0對照組相比，pcDNA4.0-VP2組的報告基因熒光素酶的表達(dá)顯著增高，表明VP2的瞬時表達(dá)可以活化轉(zhuǎn)錄因子NF-κB。 本研究結(jié)果表明，雞傳染性貧血病毒VP2基因表達(dá)對293T和BHK細(xì)胞的增殖沒有