Ⅰ型鴨肝炎病毒VP1、VPO和VP3基因的真核表達(dá).pdf

1、Ⅰ型鴨病毒性肝炎是由Ⅰ型鴨肝炎病毒引起的雛鴨高度致死性傳染病。在我國爆發(fā)的鴨肝炎主要由DHV-Ⅰ引起，給我國養(yǎng)鴨業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。但是有關(guān)DHV-Ⅰ病毒蛋白功能的研究報(bào)道較少，其中大部分還只是對(duì)其基因組結(jié)構(gòu)和蛋白組成的預(yù)測(cè)，并且還有分歧。由于分子生物學(xué)相關(guān)研究進(jìn)展非常緩慢，使得對(duì)該病的診斷和防治比較落后，本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)DHV-ⅠQV株結(jié)構(gòu)蛋白的VP1、VP0和VP3基因克隆、真核表達(dá)和免疫活性檢測(cè)的研究，為DHV-Ⅰ的診斷、分子流行

2、病學(xué)研究和新型疫苗的研制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)根據(jù)GenBank上已發(fā)表的DHV-Ⅰ基因序列設(shè)計(jì)了三對(duì)特異性引物，以QV株為模板，采用RT-PCR方法擴(kuò)增了QV株VP1、VP0和VP3編碼基因，將其分別克隆到pFastBacHTB載體上，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌Top10感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)BamHⅠ和XhoⅠ酶切鑒定及PCR鑒定，篩選出陽性重組質(zhì)粒并送測(cè)序；隨后將陽性的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)化到DH10Bac感受態(tài)細(xì)胞中，通過藍(lán)白斑篩選和PC

3、R鑒定，獲得陽性重組轉(zhuǎn)座子。在脂質(zhì)體介導(dǎo)下將獲得的重組轉(zhuǎn)座子分別轉(zhuǎn)染sf9昆蟲細(xì)胞，獲得重組桿狀病毒。將重組桿狀病毒感染的細(xì)胞收集，超聲波裂解后，進(jìn)行SDS-PAGE和Western-blot免疫學(xué)活性分析。
　　 實(shí)驗(yàn)表明，成功地克隆了DHV-Ⅰ（QV株）結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP0和VP3基因。構(gòu)建了重組桿狀病毒穿梭載體rBacmid-VP1、rBacmid-VP0和rBacmid-VP3。轉(zhuǎn)染sf9細(xì)胞后，SDS-PAGE和We