豬水泡病病毒RNA的檢測(cè)及VP1基因在原核中的表達(dá).pdf

1、豬水泡病是由豬水泡病病毒引起的豬的一種烈性傳染病，與口蹄疫和水泡性口炎等被國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織列為A類(lèi)傳染病。該病自爆發(fā)以來(lái)，受到世界各國(guó)的高度重視，國(guó)內(nèi)外對(duì)本病的診斷和檢測(cè)方法及其分子生物學(xué)特性進(jìn)行了大量的研究。為滿(mǎn)足出入境檢疫的需要，在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)病毒RNA的檢測(cè)和VP1基因的原核表達(dá)做了進(jìn)一步的研究。試驗(yàn)一RT-PCR檢測(cè)豬水泡病病毒的建立及應(yīng)用根據(jù)GenBank已發(fā)表的序列，設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，用RT-PCR及RT-nPCR

2、方法檢測(cè)SVDV的RNA，并進(jìn)行了特異性和敏感性測(cè)定。試驗(yàn)二豬水泡病病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1基因的核苷酸序列分析提取SVDV毒株的RNA，RT-PCR擴(kuò)增了包括VP1基因在內(nèi)的約872bp的DNA片段。經(jīng)純化后，與pMD18-T載體連接，轉(zhuǎn)化Escherichia coli，篩選獲得陽(yáng)性克隆菌株，采用雙脫氧DNA末端終止法測(cè)得了VP1基因的核苷酸序列，并與國(guó)內(nèi)外已發(fā)表的VP1基因序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行了比較分析。試驗(yàn)三豬水泡病病毒結(jié)構(gòu)蛋