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文檔簡介
1、研究和分析SVDV基因組一級(jí)結(jié)構(gòu)是深入研究SVDV的基礎(chǔ),通過基因重組技術(shù)表達(dá)SVDV VP2基因抗原區(qū)的蛋白,為建立以重組蛋白為檢測(cè)抗原的豬水皰病診斷方法奠定了基礎(chǔ).該研究包括以下兩方面的內(nèi)容:1.SVDV基因組全序列分析應(yīng)用RT-PCR技術(shù)獲得SVDV HK'70分離株覆蓋全基因組的6個(gè)cDNA片段,序列測(cè)定后得到全序列.此序列經(jīng)計(jì)算機(jī)分析后表明,該毒株基因組全序列長度為7401nt(polyA尾巴除外),大開放閱讀框架的長度為6
2、555nt,編碼一條由2 185個(gè)氨基酸組成的多聚蛋白.5'NCR和3'NCR(poly A尾除外)長度分別為743nt和103nt,1A,1B,1C,1D的長度分別為207nt,783nt,714nt和849nt,2A,2B,2C的長度分別為450nt,297nt和987nt,3A,3B,3C,3D的長度分別為267nt,66nt,549nt和1386nt.序列比較結(jié)果表明,HK'70與己發(fā)表的SVDVJ1'73,SVDV H/3'7
3、6,SVDV(Seerchurn.P等測(cè)株),SVDV NET/1/92等株的核苷酸序列同源性分別為98.4%,98.2%,98.2%和91.0%;與柯薩奇病毒CVB1,CVB2,CVB3,CVB4,CVB5,CVB6的核苷酸序列同源性為76.0%~80.4%.與SVDV J1'73,SVDV H/3'76,SVDV(Seerchurn.P等測(cè)株),SVDV NET/1/92等毒株氨基酸序列同源性分別為98.9%,98.9%,99.0%
4、和96.9%;與柯薩奇病毒CVB1,CVB2,CVB3,CVB4,CVB5,CVB6的氨基酸序列同源性為88.4%~95.3%.2.SVDV VP2基因在大腸桿菌中的表達(dá)應(yīng)用RT-PCR技術(shù),以SVDV HK'70為材料,擴(kuò)增出結(jié)構(gòu)蛋白VP2基因.酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并與表達(dá)載體pGEX 4T-1連接,轉(zhuǎn)化BL21菌體并提質(zhì)粒,將經(jīng)酶切,PCR鑒定為陽性的重組質(zhì)粒命名為pGEX-VP2.檢測(cè)結(jié)果表明,目的基因插入的位置、大小和讀碼框均正確
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