O型口蹄疫病毒VP1蛋白的原核表達(dá)及反應(yīng)原性檢測.pdf

1、根據(jù)GenBank中已發(fā)表的FMDV毒林VP1的基因序列，設(shè)計并合成一對能擴(kuò)增639bp基因片段引物，引物兩端分別加BamH I和Not I酶切位點。用PCR的方法擴(kuò)增得到VP1基因，將其克隆到pMD18-T Vector進(jìn)行序列測定。用分子生物學(xué)軟件對本試驗測定的FMDV VP1基因序列與GenBank已公布的O型FMDV VP1基因序列進(jìn)行同源性比較，結(jié)果顯示擴(kuò)憎到的VP1基因序列與GenBank已公布的O型FMDV VP1的基因序

2、列的同源性較高均在93％以上，其中與CHA株、LAO林、MOG株和RUS株同源性在98％以上。對重組克隆質(zhì)粒PTVP1進(jìn)行雙酶切得到639bp的目的片段，將其以正確閱讀框架定向插入pET-32a(+)中，然后轉(zhuǎn)化至E.colI BL21 DE3)，于30℃以1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)VP1基因得到了高效表達(dá)，且表達(dá)產(chǎn)物分子量約為48KD。 將高效表達(dá)的目的蛋白經(jīng)超聲波裂解，取沉淀和上清分別進(jìn)行可溶性分析，發(fā)現(xiàn)表達(dá)蛋白以包