重組口蹄疫病毒VP1-VP4蛋白誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答研究.pdf

1、口蹄疫(foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMD virus，F(xiàn)MDV)感染偶蹄獸所引起的一種急性、發(fā)熱性、高度接觸性傳染病。目前本病尚無有效的預(yù)防控制措施。清除病毒感染需要活化的CD8+T細(xì)胞、Th1應(yīng)答與高水平的中和抗體，但對于外源性抗原，則需要CD8α+DCs以抗原交叉提呈的方式激活CD8+T細(xì)胞。體外實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，被A型清道夫受體(SR-A)抑制劑處理的樹突狀細(xì)胞(DCs)提呈重組FMDV結(jié)構(gòu)蛋白

2、VP1-VP4的能力非但沒有被抑制，反而還顯著增強(qiáng)，這表明SR-A識別VP1-VP4對DCs啟動的細(xì)胞免疫應(yīng)答具有負(fù)調(diào)節(jié)作用。據(jù)此，我們給小鼠腹腔注射番瀉苷B或單寧酸以阻斷SR-A與VP1-VP4的結(jié)合，靜脈注射細(xì)胞色素C以清除小鼠體內(nèi)的CD8α+DCs，然后分別給上述小鼠皮下注射VP1-VP4與IMS251cVG佐劑混合所制成的試驗疫苗，并以單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白或商用口蹄疫滅活疫苗為對照，通過檢測各組小鼠血清IFN-γ與IL-4

3、的含量和抗體效價與各類型抗體的含量，以揭示SR-A和CD8α+DCs在機(jī)體產(chǎn)生抗FMDV免疫應(yīng)答中的作用。
　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白組小鼠血清IFN-γ與IL-4的含量均比注射商用滅活口蹄疫疫苗組低，其中IFN-γ含量降低比較顯著(P＜0.05)，而IL-4的降低不顯著(P＞0.05)。與單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白對照組相比，SR-A抑制劑番瀉苷B處理組小鼠血清IL-4含量的下降顯著(P＜0.05)，而IFN-γ含

4、量下降不顯著(P＞0.05)。與單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白組相比，體內(nèi)CD8α+DCs清除組小鼠血清IFN-γ和IL-4的含量均有所降低，但I(xiàn)L-4含量下降明顯（P＜0.05），而IFN-γ含量下降不明顯(P＞0.05)。
　　通過對小鼠血清抗體含量的檢測發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白組相比，SR-A抑制劑處理組小鼠和體內(nèi)CD8α+DCs清除組小鼠血清總的抗體效價均降低，除單寧酸組差異不顯著外(P＞0.05)，其余各組均差異顯

5、著（P＜0.05）。比較單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白和商用滅活口蹄疫疫苗組，發(fā)現(xiàn)VP1-VP4免疫組血清的抗體效價低于商用滅活口蹄疫疫苗組，但差異不顯著(P＞0.05)。
　　通過檢測血清抗體類型發(fā)現(xiàn)，與單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白組相比，SR-A抑制劑處理組小鼠血清中IgG1、IgG2b、κ型與λ型輕鏈的含量均降低，而IgG2a、IgG3、IgA與IgM的含量均升高，除IgA差異顯著(P＜0.05)外，其他類型抗體含量的差異都不顯著

6、（P＞0.05）。與單獨(dú)注射VP1-VP4蛋白組相比，體內(nèi)CD8α+DCs清除組小鼠血清IgG1、IgG2b、IgG3、IgM、κ型與λ型輕鏈的含量均降低，除κ輕鏈的含量降低顯著(P＜0.05)，λ輕鏈含量的降低極顯著(P＜0.01)外，IgG1、IgG2b、IgG3與IgM的含量降低均不顯著(P＞0.05);IgG2a與IgA的含量均升高，但兩組相比差異不顯著(P＞0.05)。
　　以上結(jié)果表明，重組FMDV蛋白VP1-VP4在

7、體內(nèi)可被CD8α+DCs以SR-A識別，并主要通過MHC-Ⅱ類分子途徑激活CD4+T細(xì)胞，產(chǎn)生以IL-4為特征的細(xì)胞免疫應(yīng)答。由于注射SR-A抑制劑和清除CD8α+DCs所產(chǎn)生的效果非常相似，所以CD8α+DCs可能是表達(dá)SR-A的主要細(xì)胞，同時也是番瀉苷B和單寧酸發(fā)揮藥理學(xué)作用的主要靶細(xì)胞。由于口蹄疫病牛體內(nèi)IL-4的表達(dá)量高于健康牛，而抑制SR-A或清除體內(nèi)CD8α+DCs均可使IL-4水平顯著降低，并使IgA水平顯著升高，所以將番