利用轉(zhuǎn)基因胡蘿卜表達(dá)口蹄疫病毒結(jié)構(gòu)蛋白VP1.pdf

1、口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是偶蹄動物一種急性、發(fā)熱性、高度接觸性傳染病,目前尚無一種十分有效的方法進(jìn)行防治.利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)可以直接口服的疫苗來防治該病具有十分廣闊的前景.胡蘿卜種植廣泛,易于組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化,可以生食,對人類特別是嬰幼兒較為理想,是生產(chǎn)口服疫苗理想的"生物反應(yīng)器".該實(shí)驗(yàn)以胡蘿卜為轉(zhuǎn)化受體,研究了口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)結(jié)構(gòu)蛋白

2、VP1基因在轉(zhuǎn)基因胡蘿卜中的表達(dá)情況,為進(jìn)一步研究利用轉(zhuǎn)基因植物生產(chǎn)口服疫苗和研制防御口蹄疫的新型疫苗提供了一條新途徑.該實(shí)驗(yàn)選用三個胡蘿卜(Daucus carota L.var.sativa)栽培品種金筍五寸、Carol和改良黑田七寸,以它們的下胚軸和子葉為外植體,首先建立了高效的再生體系.在此基礎(chǔ)上,以Carol的下胚軸和愈傷組織為受體材料,利用根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo),轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pBI121,實(shí)現(xiàn)了外源報告基因GUS在胡蘿卜中

3、的瞬間表達(dá)和穩(wěn)定表達(dá).在成功地構(gòu)建了攜帶有FMDV結(jié)構(gòu)蛋白VP1基因的植物表達(dá)載體pBFMDV后,利用根癌農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo),將FMDV VP1基因?qū)牒}卜細(xì)胞中,經(jīng)PCR和PCR-Southern雜交等方法的鑒定,確認(rèn)FMDV VP1基因已整合到胡蘿卜染色體中.SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步證明了在轉(zhuǎn)化苗中有目的基因的表達(dá).Western-blotting結(jié)果進(jìn)一步確認(rèn)了目的基因在轉(zhuǎn)化苗中的表達(dá).Dot-ELISA和ELISA實(shí)