布魯氏菌強啟動子的篩選及重組口蹄疫病毒VP1基因的表達(dá).pdf

1、布魯氏菌病（Brucellosis，簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N重要的人獸共患病，2012年我國國務(wù)院印發(fā)了《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃（2011-2020年）》，將布病列為優(yōu)先防治的國內(nèi)16種動物疫病之一，并作為當(dāng)前防控工作的重中之重。該病對畜牧業(yè)和人類健康均構(gòu)成嚴(yán)重威脅，使用疫苗免疫是防控布氏菌病的重要措施之一。
　　目前，我國用于控制布病的疫苗主要是S2株（豬型2號苗），其具有毒力較弱、免疫效果良好、安全性高等特點。布魯

2、氏菌能夠引起機體強烈的Th1型免疫應(yīng)答，這使得布魯氏菌成為理想的異源性抗原載體，為了開發(fā)出能高效表達(dá)外源基因的布魯氏菌活載體疫苗，在本課題中我們首先使用綠色熒光蛋白作為報告基因，將布魯氏菌組成型啟動子Psod、Pdnaj和Pdnak分別克隆入YGT-pBBR1mcs2，得到重組表達(dá)載體YGT-pBBR1mcs2-Pdnaj、YGT-pBBR1mcs2-Psod和YGT-pBBR1mcs2-Pdnak并轉(zhuǎn)化至布魯氏菌。熒光顯微鏡檢測GFP

3、蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明，3種不同強度的啟動子均能在布魯氏菌S2中啟動GFP基因的表達(dá)且啟動能力由強到弱依次為：Pdnak、Pdnaj、Psod。
　　口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病可引起偶蹄類動物的口、足等部位皮膚出現(xiàn)水泡而造成部份動物死亡，嚴(yán)重影響畜牧產(chǎn)業(yè)的發(fā)

4、展。VP1蛋白是FMDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白，是病毒感染細(xì)胞的關(guān)鍵，具有與細(xì)胞受體結(jié)合的位點?？谔阋遃P1蛋白可作為研制口蹄疫基因工程疫苗的首選抗原。
　　本研究以豬種布魯氏菌S2株為親本株，利用蔗糖自殺質(zhì)粒載體，將FMDV的VP1基因表達(dá)框部分替代了布魯氏菌wboA基因，成功構(gòu)建了重組口蹄疫病毒VP1基因的布魯氏菌病活疫苗。使用熒光定量PCR的方法對重組菌的VP1基因的轉(zhuǎn)錄情況進行檢測，發(fā)現(xiàn)VP1基因在宿主菌內(nèi)有顯著的轉(zhuǎn)錄變化，說明口