菊花高頻再生體系建立及根癌農桿菌介導遺傳轉化體系的優(yōu)化.pdf

1、菊花(Dendranthemamorifolium)是多年來經(jīng)過人工培育和天然種間雜交而來，高度雜合及多倍化和種下變異機制是菊花品種豐富性的來源。菊花的品種多，葉、花型、瓣型變化很大，是色、香、姿、韻俱佳的我國傳統(tǒng)名花，與梅、蘭、竹共稱為“花卉四君子”，菊花不僅受國人的珍惜和推崇，而且也受到世界各國的關注和喜愛。多年來常規(guī)育種方法在菊花育種中已經(jīng)取得巨大成就，但其存在著不能利用其它物種基因資源的局限性。隨著菊花遺傳轉化體系的建立發(fā)展、外

2、源基因在細胞中的表達、轉化方法的進步等，定向修飾它的某些目標性狀并保留原有性狀，使其在花色、花期、花型、抗性等方面都得到了極大的改觀和發(fā)展。由于國內外菊花品種分類標準存在的差異，國外文獻報道的一些菊花品種的遺傳轉化的體系并不適合我國的一些傳統(tǒng)菊花品種，因此研究適合我國菊花品種的遺傳轉化體系有十分重要的意義。 本研究以菊花(Dendranthemamorifolium)‘黃冠’、‘久米榮’、‘山城之光’、‘冬桔’四個品種為試驗材料

3、，利用9種分化培養(yǎng)基，研究了不同基因型，不同激素濃度配比，預培養(yǎng)時間，不同外植體類型對菊花愈傷組織誘導、不定芽發(fā)生的影響。優(yōu)化了菊花的再生條件，獲得了菊花葉片的高效再生體系。結果表明葉片最適分化培養(yǎng)基分別為：‘黃冠’MS+6BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；‘久米榮’MS+6BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L；‘山城之光’MS+6BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L；‘冬桔’MS+6BA2.0mg/L+NAA0.2mg

4、/L。比較四個品種的再生能力，發(fā)現(xiàn)‘黃冠’，‘久米榮’相當，最高再生率能達到100.0﹪，‘山城之光’為95.9﹪，‘冬桔’最差為90.6﹪。 在建立了四個菊花品種高頻再生體系的基礎上，利用根癌農桿菌介導的遺傳轉化法進行遺傳轉化研究。比較了四個菊花品種分別在被三種的農桿菌侵染后的轉化效率差異。將供試的四個菊花品種分別確定了卡那霉素選擇壓力，頭孢霉素濃度，菌液濃度，侵染時間，共培養(yǎng)時間，延遲篩選時間，不同農桿菌菌株的影響，生根篩選

5、濃度等因素，得出四個菊花品種‘黃冠’、‘冬桔’、‘山城之光’、‘久米榮’的卡那霉素選擇壓力分別為20mg/L，30mg/L，30mg/L，40mg/L；頭孢濃度確定為100mg/L；菌液濃度OD600=0.5；侵染時間為20min；共培養(yǎng)時間為2天；延遲篩選時間為4天；生根篩選濃度為1/2MS+15mg/LKM。通過以上因素的確定，得出了品種黃冠在被三種根癌農桿菌菌株侵染后能獲得最大再生率，品種山城之光最差。農桿菌菌株LBA4404對四