菊花高頻再生體系建立及農(nóng)桿菌介導FT基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、菊花是原產(chǎn)于我國的十大名花之一,但是絕大多數(shù)品種的菊花自然花期集中在11月左右,能夠在夏季或早秋開花的只有少數(shù)花色單調(diào)、花型較小的品種。因此菊花的生產(chǎn)發(fā)展因為其花期問題受到了嚴重制約。FT基因是一個激酶抑制蛋白,可以通過對CO對FT的調(diào)節(jié)促進開花。本試驗旨在通過對菊花高效再生體系及根癌農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化體系的研究,將Fr基因?qū)氲骄栈ㄆ贩N‘神馬’中,以期獲得花期提前的菊花新品種,并為廣泛運用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改良菊花品種打下基礎(chǔ)。
　　

2、本研究以菊花品種‘神馬’為試驗材料。研究了不同激素濃度配比對菊花直接誘導不定芽再生以及對生根誘導的影響,對菊花的再生條件進行了優(yōu)化,從而獲得了菊花葉片高速快效的再生體系。試驗結(jié)果表明,將菊花‘神馬’葉盤接種在MS+NAA1mg／L+6-BA1mg／L培養(yǎng)基上,經(jīng)過20天的組織培養(yǎng)后,可直接再生出不定芽,而且再生率高達95.5％,再生芽在1／2MS+NAA0.7mg／L培養(yǎng)基上經(jīng)過10天左右可誘導出根,生根率可達100％。在菊花品種‘神馬

3、’高效再生體系建立的基礎(chǔ)上,利用根癌農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化法對其遺傳轉(zhuǎn)化進行了研究。研究結(jié)果表明,葉盤預培養(yǎng)時間、侵染時間、共培養(yǎng)時間以及延遲培養(yǎng)時間均對菊花的遺傳轉(zhuǎn)化效率有較大影響。同時得出經(jīng)過預培養(yǎng)12h的葉盤置于菌液侵染5min,黑暗共培養(yǎng)3d；延遲篩選3d時菊花遺傳轉(zhuǎn)化率最高。共培養(yǎng)后將葉盤接種到MS+NAA1mg／L+-6-BA1mg／L+Km20mg／L培養(yǎng)基上進行抗性芽的篩選培養(yǎng)。25天后可直接分化出不定芽,當不定芽長到1-