馬鈴薯再生體系建立及農(nóng)桿菌介導AcInv反義基因轉(zhuǎn)化.pdf

1、低溫貯藏會引起馬鈴薯塊莖還原糖積累，不僅使淀粉含量減少，導致出粉率降低，而且用于薯片(條)加工原料時，在高溫油炸過程中出現(xiàn)褐化反應，嚴重影響到產(chǎn)品的品質(zhì)。因此，培育抗低溫糖化的加工專用型品種是目前馬鈴薯育種的重要目標之一。將AcInv反義基因?qū)腭R鈴薯品種，通過反義抑制塊莖內(nèi)源AcInv的產(chǎn)生，達到降低塊莖還原糖含量積累的策略，是培育抗低溫糖化馬鈴薯品種的一條重要途徑。本試驗選用甘肅省農(nóng)業(yè)科學院培育的6個優(yōu)良加工型品種(系)，對其再生體

2、系和農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化體系進行了研究，取得的主要研究結(jié)果如下： 1.以莖段和微型薯為外植體，建立了6個馬鈴薯品種(系)的再生體系。適合6個品種的莖段愈傷誘導培養(yǎng)基分別是：隴薯3號、隴薯4號和L0031-17為MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.5mg/L+GA35mg/L+2,4-D1mg/L，隴薯5號和隴薯6號為MS+6-BA2.5mg/L+NAA0.5mg/L+GA32.5mg/L+2,4-D0.5mg/L，LK99為MS

3、+6-BA2.5mg/L+NAA1mg/L；分化培養(yǎng)基分別是：隴薯3號、隴薯6號和L0031-17為MS+6-BA3.5mg/L+NAA1mg/L+GA310mg/L，隴薯4號和隴薯5號為MS+6-BA3.5mg/L+NAA1mg/L+GA32.5mg/L，LK99為MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+GA310mg/L；薯片再生培養(yǎng)基為MS+ZT2mg/L+IAA1mg/L。所研究的6個品種中，隴薯3號、隴薯5號和隴薯

4、6號的再生能力較強，而LK99和L0031-17的再生能力較弱。 2.對農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化體系研究表明，6個品種(系)的莖段和薯片不經(jīng)預培養(yǎng)階段，直接進行農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)化效率要高于預培養(yǎng)處理。農(nóng)桿菌侵染時間和共培養(yǎng)時間因外植體類型不同而異。莖段外植體侵染時間以10min、共培養(yǎng)時間為3d為宜，而薯片侵染時間以5min、共培養(yǎng)時間2d效果較佳。在共培養(yǎng)基中加入50umol/L乙酰丁香酮(AS)，能明顯提高莖段外植體的愈傷率和分化

5、率，但對薯片轉(zhuǎn)化效率的影響甚微。不同生長階段的外植體對卡那霉素(Kan)的敏感性不同，誘導愈傷組織和誘導芽分化階段以50mg/L的選擇壓較為適宜，抗性再生芽生根階段以75mg/L為宜。通過自然光培養(yǎng)和人工氣候箱培養(yǎng)條件下的轉(zhuǎn)化效果比較，發(fā)現(xiàn)自然光培養(yǎng)下莖段和薯片的分化率分別比氣候箱培養(yǎng)下高4.65﹪和7.58﹪；自然光下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)化外植體分化的芽叢生，但較細弱；相反的，人工氣候箱培養(yǎng)下分化芽較為粗壯，但叢生芽較少。 3.分別用含p