農(nóng)桿菌介導(dǎo)的百合ACO反義基因轉(zhuǎn)化東方百合‘索邦’的研究.pdf

1、百合是世界著名的球根花卉和鮮切花花卉，在世界花卉市場中占有極其重要的位置。百合作為一種呼吸躍變型花卉，在開花過程中伴隨著乙烯的大量釋放而迅速衰老，如能有效控制百合花期乙烯生成量即可延長其觀賞壽命，增加百合的觀賞價值。 本研究以東方百合‘索邦’為材料，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將百合ACO反義基因?qū)虢M培苗的鱗莖及葉柄組織。通過GUS基因組織化學(xué)染色、PCR、基于梯狀回收的PCR法及Southern雜交等檢測方法對外源基因?qū)肭闆r進(jìn)行鑒

2、定。并對組培苗進(jìn)行移栽試驗。獲得以下研究成果： 1、通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ACO反義基因?qū)霒|方百合‘索邦’。獲得潮霉素抗性植株165株。 2、優(yōu)化了本實驗室建立的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的轉(zhuǎn)化百合的遺傳轉(zhuǎn)化體系。外植體不經(jīng)預(yù)培養(yǎng)，侵染時抽真空1 min，侵染30 min，菌液濃度OD=0.8，共培養(yǎng)7天可獲得1 5.76％的轉(zhuǎn)化率。 3、應(yīng)用GUS基因組織化學(xué)法檢測、PCR檢測、基于梯狀膠回收的PCR和Southern

3、雜交等轉(zhuǎn)基因檢測方法對轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行檢測。獲得PCR.檢測陽性植株26株，對其中4個植株進(jìn)行了Southern雜交檢測和1個植株的PCR-Southem雜交檢測獲得PCR-Southern陽性植株1株。 4、研究了潮霉素篩選時間對農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化的百合植株體內(nèi)外源基因的影響，確定持續(xù)抗生素篩選對轉(zhuǎn)化植株的作用。 5、對東方百合‘索邦’組培苗的進(jìn)行煉苗移栽，移栽苗成活率達(dá)92.4％。篩選出較適宜‘索邦’組培苗移栽的基質(zhì)為珍珠