農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆轉(zhuǎn)化體系的建立及植酸酶基因的導(dǎo)入.pdf

1、大豆是我國(guó)重要的油料作物和糧飼兼用作物，是植物蛋白的重要來(lái)源。近年來(lái)，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，許多學(xué)者通過(guò)基因工程的手段來(lái)改良大豆品質(zhì)、提高大豆產(chǎn)量。本研究以大豆的子葉節(jié)為外植體，探討了影響大豆再生效率的主要因素，建立了子葉節(jié)的再生體系;通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法將植酸酶（Phy）基因?qū)胄×６怪校芯坑绊懫滢D(zhuǎn)化的主要因素，初步建立大豆遺傳轉(zhuǎn)化體系，并獲得了經(jīng)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性的轉(zhuǎn)基因植株。主要工作和結(jié)果如下:
　　1、大豆子葉節(jié)再生體系

2、的建立
　　(1)種子消毒方法的確定:比較了3種不同種子消毒方法，氯氣消毒法對(duì)種子的傷害比較小，污染率低，適合大豆種子的消毒。
　　(2)最適苗齡的篩選:不同苗齡的大豆子葉節(jié)誘導(dǎo)叢生芽能力存在顯著差異，無(wú)菌苗萌發(fā)4d時(shí)，叢生芽誘導(dǎo)率最高，為88.9％，因此子葉節(jié)轉(zhuǎn)化的最適苗齡為4d。
　　(3)大豆基因型的篩選:不同基因型的大豆再生能力差異較大，供試的5個(gè)不同基因型大豆，芽誘導(dǎo)率在24％-84％之間，其中小粒豆芽誘導(dǎo)率

3、最高，因此將小粒豆作為進(jìn)一步轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)材料。
　　(4)6-BA濃度的確定:6-BA濃度直接影響無(wú)菌苗的萌發(fā)及叢生芽的誘導(dǎo)，萌發(fā)培養(yǎng)基中添加1 mg/L6-BA時(shí)無(wú)菌苗長(zhǎng)勢(shì)最佳，芽誘導(dǎo)階段最適6-BA誘導(dǎo)叢生芽濃度為1.67 mg/L。
　　(5)生根階段IBA或NAA濃度的確定:生根階段添加IBA、NAA均可以顯著提高生根率，添加1 mg/L的IBA最適合小粒豆不定芽的生根。
　　2、Phy基因轉(zhuǎn)化大豆
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