農(nóng)桿菌介導(dǎo)‘蜂蜜罐’棗上胚軸和子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立及Bt基因的轉(zhuǎn)化.pdf

1、棗樹是我國重要的經(jīng)濟(jì)樹種之一，具有抗旱、耐瘠薄、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，并且棗樹果實(shí)營養(yǎng)豐富，深受大眾喜愛。棗樹雜交育種由于工作量大、育種周期長，極大地限制了棗樹的栽培發(fā)展，與此同時，棗尺蠖、棗粘蟲、棗桃小食心蟲、黃刺蛾等常見害蟲也極大地制約了棗樹的生產(chǎn)栽培。棗樹蟲害研究的需求，隨著棗樹種植面積的一步步擴(kuò)大，棗樹蟲害一步步地蔓延和加重，也在慢慢地擴(kuò)大和延伸。
　　現(xiàn)代分子生物技術(shù)，尤其是植物組織培養(yǎng)和基因工程的發(fā)展，為棗樹定向改良和新品種

2、選育提供了重要的技術(shù)支持；而轉(zhuǎn)基因技術(shù)的出現(xiàn)為快速培育棗樹抗蟲新種質(zhì)提供了可能。本試驗(yàn)以‘蜂蜜罐’棗胚培苗上胚軸和子葉為試驗(yàn)材料，進(jìn)行根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化，通過比較不同處理的GUS瞬時表達(dá)率，研究了不同的預(yù)培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度和侵染方式對轉(zhuǎn)化效率的影響，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)上胚軸和子葉的遺傳轉(zhuǎn)化體系；在此基礎(chǔ)上，以‘蜂蜜罐’棗上胚軸、子葉和葉片為外植體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行Bt基因的轉(zhuǎn)化研究，為遺傳轉(zhuǎn)

3、化培育抗蟲新種質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　1.不同外植體Kan敏感性試驗(yàn)
　　以上胚軸和子葉為外植體，探究了不同濃度Kan對愈傷組織形成和不定芽再生的影響。結(jié)果表明，50mg/L Kan為抑制上胚軸和子葉再生的最適濃度。
　　2.上胚軸和子葉遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
　　通過比較GUS瞬時表達(dá)率，確定了預(yù)培養(yǎng)時間、菌液濃度、侵染時間、共培養(yǎng)時間、乙酰丁香酮濃度和侵染方式的最適處理。結(jié)果表明，以上胚軸為外植體時

4、，菌液濃度OD600為0.5，采用真空輔助侵染10min，共培養(yǎng)培養(yǎng)基添加20mg/L乙酰丁香酮，共培養(yǎng)3d后GUS瞬時表達(dá)率最高，為最佳轉(zhuǎn)化體系；以子葉為外植體，預(yù)培養(yǎng)3d，菌液濃度OD600為0.5，采用真空輔助侵染10min，共培養(yǎng)培養(yǎng)基添加10mg/L乙酰丁香酮，共培養(yǎng)3d后GUS瞬時表達(dá)率最高，為最佳遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　3.農(nóng)桿菌介導(dǎo)‘蜂蜜罐’棗不同外植體Bt基因的轉(zhuǎn)化
　　分別以上胚軸、子葉和葉片為外植體，通過農(nóng)