農(nóng)桿菌介導(dǎo)TCS基因?qū)氪蠖沟倪z傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、大豆是重要的糧食、油料作物，是植物蛋白和油脂的重要來源。在大豆生長期，病蟲害的發(fā)生，嚴(yán)重影響其產(chǎn)量和質(zhì)量。天花粉蛋白(TCS)是從葫蘆科藥用植物栝樓塊根中分離得到的單鏈核糖體失活蛋白，能夠抗煙草花葉病毒等7種病毒、稻瘟病菌等9種病原真菌及蚜蟲等4類害蟲。利用基因工程手段將抗病蟲基因轉(zhuǎn)入大豆，具有重要的經(jīng)濟(jì)意義。
　　本研究以大豆子葉節(jié)為受體材料，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法成功地將外源天花粉蛋白基因?qū)肓嗽撌荏w中，為大豆的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性育種提

2、供了理論基礎(chǔ)和研究材料。主要研究結(jié)果如下：
　　以10個(gè)大豆品種為材料，篩選得到了再生頻率較高的大豆基因型為合豐35、合豐25和黑農(nóng)35。確定了不同基因型大豆的潮霉素篩選濃度，子葉節(jié)分化適宜篩選濃度黑農(nóng)35為6mg/L、合豐35和合豐25為4mg/L;叢生芽生根篩選濃度黑農(nóng)35和合豐35為2mg/L、合豐25為1mg/L。
　　以再生率最高的大豆品種合豐35子葉節(jié)為材料，優(yōu)化農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的影響因素，探討了預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、菌液濃

3、度、侵染時(shí)間等條件對轉(zhuǎn)化效率的影響，得出大豆遺傳轉(zhuǎn)化的較優(yōu)條件:子葉節(jié)外植體預(yù)培養(yǎng)24h，采用OD600為0.4-0.6的農(nóng)桿菌菌液侵染30min，共培養(yǎng)3d，遺傳轉(zhuǎn)化效果最好。
　　對篩選出的3個(gè)大豆品種，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將天花粉蛋白基因?qū)肫浣M織中，進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，共獲得44株抗性植株，PCR檢測呈陽性的有29株。其中合豐35有19株檢測呈陽性，轉(zhuǎn)化率為1.03％;合豐25有7株檢測呈陽性，轉(zhuǎn)化率為0.51％;黑農(nóng)35有3株檢測