農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菘藍(lán)遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、菘藍(lán)（Isatis indigotica Fortune）為十字花科菘藍(lán)屬二年生草本植物，是我國傳統(tǒng)的中藥材。本研究探討了菘藍(lán)遺傳轉(zhuǎn)化過程中幾個(gè)因素對(duì)對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響，并將P35-Iap、Ace-Tlp基因轉(zhuǎn)入菘藍(lán)，對(duì)轉(zhuǎn)Bar、Cry1C基因的后代進(jìn)行了PCR、RT-PCR、Basta噴灑、Bar試紙條鑒定、Southern雜交。
　　主要研究結(jié)果如下:
　　1.對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)菘藍(lán)的遺傳轉(zhuǎn)化過程中不同的浸染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、乙

2、酰丁香酮(AS)濃度進(jìn)行探討。研究結(jié)果表明，浸染10min，共培培養(yǎng)基中添加200μmol/LAS共培60h Basta抗性率最高。
　　2.將抗病基因P35-Iap、Ace-Tlp轉(zhuǎn)入菘藍(lán)獲得了T0植株，移栽成活46株，PCR檢測(cè)有28株為陽性，陽性率達(dá)到60.87％，為抗病檢測(cè)提供了材料基礎(chǔ)。
　　3.對(duì)轉(zhuǎn)Bar基因菘藍(lán)的T1代植株進(jìn)行Bar試紙條檢測(cè)，并與PCR結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，吻合度可以達(dá)到72％。
　　4.經(jīng)RT

3、-PCR檢測(cè)，轉(zhuǎn)抗病基因T0代菘藍(lán)有7株有Bar基因表達(dá)，9個(gè)轉(zhuǎn)cry1C基因菘藍(lán)的T1代均有Bar基因表達(dá)，其中有6個(gè)有Cry1C基因的表達(dá)。
　　5.對(duì)未轉(zhuǎn)基因的菘藍(lán)進(jìn)行Basta噴灑，確定400mg/L Basta可以區(qū)分轉(zhuǎn)基因與非轉(zhuǎn)基因植株。使用該濃度噴灑轉(zhuǎn)基因菘藍(lán)，從60株轉(zhuǎn)Bar基因T1菘藍(lán)中篩選得到28株抗性植株，經(jīng)PCR檢測(cè)均為陽性。
　　6.使用ELISA試劑盒檢測(cè)Cry1C蛋白的含量，最高可達(dá)204.77