農(nóng)桿菌介導(dǎo)TCS基因轉(zhuǎn)入山新楊的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、山新楊（Populus davidiana×P.bollena）是我國(guó)多名育種專家耗時(shí)近半個(gè)世紀(jì)培育出的白楊派新品種，是由新疆楊為父本、山楊為母本雜交而成，是繼銀中楊后又一被廣泛推廣的優(yōu)良樹種，隨著山新楊的廣泛栽培，病蟲害的發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，其抗性育種顯得尤為迫切。采用基因工程技術(shù)開展轉(zhuǎn)基因楊樹的研究，是培育抗逆、抗蟲和抗病楊樹新品種的有效途徑。本研究將來(lái)自植物栝摟的具有抗真菌和病毒作用的天花粉蛋白基因通過(guò)根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入山新楊基因組

2、內(nèi)，使其獲得抗真菌和病毒的能力，培育出優(yōu)良抗性樹種。主要研究結(jié)果如下：
　　利用凍融法將質(zhì)粒pC-tPro-TCS-GUS和pC-tPro-TCS轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，制備一定量的工程菌。通過(guò)敏感性試驗(yàn)，確定了山新楊遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中抑菌性抗生素頭孢噻肟鈉適宜濃度為500mg/L，選擇性抗生素潮霉素抑制葉片分化和芽生根的濃度為2mg/L，抑制莖段生根濃度為6mg/L。
　　以生長(zhǎng)20d左右的健壯的山新楊組培苗葉片為材料

3、，探討了預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、菌液濃度和侵染時(shí)間等條件對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響，得出山新楊遺傳轉(zhuǎn)化的較優(yōu)條件為預(yù)培養(yǎng)時(shí)間2d，侵染菌液濃度OD600=0.2，侵染時(shí)間5min;共培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基pH值為5.8，AS濃度為200μmol/L，培養(yǎng)3d;脫菌培養(yǎng)基中加入3mg/L硝酸銀抑菌效果較好;篩選采用延遲篩選，延遲選擇時(shí)間為一周。
　　利用優(yōu)化的農(nóng)桿菌介導(dǎo)山新楊遺傳轉(zhuǎn)化體系，得到了7株抗性植株，通過(guò)PCR分子檢測(cè)，出現(xiàn)了特異性擴(kuò)增條帶，而陰性對(duì)照沒(méi)有