黃芪多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)鯉魚(yú)肝(細(xì)胞)損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目前，由于環(huán)境污染，高蛋白、高脂肪或霉變飼料的使用、抗生素和殺蟲(chóng)劑的濫用等因素引起的魚(yú)類肝膽綜合癥在全國(guó)許多地區(qū)頻繁發(fā)生，造成了鯉、鯽、草魚(yú)、團(tuán)頭魴和青魚(yú)等多種魚(yú)類的大面積死亡，死亡率高達(dá)60-90％，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。因此，篩選保肝藥物對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖具有十分重要的意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立體內(nèi)和體外兩種急性肝損傷模型，探討了黃芪多糖(APS)對(duì)四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)鯉魚(yú)的肝（細(xì)胞）損傷的保護(hù)和抗氧化應(yīng)激的影響。主要研究?jī)?nèi)

2、容和結(jié)果如下:
　　 1鯉魚(yú)肝細(xì)胞原代培養(yǎng):通過(guò)不同的分離方法和培養(yǎng)條件探索鯉魚(yú)肝細(xì)胞的原代培養(yǎng)，以建立穩(wěn)定的鯉魚(yú)肝細(xì)胞原代培養(yǎng)模型，同時(shí)觀察長(zhǎng)期培養(yǎng)過(guò)程中肝細(xì)胞的形態(tài)變化。結(jié)果顯示:組織塊貼壁培養(yǎng)4-5天后細(xì)胞從組織塊中遷出并增殖;機(jī)械分散法收集的細(xì)胞少，細(xì)胞存活率低;而胰蛋白酶消化法獲得良好穩(wěn)定的分離和培養(yǎng)效果。用0.1％胰蛋白酶消化30min，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色和血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，每克肝重可收集1.47×108個(gè)細(xì)胞，平均存活率為

3、91.43％。培養(yǎng)基和血清濃度均會(huì)影響肝細(xì)胞的貼壁和生長(zhǎng)。在含有10％(V/V)胎牛血清(FCS)M199培養(yǎng)基中，于4％ CO2、28℃培養(yǎng)8-9天并傳代。
　　 2鯉魚(yú)肝細(xì)胞損傷模型和在體肝損傷模型的建立:體外肝細(xì)胞損傷模型:用濃度為0、2、4、8、16和32 mM/mL的CCl4損傷鯉魚(yú)原代肝細(xì)胞，4h后，檢測(cè)肝細(xì)胞的存活率和細(xì)胞上清液中的LDH、GPT、GOT、MDA和SOD。結(jié)果顯示，和對(duì)照組相比，用8、16和32 m

4、M/mL的CCl4處理的細(xì)胞存活率明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，細(xì)胞上清液中的LDH、GPT、GOT、MDA和SOD發(fā)生顯著的變化(P＜0.05或P＜0.01)，而2和4 mM/mL的CCl4對(duì)肝細(xì)胞損傷不明顯。在體肝損傷模型:用濃度為0、12.5％、25％、30％和50％（V/V）的四氯化碳-植物油混合液，按5mL/kg魚(yú)體重的劑量，腹腔注射鯉魚(yú)，注射后的不同時(shí)間收集血清，檢測(cè)肝損傷程度。結(jié)果顯示，12.5％的CCl4對(duì)肝組

5、織沒(méi)有的影響，50％的CCl4會(huì)使鯉魚(yú)致死，25％和30％的CCl4均能造成嚴(yán)重的肝損傷。在體外采用8mM/mL的CCl4作用4h建立肝細(xì)胞損傷模型;在體內(nèi)，以30％的CCl4損傷肝組織72h建立肝損傷模型。
　　 3黃芪多糖對(duì)鯉魚(yú)肝損傷的影響:分別利用8mM/mL的四氯化碳作用肝細(xì)胞4h及腹腔注射30％四氯化碳-植物油混合液5mL/kg來(lái)構(gòu)建鯉魚(yú)的離體肝細(xì)胞和整體肝損傷模型，通過(guò)檢測(cè)肝細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和肝組織勻漿中LDH、

6、GOT、GPT、MDA、GSH、SOD等生化指標(biāo)的含量及肝細(xì)胞增殖活性來(lái)研究黃芪多糖((Astraga lus polysaccharides, APS)對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝（細(xì)胞）損傷的保護(hù)和抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:黃芪多糖可抑制四氯化碳損傷引起的肝細(xì)胞培養(yǎng)上清中GPT、GOT、LDH活性和MDA含量的升高，顯著提高SOD及肝細(xì)胞的存活率(P＜0.05或P＜0.01);同時(shí)在體內(nèi)試驗(yàn)中，黃芪多糖可以顯著降低四氯化碳損傷導(dǎo)致的血清中