枸杞多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)建鯉肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、肝臟是魚類的主要解毒器官，大部分外源及內(nèi)源性物質(zhì)在肝臟內(nèi)進(jìn)行代謝，因此極易受到多種肝毒物的損害。研究表明，許多化學(xué)物質(zhì)可以導(dǎo)致魚類的肝損傷。近年來，以肝膽體積及顏色異常為特征的“肝膽綜合癥”頻被報(bào)道，這是一種非傳染性疾病，發(fā)病率高，影響面積廣，嚴(yán)重影響了水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。目前還沒有有效治療該疾病的藥物，因此，探尋防治魚類肝膽疾病的有效藥物具有非常重要的意義。本實(shí)驗(yàn)通過體外模型及在體模型，探討枸杞多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用。主

2、要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1、精密肝切片厚度及培養(yǎng)基pH對(duì)肝切片活力的影響:設(shè)置切片的厚度(200μm、300μm、400μm及500μm)及培養(yǎng)基pH(6.8、7.0及7.2)，培養(yǎng)0、8、16、24及48小時(shí)后收集培養(yǎng)上清及切片。測(cè)定上清GOT、GPT和LDH活性和肝切片勻漿ATP含量。結(jié)果顯示:切片厚度為300μm，pH為7.0時(shí)，可在培養(yǎng)基中保持活力＞16h，綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，肝切片的制備及培養(yǎng)條件設(shè)定為:300μm，p

3、H7.0。
　　2、肝損傷模型的構(gòu)建:用不同濃度的四氯化碳(4、8、12、16及32 mM)損傷肝切片(300μm)，4h后，收集培養(yǎng)上清及切片。通過ATP含量檢測(cè)肝切片活力，并檢測(cè)培養(yǎng)上清GOT、GPT、AKP、LDH、SOD活性及MDA含量。Western blot測(cè)定肝切片核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)成員c-Rel和p65的蛋白表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，16及32 mM CCl4處理的肝切片活力低，且培養(yǎng)上清中的

4、MDA、GOT、GPT、LDH及AKP酶活力顯著升高(P＜0.05或P＜0.01)，SOD酶活性顯著降低;4、8及12 mM CCl4雖然也導(dǎo)致上述生化指標(biāo)的變化，但是與空白組相比，切片活力變化不大。因此本試驗(yàn)用12 mM CCl4構(gòu)建精密肝切片損傷模型。
　　3、枸杞多糖對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用:體外實(shí)驗(yàn)，用12 mM CCl4誘導(dǎo)建鯉（Cyprinus carpio）肝損傷。損傷前（前處理）、損傷后（后處理）、損傷前后（

5、前后處理）分別用不同濃度的枸杞多糖(0.1、0.3和0.6 mg/mL)進(jìn)行處理，收集培養(yǎng)上清及切片。檢測(cè)培養(yǎng)上清GOT、GPT、LDH、SOD的活性及MDA含量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)測(cè)定切片中TNF-α、IL-1β、IL-6及iNOS mRNA表達(dá)，ELISA法測(cè)定CYP1A、CYP3A、CYP2E1的酶含量變化，Western blot測(cè)定c-Rel和p65的蛋白表達(dá)。在體實(shí)驗(yàn)，將建鯉隨機(jī)分為空白對(duì)照組，模型組，枸杞

6、多糖藥物對(duì)照組，處理組（枸杞多糖0.1％、0.5％、1.0％），連續(xù)飼喂60天后，模型組及處理組按體重0.05 mL/10g腹腔注射30％CCl4—植物油混合液，空白組及藥物對(duì)照組注射植物油，72小時(shí)后收集肝臟及血清，檢測(cè)GOT、GPT、LDH、SOD、MDA、GSH、T-AOC、GSH-PX及CAT等生化指標(biāo)。結(jié)果顯示，枸杞多糖可以顯著提高切片活力及SOD活性，且有效地降低了GOT、GPT、LDH活性和MDA含量;同時(shí)顯著抑制CYP1