人參皂苷Rg1對(duì)四氯化碳急性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的:
　　研究人參皂苷Rg1（ginsenoside Rg1）對(duì)四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷及肝細(xì)胞損傷，是否具有保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　一、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　1建立小鼠CCl4急性肝損傷模型昆明小鼠40只，隨機(jī)分成5組，空白對(duì)照組(NS，0.1mL·10g-1)，模型組(CCl4，0.1mL·10g-1)，人參皂苷Rg1組(10mg·kg-1，20mg·kg-1，40mg

2、·kg-1)，每組8只。每日灌胃給藥，給藥體積為0.1mL·10g-1，連續(xù)7 d，末次給藥2 h后除空白對(duì)照組外，其余組腹腔注射0.2％CCl40.1mL·10g-1。禁食16 h，摘眼球取血，處死小鼠，取肝。
　　2測(cè)定血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）活性以及肝組織勻漿中超氧化物歧化酶（superoxide di

3、smutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的表達(dá)。
　　3 HE染色，觀察肝組織形態(tài)學(xué)的變化。
　　4 Western-blot檢測(cè)肝組織中核因子-κB P65（nuclear transcription factor-Kappa B， NF-κB P65）蛋白表達(dá)變化。
　　5 ELISA法檢測(cè)肝肝組織中腫瘤壞死因子-?（tumor necrosis factor-?，TNF-?）活力

4、的影響。
　　二、體外實(shí)驗(yàn)
　　1建立肝細(xì)胞損傷模型取貼壁生長(zhǎng)的NCTC1469細(xì)胞，分成空白對(duì)照組，CCl4組（2.5、5、10、20、40 mM）。培養(yǎng)24 h后給予不同濃度的CCl4，3 h后檢測(cè)細(xì)胞的存活率。
　　2 MTT法檢測(cè)人參皂苷Rg1（0.1、1、10μM）對(duì)受損細(xì)胞存活率的影響。3測(cè)定NCTC1469細(xì)胞中上清液SOD、MDA水平表達(dá)。
　　4 Western-blot檢測(cè)肝細(xì)胞損傷后，人參皂

5、苷Rg1對(duì)NF-κB P65蛋白表達(dá)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　一、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)
　　1成功建立CCl4急性肝損傷模型：通過HE染色病理組織學(xué)檢查，空白對(duì)照組小鼠肝組織無炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，模型組可見肝內(nèi)大量細(xì)胞壞死。提示急性化學(xué)性肝損傷模型建立成功。
　　2不同濃度的人參皂苷Rg1均能抑制急性化學(xué)性肝損傷小鼠血清ALT、AST濃度的升高，并可降低肝組織勻漿中MDA含量，提高肝組織勻漿中SOD活性，并呈現(xiàn)顯著的劑量一效應(yīng)

6、關(guān)系。
　　3 HE染色結(jié)果顯示，不同濃度的人參皂苷Rg1與模型組相比，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，肝細(xì)胞壞死區(qū)域范圍變小，以高劑量組效果最為明顯。
　　4 Western-blot結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組肝組織中NF-κB P65蛋白表達(dá)明顯增高。不同濃度的人參皂苷Rg1均能顯著抑制NF-κB P65的蛋白表達(dá)，以高劑量組效果最為明顯。
　　5 ELISA結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，模型組肝組織中 TNF-?的含

7、量明顯增高。用人參皂苷 Rg1干預(yù)后肝組織中 TNF-?的含量降低，且隨著濃度的升高， TNF-?的含量越低。
　　二、體外實(shí)驗(yàn)
　　1不同濃度的CCl4對(duì)NCTC1469細(xì)胞存活率的結(jié)果表明，不同濃度的CCl4均能抑制NCTC1469細(xì)胞存活率,且隨著濃度的不斷增加，細(xì)胞存活率逐漸降低。在CCl4濃度為20 mM時(shí)細(xì)胞存活率為53.39%。
　　2 MTT法測(cè)定結(jié)果表明，CCl4誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷后模型組細(xì)胞活性明顯下降

8、，人參皂苷Rg1能恢復(fù)和升高CCl4損傷肝細(xì)胞后的細(xì)胞活性，并呈明顯的劑量依賴性。人參皂苷Rg1（10μM）提高細(xì)胞存活率已達(dá)到84.69％。
　　3人參皂苷Rg1可以顯著增強(qiáng)NCTC1469細(xì)胞上清液中SOD活性，并呈濃度依賴性。并可降低MDA含量具有劑量一效應(yīng)關(guān)系。
　　4 Western-blot結(jié)果顯示，CCl4可顯著增加 NF-κB P65蛋白表達(dá)，而人參皂苷Rg1可拮抗CCl4對(duì)細(xì)胞NF-κB P65蛋白表達(dá)的增