蘇肝清對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　 研究蘇肝清（SGQ）對四氯化碳（CCl4）所致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用，并對其可能的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，為其進(jìn)一步研究和開發(fā)提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1. SGQ的小鼠急性毒性實驗20只小鼠隨機(jī)分為溶媒對照組(Control)組和SGQ組，每組10只：SGQ組小鼠按0.16g·ml-1SGQ的0.5％羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）混懸液(已達(dá)最大溶解濃度)灌胃；Control組給等體積的

2、0.5％CMC-Na；1次/1d，連續(xù)7d，觀察小鼠活動情況及死亡數(shù)量，并作記錄，用公式計算出耐受量倍數(shù)。
　　 2. SGQ對CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用采用CCl4制備小鼠急性肝損傷模型。將小鼠隨機(jī)分為6組，每組10只： Control組、CCl4模型組(Model)、蘇肝清低(SL)、中(SM)、高(SH)劑量組、對照藥聯(lián)苯雙酯組(Bifendate)。SL、SM、SH組分別按125mg·kg-1、250mg·kg-

3、1、500mg·kg-1蘇肝清的0.5％ CMC-Na混懸液灌胃；Bifendate組按150mg·kg-1聯(lián)苯雙酯0.5％ CMC-Na混懸液灌胃；Control、Model兩組小鼠分別灌等體積0.5％ CMC-Na；1次/1d，共7d，末次給藥2h后，除Control組外，其余各組腹腔注射0.1％CCl4花生油溶液，制備小鼠急性肝損傷模型；Control組腹腔注射等體積的花生油。各組取肝臟比較肝指數(shù)的變化；用酶學(xué)方法測定各組肝損傷小

4、鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT/ALT) 、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT/AST)含量；測定肝組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）的含量；HE染色觀察肝組織病理形態(tài)學(xué)的改變；免疫組織化學(xué)法測定肝組織中Caspase-3蛋白表達(dá)的變化；原位末端標(biāo)記(TUNEL)法測肝細(xì)胞凋亡指數(shù)。
　　 結(jié)果:
　　 1.SGQ的小鼠急性毒性實驗經(jīng)計算小鼠灌胃給藥的最大耐受量為6.4g·kg-1SGQ粉末，耐受量倍數(shù)為人用的240

5、倍。
　　 2. SGQ對CCl4致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用2.1 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝臟指數(shù)的影響Model組小鼠肝臟指數(shù)為5.50±0.35％，顯著高于Control組(P<0.01)；SM、SH、Bifendate組肝臟指數(shù)均低于Model組（P<0.05、P<0.01、P<0.01）；SL組P＞0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義， SGQ組作用呈劑量依賴性（rs=-0.632, P<0.01）。
　　 2.

6、2 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝臟生化指標(biāo)的影響Model組小鼠血清ALT、AST含量分別為280.00±33.05、237.91±24.37U/L，明顯高于Control組 (P<0.01)；SL組、SM組、SH組、Bifendate組ALT、AST含量均低于Model組(P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.01)，其中ALT含量分別為Model組的86.8％、59.6％、33.6％、35.6％，且SGQ組作用

7、呈劑量依賴性（rs=-0.943, P<0.01）；AST含量分別為Model組的89.6％、63.6％、38.8％、40.4％，且SGQ組作用呈劑量依賴性（rs=-0.943, P<0.01）。
　　 2.3 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝臟病理形態(tài)學(xué)的影響肉眼可見Control組小鼠肝組織呈鮮紅色，具有較好的光澤，質(zhì)地柔軟而有彈性；Model組小鼠肝臟體積明顯增大，質(zhì)地較硬，SGQ組肝臟大小及顏色界于Control組

8、與Model組之間。HE染色顯示Control組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞索排列規(guī)則，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及形態(tài)正常；Model組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞明顯水腫，氣球樣變，肝小葉內(nèi)灶狀壞死；SGQ組較Model組有不同程度的減輕，以SH組最為明顯。
　　
　　 3. SGQ對CCl4致小鼠急性肝損傷保護(hù)作用機(jī)制的初步探討
　　 3.1 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝組織SOD活力、MDA含量的影

9、響 Model組小鼠肝組織中SOD活力為151.80±25.02U/mgprot，明顯低于Control組(P<0.01)；SH組和Bifendate組SOD活力均高于Model組(P<0.01)，分別為Model組的1.71倍和1.63倍。與SOD趨勢相反，Model組小鼠肝組織中MDA含量為2.70±0.91nmol/mgprot，明顯高于Control組(P<0.01)；SH組和Bifendate組MDA含量均低于Model組(P

10、<0.01)，分別為Model組的33.0％和33.4％。
　　 3.2 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝組織Caspase-3蛋白表達(dá)的影響免疫組織化學(xué)染色顯示，Model組小鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)Caspase-3呈棕黃色彌漫表達(dá)，Control組小鼠個別肝細(xì)胞胞質(zhì)Caspase-3弱陽性表達(dá)。Model組小鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)Caspase-3蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率為27.63±4.21％，顯著高于Control組(P<0.01)，S

11、H組和Bifendate組Caspase-3蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞率明顯降低(P<0.01)，分別是Model組的53.75％和61.82％。
　　 3.3 SGQ對CCl4引起的急性肝損傷小鼠肝細(xì)胞凋亡指數(shù)的影響TUNEL染色顯示，Model組大量的陽性細(xì)胞核呈棕褐色,在視野里彌漫散在， Control組偶見凋亡細(xì)胞，著色較淺。Model組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)為20.11±5.01％，顯著高于Control組(P<0.01)；SH組和Bi

12、fendate組凋亡指數(shù)明顯降低(P<0.01)，分別為Model組的57.93％和70.76％。
　　 結(jié)論:
　　 在本實驗條件下，得出以下結(jié)論：
　　 1. SGQ的小鼠耐受量倍數(shù)大于人日用量100倍以上，說明該藥毒性低，臨床應(yīng)用較安全。
　　 2. SGQ顯著降低 CCl4 所致小鼠急性肝損傷血清中ALT、AST的含量及肝臟指數(shù)，減輕肝臟病理性損傷，從而對肝臟產(chǎn)生保護(hù)作用。
　　 3. S