奧貝膽酸對四氯化碳急性肝損傷的保護作用.pdf

1、目的：法尼脂 X受體是一種配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)節(jié)膽汁酸代謝中發(fā)揮重要作用。本實驗的目的是探討新型法尼脂X受體激動劑--奧貝膽酸在四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷中的保護作用及部分機制。
　　方法：6-8周雄性CD-1小鼠（28-30g）48只，隨機分為8組（每組6只），即CCl4-0h組(即對照組），CCl4-12h組，CCl4-24h組，CCl4-48h組；OCA+CCl4-0h組（即OCA組），OCA+CCl4-12h組，OCA+C

2、Cl4-24h組，OCA+CCl4-48h組。在CCl4-12h、24h、48h組中，給予小鼠單次腹腔注射CCl4（0.15 ml/kg，與橄欖油1:10混合），給藥劑量參照課題組既往試驗研究[1]；在CCl4-0h組中，給予腹腔注射相同劑量的PBS；在OCA+CCl4-12h、24h、48h組中，所有小鼠在給予腹腔注射CCl4（0.15 ml/kg）前1h，12h，24h分別經(jīng)灌胃給藥(OCA，5 mg/kg,溶于PBS中)，OCA與

3、CCl4劑量參照相關(guān)研究[2.3]；OCA+CCl4-0h組中給予小鼠腹腔注射橄欖油前1h，12h，24h分別經(jīng)灌胃給藥(OCA，5 mg/kg）。所有小鼠經(jīng)腹腔注射CCl4后分別在0,12,24和48 h麻醉后處死。稱量小鼠及肝臟重量；收集血清用于檢測生化指標(biāo)；部分肝臟組織迅速放入液氮速凍后于-80℃儲存，用RT-PCR方法檢測相關(guān)炎癥基因的表達，用 WB方法檢測相關(guān)蛋白質(zhì)的表達；另一部分肝臟組織使用4%的多聚甲醛固定后用于組織學(xué)檢查

4、，H&E染色觀察肝臟組織壞死及炎癥，TUNEL觀察肝臟組織凋亡。
　　結(jié)果：經(jīng)過OCA預(yù)處理的小鼠肝臟核蛋白FXR的水平明顯升高，表明OCA能夠激活FXR。（1）OCA預(yù)處理對小鼠肝重的影響：小鼠肝重及肝系數(shù)在給予CCl412h后開始升高并持續(xù)至48h；OCA預(yù)處理后，小鼠肝重及肝系數(shù)明顯降低。（2） OCA預(yù)處理在CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用：CCl4處理后12h小鼠血清ALT開始輕微升高，24h升高最顯著，48h仍有升高；

5、而 OCA預(yù)處理后，血清 ALT較單純CCl4組明顯降低；CCl4組中肝臟壞死面積在12h、24h、48h分別為22%、46%、26%，但在相應(yīng)的OCA預(yù)處理組，肝臟壞死面積顯著減少。（3）OCA預(yù)處理抑制CCl4誘導(dǎo)的肝細(xì)胞凋亡：在CCl4組中，12h組可見少量肝細(xì)胞凋亡，24h組凋亡最明顯；OCA預(yù)處理后可顯著減少肝細(xì)胞凋亡。（4）OCA在 CCl4誘導(dǎo)的急性肝損傷中可以不同程度調(diào)控肝臟促炎因子、抗炎因子、趨化因子等相關(guān)炎癥因子基因

6、的表達：在給予CCl412h后TNF-α和 Il-1β兩種促炎細(xì)胞因子mRNA水平較對照組明顯升高，抗炎因子-IL-4表達輕微上調(diào)，Mcp-1, Mip-2和 Kc三種細(xì)胞趨化因子表達明顯升高；OCA預(yù)處理后，促炎因子及細(xì)胞趨化因子較 CCl4組表達明顯下降，抗炎因子表達明顯升高。（5）OCA預(yù)處理可抑制CCl4急性肝損傷中肝臟 NF-κB信號通路的激活：肝臟胞漿pIκB在給予CCl412h后開始明顯升高，與之相對應(yīng)的胞核中的NF-κB

7、 p65和 p50兩個亞基明顯升高；而在OCA預(yù)處理組胞漿中 IκB磷酸化較CCl4組明顯減少，胞核中NF-κB p65和 p50兩個亞基明顯下降。（6）OCA預(yù)處理可抑制 CCl4急性肝損傷中肝臟 AKT, ERK和p38的磷酸化：肝臟pAKT水平在所有時點較對照組均明顯升高，但OCA預(yù)處理后 AKT的磷酸化明顯減少；pERK水平在給予CCl4后12h開始升高并持續(xù)至24h，pp38水平在給予 CCl4后12h開始升高持續(xù)至48h；O