SM22α與血管炎癥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是一種血管慢性炎癥反應(yīng)疾病。內(nèi)皮損傷誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecell，VSMC)的炎癥應(yīng)答是血管損傷修復(fù)以及內(nèi)膜增生的主要病理基礎(chǔ)。SM22α(smoothmuscle22alpha，SM22α)是一分子量為22kDa的actin結(jié)合蛋白，是VSMC分化早期的標(biāo)志物之一，具有抗增殖，調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激的作用。近期的報(bào)道和我室已往研究證實(shí)，SM22α缺

2、失與血管氧化應(yīng)激和炎癥損傷密切相關(guān)，但其調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮損傷誘發(fā)的炎性反應(yīng)具體機(jī)制尚不清楚。為了探討SM22α對(duì)血管炎性反應(yīng)的影響及其作用機(jī)制，本文從以下幾方面進(jìn)行了研究。
　　 方法與結(jié)果:
　　 1.TNF-α誘導(dǎo)ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)
　　 用貼塊法分離、培養(yǎng)VSMC，取3～5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。傳代培養(yǎng)的VSMC生長至60％～70％匯合時(shí)，給予TNF-α(10ng/ml)孵育不同時(shí)間(6、12、24h)

3、，觀察ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)。Westernblot顯示，處理6h時(shí)，與對(duì)照相比，ICAM-1、VCAM-1表達(dá)開始升高，24h達(dá)到高峰。表明TNF-α誘導(dǎo)ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)，具有時(shí)效關(guān)系。
　　 2.過表達(dá)SM22α抑制TNF-α誘導(dǎo)的ICAM-1和VCAM-1表達(dá)用GFP-SM22α重組腺病毒感染VSMC后，觀察對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的ICAM-1和VCAM-1表達(dá)的影響，Westernblot結(jié)果顯示:S

4、M22α重組腺病毒感染的細(xì)胞有高水平的SM22α表達(dá)，伴有TNF-α誘導(dǎo)的ICAM-1、VCAM-1表達(dá)明顯降低。結(jié)果表明，過表達(dá)SM22α可抑制VSMC的炎性應(yīng)答。
　　 3.過表達(dá)SM22α抑制TNF-α誘導(dǎo)的p65的乙?；?br>　　 用TNF-α處理VSMC不同時(shí)間(0-90min)，觀察對(duì)p65乙?；罨挠绊?。結(jié)果顯示:TNF-α誘導(dǎo)p65乙?；矫黠@升高，60min達(dá)到峰值，為對(duì)照組的10倍。在過表達(dá)SM22α

5、的VSMC，TNF-α誘導(dǎo)的p65乙?；^空載體轉(zhuǎn)染組降低5倍，結(jié)果提示，過表達(dá)SM22α可抑制TNF-α誘導(dǎo)的p65的乙?；?。
　　 4.球囊損傷誘導(dǎo)血管內(nèi)膜增生和炎性相關(guān)蛋白表達(dá)
　　 用大鼠頸總動(dòng)脈球囊損傷模型，進(jìn)一步觀察血管內(nèi)膜損傷后，新生內(nèi)膜中炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，免疫組織化學(xué)染色可見，球囊損傷28d時(shí)，損傷組中ICAM-1、VCAM-1、MMP-2和MMP-9陽性染色的細(xì)胞數(shù)量及單細(xì)胞染色強(qiáng)度均高于假手術(shù)對(duì)

6、照組。
　　 5.血管新生內(nèi)膜細(xì)胞p65乙?；缴?br>　　 免疫組化分析結(jié)果顯示，球囊損傷28d時(shí)，Ac-p65陽性染色的細(xì)胞數(shù)量及單細(xì)胞染色強(qiáng)度均高于對(duì)照組P＜0.05），陽性細(xì)胞主要分布在新生內(nèi)膜層。Westernblot得到相似的結(jié)果，損傷組血管p65乙?；捷^對(duì)照組升高2倍。與細(xì)胞水平的發(fā)現(xiàn)相一致。
　　 6.血管新生內(nèi)膜SIRT1、SM22α表達(dá)下調(diào)
　　 免疫組織化學(xué)染色可見，對(duì)照組的血管

7、中膜可見到大量含有棕色顆粒的SM22α陽性細(xì)胞;而在球囊損傷組的新生內(nèi)膜VSMC中，SM22α陽性染色顆粒顯著減少(P＜0.05)。Westernblot得到相似的結(jié)果，球囊損傷組頸總動(dòng)脈壁中SM22α和SIRT1的表達(dá)水平較對(duì)照組分別降低4.4和2.4倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1.過表達(dá)SM22α抑制TNF-α誘導(dǎo)的粘附分子表達(dá)。
　　 2.過表達(dá)SM22α抑制TNF-α誘導(dǎo)的p65乙?；?。<