SM22α在TGFβ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞表型重塑中的作用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)是非終末分化細(xì)胞,具有表型重塑的特性。SM22α(smooth muscle22 alpha,SM22α)是VSMC分化早期的標(biāo)志基因之一,其表達(dá)具有平滑肌組織特異性和細(xì)胞表型特異性。本研究利用小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)技術(shù)敲低內(nèi)源性SM22α表達(dá),觀察對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforminggrowt

2、h factor,TGFβ)誘導(dǎo)的VSMC細(xì)胞骨架組構(gòu)、氧化應(yīng)激以及分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Krüppel樣因子4(krüppel-like factor4,KLF4)活化的影響。
   方法:用貼塊法分離、培養(yǎng)大鼠VSMC,取3~5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn);用免疫沉淀檢測(cè)KLF4的磷酸化水平;Western blot分析檢測(cè)TGFβ對(duì)SM22α和SMα-actin表達(dá)的影響;用免疫熒光染色顯示細(xì)胞內(nèi)SM22α表達(dá)和定位;用DHE染色確定SM22

3、α在氧化應(yīng)激中的作用。
   結(jié)果:
   1、TGFβ誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)SM22α
   用TGFβ(2 ng/ml)刺激VSMC不同時(shí)間,SM22α、SMα-actin的表達(dá)水平呈時(shí)間依賴性升高。表明TGFβ能誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞SM22α表達(dá)。
   2、SM22α抑制TGFβ誘導(dǎo)的分化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子KLF4磷酸化
   Western blot結(jié)果顯示,TGFβ處理的細(xì)胞,其KLF4的磷酸

4、化水平明顯升高。轉(zhuǎn)染SM22α特異的siRNA敲低內(nèi)源性SM22α表達(dá)后,TGFβ誘導(dǎo)的KLF4磷酸化較對(duì)照組更加明顯。提示SM22α可抑制TGFβ誘導(dǎo)的KLF4磷酸化。
   3、SM22α介導(dǎo)TGFβ誘導(dǎo)的actin應(yīng)力纖維的形成
   免疫熒光染色結(jié)果顯示,TGFβ處理的VSMC應(yīng)力纖維致密、成束,SM22α熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng),沿應(yīng)力纖維分布;而敲低內(nèi)源性SM22α,再給予TGFβ刺激,則細(xì)胞應(yīng)力纖維稀疏,SM22α

5、熒光強(qiáng)度減弱,彌散分布于細(xì)胞漿中。提示SM22α參與了TGFβ誘導(dǎo)的應(yīng)力纖維形成。
   4、SM22α抑制TGFβ誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激
   采用DHE熒光染色法觀察VSMC O2的生成。結(jié)果顯示,TGFβ刺激后,顯示O2-生成的紅色熒光強(qiáng)度增加;敲低內(nèi)源性SM22α,再給予TGFβ刺激,可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)紅色熒光強(qiáng)度更明顯。說(shuō)明TGFβ可誘導(dǎo)VSMC產(chǎn)生氧化應(yīng)激,而SM22α對(duì)該過(guò)程可能具有抑制作用。
   結(jié)論:

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