Notch-1基因下調(diào)誘導(dǎo)GBM腫瘤干細(xì)胞腫瘤細(xì)胞凋亡的試驗(yàn)研究.pdf

1、目的：應(yīng)用RNA干擾技術(shù)(siRNA)介導(dǎo)GBM腫瘤干細(xì)胞Notch-1基因下調(diào)誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞凋亡的研究。
　　 方法：實(shí)驗(yàn)采用無(wú)血清培養(yǎng)基誘導(dǎo)GBM腫瘤干細(xì)胞，同時(shí)對(duì)腫瘤干細(xì)胞分子標(biāo)志CD133和nestine行免疫熒光鑒定；實(shí)驗(yàn)設(shè)以Notch-1為基因靶點(diǎn)的siRNAl、siRNA2、siRNA3實(shí)驗(yàn)組、GAPDHsiRNA陽(yáng)性對(duì)照組、非特異性無(wú)關(guān)序列siRNA陰性對(duì)照組和未轉(zhuǎn)染siRNA的空白對(duì)照組，采用Lepofecta

2、mineTM2000二次轉(zhuǎn)染方法將siRNA轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR定量和Westernblot分別在基因和蛋白水平檢測(cè)siRNA對(duì)Notch-l基因表達(dá)的抑制作用；四唑鹽(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性；AnnexinV/PI法進(jìn)行凋亡分析。
　　 結(jié)果：(1)采用無(wú)血清培養(yǎng)TJ905細(xì)胞可以誘導(dǎo)出腫瘤干細(xì)胞球，腫瘤干細(xì)胞對(duì)CD133和nestine具有免疫反應(yīng)活性；(2)采用LepofectamineTM2000二次

3、轉(zhuǎn)染方法可以高效地將siRNA轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)，化學(xué)合成的siRNA明顯抑制Notch-lmRNA的表達(dá)水平，空白對(duì)照組、陰性對(duì)照組、siRNAl、2、3轉(zhuǎn)染組Notch-lmRNA表達(dá)率分別為1.00±0.05，1.03±0.08，0.25±0.05，0.42士0.050.80士0.02，siRNAl可以明顯的下調(diào)Notch-1蛋白表達(dá)水平；(3)siRNA1轉(zhuǎn)染組MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖活性顯著降低，AnnexinV/PI法凋亡分析顯示細(xì)胞凋