丹參酮Ⅱ-A誘導腫瘤細胞凋亡分子機理研究.pdf

1、目的:1、進一步證實丹參酮Ⅱ-A體外誘導人腫瘤細胞(白血病和肝癌)凋亡的作用;2、應用流式細胞技術分析丹參酮Ⅱ-A對NB4和SMMC-7721細胞周期和凋亡相關基因蛋白表達的影響;3、應用基因芯片技術分析丹參酮Ⅱ-A對NB4細胞凋亡等相關基因RNA表達的影響,探討丹參酮Ⅱ-A作用的分子機理.方法:1、細胞培養(yǎng)和藥物處理:體外培養(yǎng)人急性早幼粒白血病細胞(NB4)和人肝癌(SMMC-7721)細胞系,分別用不同濃度(0.125,0.25,0

2、.5,1.0 mg.L<'-1>)丹參酮Ⅱ-A處理細胞24、48、72、96或120小時后進行細胞計數(shù)和MTT檢測,0.5 mg.L<'-1>丹參酮Ⅱ-A處理NB4和SMMC-7721細胞72或96小時后進行以下指標檢測.2、光鏡、電鏡觀察細胞形態(tài)改變;3、細胞計數(shù)、MTT試驗、集落形成試驗檢測細胞生長和增殖情況;4、瓊脂糖凝膠電泳分析細胞DNA"梯狀"斷裂;5、流式細胞儀檢測細胞周期及凋亡相關基因蛋白表達改變;6、基因芯片技術分析NB

3、4細胞基因表達的改變:無毒劑量的丹參酮Ⅱ-A(0.5 mg.L<'-1>)處理細胞72小時,收集細胞并提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA,再轉(zhuǎn)錄并標記成cRNA(Cy3熒光標記),然后與Express Chip<'TM> H04芯片(包括3360基因點)雜交,最后對芯片進行掃描和數(shù)據(jù)分析(對信號值有2倍以上變化的基因及相應的ID進行對比分析).結(jié)論:1、小劑量丹參酮Ⅱ-A在體外能明顯誘導人急性早幼粒白血病細胞和人肝癌細胞凋亡;2、參酮Ⅱ-