隱丹參酮抗非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　肺癌是世界上死亡率最高的惡性腫瘤之一，其中非小細(xì)胞肺癌發(fā)病率在肺癌發(fā)病率中的比重超過80％。而復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是造成肺癌患者死亡的最主要原因。因此，預(yù)防肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能夠控制腫瘤惡化、提高患者生存質(zhì)量及延長患者壽命。近年來，隱丹參酮作為活血化瘀藥丹參中主要的脂溶性成分二萜醌類化合物，其抗腫瘤活性受到高度重視。本課題選用2種人非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞株，首先檢測了其整合素和E-cadherin的表達(dá)情況，進(jìn)而研究隱丹參

2、酮對非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞生長、侵襲遷移、細(xì)胞周期分布的影響，探討整合素和E-cadherin在人非小細(xì)胞肺癌轉(zhuǎn)移過程中的作用，為非小細(xì)胞肺癌的治療提供新的靶點，為隱丹參酮治療肺癌奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）采用流式細(xì)胞術(shù)檢測非小細(xì)胞肺癌A549、H460細(xì)胞中E-cadherin和β-integrin的表達(dá)。
　?。?）以5、10、15、20、30、40、60μmol/L的隱丹參酮作用于體外培養(yǎng)

3、的非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞24h后，采用MTT法檢測隱丹參酮對A549和H460細(xì)胞增殖活性的改變。
　　（3）以10、30、50μmol/L的隱丹參酮作用于體外培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞24h后，采用劃痕實驗和Transwell實驗分析隱丹參酮對非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞侵襲遷移能力的改變。
　　（4）以40μmol/L的隱丹參酮作用于體外培養(yǎng)的非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞48h后，采

4、用流式細(xì)胞術(shù)檢測隱丹參酮對非小細(xì)胞肺癌A549和H460細(xì)胞周期的進(jìn)程及E-cadherin和β整合素表達(dá)情況的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）A549細(xì)胞中β-integrin的平均熒光強度 MFI明顯比 H460細(xì)胞的高;兩細(xì)胞中E-cadherin的表達(dá)差異不大。經(jīng)流式細(xì)胞儀篩選出整合素高表達(dá)瘤株 A549和整合素低表達(dá)瘤株 H460。
　　（2）MTT檢測結(jié)果顯示，隱丹參酮濃度超過5μmol/L即可對兩細(xì)胞均呈現(xiàn)

5、有效抑制增殖作用，并隨藥物濃度的增加，細(xì)胞存活率明顯下降。當(dāng)劑量超過20μmol/L，效果未見明顯加強。隱丹參酮抑制A549和H460細(xì)胞增殖的IC50分別為（31.59±1.25）μmol/L和（42.45±0.75）μmol/L，隱丹參酮對整合素高表達(dá)瘤株 A549的增殖抑制作用更顯著。
　?。?）劃痕實驗顯示，實驗組隨隱丹參酮的濃度升高，細(xì)胞的劃痕愈合速度減慢，細(xì)胞遷移能力受到了顯著抑制，劃痕寬度與對照組相比差異明顯。

6、>　　（4）Transwell實驗顯示，A549和H460細(xì)胞經(jīng)隱丹參酮作用后，腫瘤細(xì)胞的體外侵襲能力明顯下降。A549細(xì)胞實驗結(jié)果：對照組細(xì)胞數(shù)為129.45±14.26個，實驗組10、30、50μmol/L細(xì)胞數(shù)分別為85.36±11.22、45.82±7.32、36.21±3.12個。H460細(xì)胞實驗結(jié)果：對照組細(xì)胞數(shù)為145.35±13.48個，實驗組10、30、50μmol/L細(xì)胞數(shù)分別為96.25±13.46、55.35±8

7、.42、45.21±5.32個。通過比較透膜細(xì)胞數(shù)可知，隨隱丹參酮劑量增加，透膜細(xì)胞數(shù)減少，且隱丹參酮對整合素高表達(dá)瘤株 A549的侵襲抑制率更高。
　?。?）流式細(xì)胞術(shù)顯示，A549和H460細(xì)胞經(jīng)隱丹參酮作用后,細(xì)胞周期阻滯于G1期,G1期細(xì)胞比例上升,S期細(xì)胞比例下降。與對照組相比,隱丹參酮干預(yù)后的A549、H460細(xì)胞表面 E-cadherin的表達(dá)上調(diào)，β-integrin的表達(dá)下降。
　　結(jié)論：
　　本課題