腫瘤干細(xì)胞的分離鑒定.pdf

1、原創(chuàng)性聲明】8S9162本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。|學(xué)位論文作者：厲狁日物1年學(xué)位論文使用授權(quán)聲明萬月7日)本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文

2、的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。，學(xué)位論文作者：日易月7日I鄭州人學(xué)博Ij論文摘要摘要研究背景與目的：近年來研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中

3、存在一群具有自我更新以及多向分化等一系列正常干細(xì)胞特征的細(xì)胞，它們具有自己特異表達(dá)的分子，這群細(xì)胞被命名為腫瘤干細(xì)胞(cancerstemcelisortumorstemcells，CSCsorTSCs)。盡管腫瘤于細(xì)胞在腫瘤組織中所占比例很低，但它們具有很強(qiáng)的致瘤性，對放療、化療不敏感，是腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。SP細(xì)胞(sidepopulationcell，SPcell，側(cè)群細(xì)胞)是利用DNA熒光染料Hoechst33342和流式細(xì)胞

4、技術(shù)發(fā)現(xiàn)的特殊細(xì)胞亞群，這群細(xì)胞利用細(xì)胞膜上的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子家族蛋白將Hoechst33342泵出細(xì)胞，它們具有自我更新、多向分化等一系列干細(xì)胞的生物學(xué)特征。目前已經(jīng)在多種正常組織和一些實(shí)體腫瘤中分離得到了SP細(xì)胞，初步闡明了SP細(xì)胞的一系列生物學(xué)特征。并非所有的SP細(xì)胞都是干細(xì)胞，SP細(xì)胞只是富含了干細(xì)胞，在SP細(xì)胞中具有最強(qiáng)泵出Hoechst33342能力的細(xì)胞被稱為“Tip“SP細(xì)胞，它們富含了最多的干細(xì)胞。食管癌(Esophage

5、alcarcinoma)是中國的發(fā)病率很高的腫瘤，但是迄今為止對食管癌干細(xì)胞的研究仍未見報(bào)道。本研究擬通過對食管癌細(xì)胞系中“Tip“SP細(xì)胞的研究，了解食管癌干細(xì)胞的生物學(xué)特征，為食管癌的有效靶向性治療提供新思路。肺癌是世界發(fā)病率第一的腫瘤，盡管有文獻(xiàn)報(bào)道CDl33是肺癌的干細(xì)胞標(biāo)記，但目前對其生物學(xué)特性仍了解甚少。本研究應(yīng)用我們首創(chuàng)的原代腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)新方法建立原代培養(yǎng)的肺癌細(xì)胞系，在此基礎(chǔ)上分離鑒定肺癌干細(xì)胞標(biāo)記，為深入研究它們的生物

6、學(xué)特性打下基礎(chǔ)。研究方法：對數(shù)生長期的食管癌細(xì)胞系用Hoechst33342染色，對比維拉帕米抑制試驗(yàn)，在流式細(xì)胞儀上設(shè)門Hoechst33342熒光陽性的非SP細(xì)胞(nonsidepopulationcell，NSPcell)和熒光陰性／弱陽性的SP細(xì)胞群。然后無菌分選收集NSP細(xì)胞和熒光表達(dá)最弱的“Tip”SP細(xì)胞，研究他們生物學(xué)性狀的差異，包括對比它們的平板克隆形成能力，分析它們的自我更新和多向分化能力，用WesternBlot檢