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文檔簡介
1、腺病毒5型是一種十分有效的基因治療載體,廣泛應(yīng)用于體內(nèi)體外的基因治療實驗。腺病毒5型能夠感染很多細胞,包括分裂細胞和靜止細胞。它的侵入機制主要包括兩個階段。首先,腺病毒以其knob蛋白和柯薩奇腺病毒受體(coxsackie adenovirus receptor,CAR)結(jié)合,錨定在細胞表面;然后,其五鄰體基底部(Penton base)再與整合素結(jié)合,整合素作為輔助分子介導(dǎo)了病毒內(nèi)吞進入內(nèi)涵體小泡。整個過程中,knob起了粘附病毒的作
2、用,五鄰體起了內(nèi)化病毒的作用,它們隔司其職,相互配合,兩者對腺病毒的感染至關(guān)重要。 腺病毒用于基因治療的一個主要問題是缺乏靶向性。為了解決這個問題,一個經(jīng)常采用的策略是在knob上進行靶向改造,使它不與CAR結(jié)合,而與目標受體結(jié)合。為了研究knob的結(jié)構(gòu)與功能,本研究表達了knob,CAR并制備了knob的單克隆抗體。 本研究利用大腸桿菌BL21(DE3)表達了knob蛋白。通過Ni2+-NTA系統(tǒng)的純化,純度可達95%
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