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文檔簡(jiǎn)介
1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus)屬于圓環(huán)病毒科,圓環(huán)病毒屬。病毒分為PCV1和PCV2兩種,其中PCV1無(wú)致病性,PCV2對(duì)豬具有致病性,可導(dǎo)致斷奶仔豬發(fā)熱、生長(zhǎng)不良、呼吸障礙、母豬流產(chǎn)等臨床癥狀,而且可引起免疫抑制,容易繼發(fā)或并發(fā)其他疾病,給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了非常大的經(jīng)濟(jì)損失。為進(jìn)一步研究PCV(尤其是PCV2)在我國(guó)的流行性,本研究針對(duì)PCV衣殼蛋白進(jìn)行了以下研究: 根據(jù)GanBank 中已發(fā)表的Ⅰ型豬圓環(huán)病
2、毒(PCV1 U49186株)、Ⅱ型豬圓環(huán)病毒(PCV2 DQ104422株)全基因組序列,各設(shè)計(jì)一對(duì)引物,以JS分離株病毒為材料,用PCR分別擴(kuò)增出病毒衣殼蛋白PCV1-Cap、PCV2-Cap編碼基因片段,擴(kuò)增的DNA片段大小約為579bp,與預(yù)期大小相同。將擴(kuò)增的PCV1-Cap、PCV2-Cap基因片段分別克隆到pGEM-T Easy載體中,經(jīng)酶切鑒定證實(shí)為目的基因。再將克隆后的PCV1-Cap、PCV2-Cap基因片段分別定向
3、克隆入pGEX-6P-1質(zhì)粒載體,獲得重組質(zhì)粒pGEX-PCV1和pGEX-PCV2。重組菌裂解物的SDS-PAGE分析證明,含有重組質(zhì)粒pGEX-PCV1或含有重組質(zhì)粒pGEX-PCV2的大腸桿菌BL21均分別能夠表達(dá)分子量約為48ku的融合蛋白,從而為研制PCV單克隆抗體提供了抗原。 利用提取研究一中制備的融合蛋白GST-PCV2為抗原免疫BALB/c小鼠(免疫時(shí)間分別為8周齡、10周齡、12周齡)。最后一次免疫3天后,取其
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