豬圓環(huán)病毒Ⅱ型Cap蛋白單克隆抗體的制備和鑒定.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcine circovirus)屬于圓環(huán)病毒科，圓環(huán)病毒屬，它有兩個(gè)血清型：PCV1和PCV2。PCV1廣泛存在于豬體內(nèi)和豬源傳代細(xì)胞系，無致病性；PCV2不僅可以感染豬引起原發(fā)性的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PWMS)，還可以侵害豬的免疫系統(tǒng)，引發(fā)仔豬A2型先天性震顫(CT)、成年豬皮炎腎炎綜合征(PDNS)和呼吸道疾病綜合(PRDS)，對(duì)世界養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重，因而世界各國(guó)都非常重視對(duì)PCV2的研究。PCV2有兩個(gè)主要的

2、閱讀框ORF1和ORF2。其中ORF2編碼的Cap蛋白是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有型特異性，因此，豬圓環(huán)病毒Ⅱ型Cap蛋白單克隆抗體對(duì)PCV2的鑒別診斷有重要意義。本實(shí)驗(yàn)的目的就在于用原核表達(dá)的純化復(fù)性后的PCV2-Cap融合蛋白免疫小鼠，制備針對(duì)Cap蛋白的穩(wěn)定的、高特異的單克隆抗體。試驗(yàn)結(jié)果如下： 1.將已經(jīng)構(gòu)建好的原核表達(dá)載體在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了SDS-PAGE分析，結(jié)果表明該重組蛋白大小約為45ku，與預(yù)

3、期結(jié)果一致。利用His-bind親和層析純化表達(dá)的重組蛋白，經(jīng)紫外線吸收法檢測(cè)表明，重組蛋白的濃度約為5mg/mL。 2.用純化的重組蛋白免疫小鼠，取其脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞SP2/0進(jìn)行融合，經(jīng)間接ELISA篩選及連續(xù)3次亞克隆，獲得了三株能穩(wěn)定分泌抗PCV2-Cap蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞：1C7A4，4F3F5和4G8F7。雜交瘤細(xì)胞株經(jīng)凍存、復(fù)蘇及連續(xù)傳代后仍能穩(wěn)定分泌單抗，細(xì)胞染色體數(shù)目均在98～103之間。