芒果苷改善高果糖所致HepG2細胞內(nèi)甘油三酯沉積的作用機制研究.pdf

1、目的：
　　非酒精性脂肪肝是非酒精性脂肪肝病的標志，可發(fā)展成為嚴重的肝病，近年來發(fā)病率持續(xù)上升，嚴重危害國民身體健康，但是對于非酒精性脂肪肝目前尚無針對性的化學合成藥物，而中醫(yī)藥卻在越來越多的臨床應用中凸顯了優(yōu)勢。
　　芒果苷是一種從傳統(tǒng)中草藥提取的活性成份，廣泛被用于抗炎抗病毒、抗腫瘤、糖尿病、肥胖等疾病，但其作用機理尚不清楚。本實驗采用人肝癌細胞株HepG2細胞模型研究芒果苷對高果糖誘導的肝細胞甘油三酯沉積的作用及機制，

2、旨在為芒果苷防治非酒精性脂肪肝提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　DMEM低糖(1g/L葡萄糖)條件下培養(yǎng)的HepG2細胞分為對照組(1g/L葡萄糖，無果糖)、果糖組(1g/L葡萄糖+30mmol/L果糖)、果糖+芒果苷組(同時加入葡萄糖濃度1g/L+30mmol/L果糖+不同劑量的芒果苷，使其藥物終濃度分別為6.25μmol/L、12.5μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)

3、，藥物干預24h之后，MTT試驗尋找最適藥物濃度范圍，在最適藥物濃度范圍下，油紅O染色法觀察細胞內(nèi)脂滴的沉積情況，甘油三酯酶法測定細胞內(nèi)甘油三脂(TG)的含量，Real-time PCR檢測碳水化合物反應元件結(jié)合蛋白(ChREBP)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c(SREBP-1c)、肝型丙酮酸激酶（LPK）、二脂酰甘油酰基轉(zhuǎn)移酶2（DGAT-2）mRNA表達的變化。采用SPSS19.0統(tǒng)計分析軟件對所有數(shù)據(jù)進行處理，以均值±標準誤(?x±s

4、)表示，多組均數(shù)比較采用單因素方差分析，各組間兩兩多重比較采用LSD檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示當芒果苷的濃度低于50μmol/L時，細胞活力幾乎不受影響，當芒果苷濃度高于50μmol/L時，隨著藥物濃度的升高，細胞的活力明顯下降，所以為了排除藥物毒性對細胞活性的影響，我們后續(xù)試驗采用50μmol/L以下濃度的芒果苷進行實驗。
　　2.油紅 O染色結(jié)果顯示，與對照組相比，

5、果糖組細胞內(nèi)的脂滴數(shù)量明顯增多；較低劑量的芒果苷(6.25μmol/L和12.5μmol/L)對果糖導致的細胞內(nèi)脂滴的沉積無明顯改變，較高劑量的芒果苷(25μmol/L和50μmol/L)使細胞內(nèi)的脂滴數(shù)量明顯減少，以50μmol/L芒果苷改善效果最顯著。
　　3.甘油三酯酶法測定細胞內(nèi)TG的含量，結(jié)果顯示與對照組相比，果糖組細胞內(nèi)甘油三酯含量明顯升高(P<0.05)，低劑量的芒果苷對果糖導致的細胞內(nèi)脂滴的沉積無影響，而較高劑量的

6、芒果苷(25μmol/L和50μmol/L)干預24h后，細胞內(nèi)TG含量降低(與果糖組比較，P<0.05)，從藥物劑量上來看，以50μmol/L藥物劑量改善作用最顯著。
　　4.Real-time PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，果糖組 HepG2細胞ChREBP、SREBP-1c、LPK、DGAT-2 mRNA明顯升高，50μmol/L芒果苷能夠下調(diào)HepG2細胞ChREBP、LPK、DGAT-2 mRNA的高表達(P<0.05)