Daxx對HepG2細胞內膽固醇含量的影響及機制探討.pdf

1、目的：觀察Daxx（Fas death domain-associated protein）功能片段和Daxx全長的真核表達載體對細胞內膽固醇含量的影響并探討其機制。為防治高脂血癥以及由其引發(fā)的急性冠脈事件尋求新途徑。
　　方法：將帶有Fas死亡結構域相關蛋白功能片段(pCDNA3.1（+）/Daxx/DM(626-740))和Daxx全長的真核表達載體(pCDNA3.1（+）/Daxx)分別穩(wěn)定轉染HepG2細胞。RT-PCR和

2、Western Blot方法分別鑒定穩(wěn)定細胞株是否建立成功。酶熒光法和HPLC（High Performance Liquid Chromatography）法觀察細胞內膽固醇含量變化；激光共聚焦法檢測Daxx與雄激素受體（androgen receptor, AR）的結合情況；RT-PCR和Western Blot方法檢測細胞中SREBP裂解活化蛋白（SREBP cleavage-activating protein,SCAP）和膽固

3、醇調節(jié)元件結合蛋白（sterol regulatory element binding proteins, SREBP）的mRNA和蛋白表達情況。
　　結果：pCDNA3.1（+）/Daxx/DM(626-740)和 pCDNA3.1（+）/Daxx穩(wěn)定轉染HepG2細胞后，激光共聚焦結果顯示Daxx與AR在胞漿胞核中的表達和共定位均增強；酶熒光法和HPLC法觀察到細胞內膽固醇含量降低；RT-PCR和Western Blot法檢測